断奶仔猪日粮中添加蜂毒素—死亡素重组抗菌肽的饲喂试验

试验旨在探索蜂毒素—死亡素重组抗菌肽(MT-W)对断奶仔猪血清免疫指标、免疫器官发育状况以及生长性能的影响,选用22日龄断奶仔猪64头,随机分为2组,每组内设置4个重复组。试验预试期7d,正式试验期有15d。从15日龄开始使用断奶仔猪专用饲料(基础日粮)饲喂7d后,试验组在基础日粮中添加MT-W(1kg/t饲料),结果显示,在日粮中添加1 kg/t MT-W,仔猪的平均日采食量提高了16.67%(P<0.05),平均日增重提高了18.54%(P<0.05),饲料增重比降低了1.67%(P<0.05),同时仔猪腹泻率显著下降;促进了断奶仔猪的免疫器官发育,其中肝脏指数提高了10.91%(P<0.05),胸腺指数提高了24.42%(P<0.05),脾脏指数提高了24.09%(P<0.05),血清IgG含量提高了11.47%(P<0.05);结果表明,在日粮中添加MT-W可提高仔猪的生长性能,并显著降低其腹泻率;促进仔猪的免疫器官发育,提高其免疫水平;提高仔猪清除体内自由基能力,减小自由基对机体的伤害,提高其抗氧化应激能力。

湖羊对天蚕素抗菌肽的响应

[目的]研究饲粮中添加天蚕素抗菌肽对湖羊生长性能、血清免疫指标和抗氧化功能,及瘤胃菌群结构的影响。[方法]选取36只5月龄体重相近(33.47 kg±1.24 kg)的湖羊公羊随机分为2组,每组3个重复,每个重复6只羊。对照组(CON)饲喂基础饲粮;抗菌肽组(AMP)在基础饲粮中添加0.5 g/kg天蚕素抗菌肽。经过30 d饲养试验后采集血清样本和瘤胃液样本,测定羊的生长性能、血清免疫球蛋白、细胞因子含量和抗氧化功能以及瘤胃液菌群结构。[结果]AMP组湖羊的终末体重和平均日增重(ADG)显著高于CON组(P<0.05),料重比(F/G)显著低于CON组(P<0.05);AMP组湖羊血清中免疫球蛋白G(IgG)、IgM水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)显著高于CON组(P<0.05),白细胞介素-6(IL-6)和抗肿瘤因子-α(TNF-α)水平显著低于CON组(P<0.05);饲粮中添加天蚕素抗菌肽对湖羊瘤胃菌群丰富度指数Sobs指数、Chao1指数和Ace指数,以及多样性指数Shannon指数和Simpson指数均无显著影响(P>0.05);AMP组湖羊瘤胃变形菌门和克里斯滕森菌属相对丰度均显著低于CON组,瘤胃Bacteroidales_RF16_group和norank_f__F082菌属以及NK4A214_group菌属相对丰度显著高于CON组(P<0.05)。[结论]饲粮中添加0.5 g/kg天蚕素抗菌肽有利于提高育肥湖羊生长性能,增强免疫和抗氧化性能,降低炎症因子分泌水平,并且可以减少瘤胃有害细菌丰度,调节瘤胃微生物结构。

四联鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ毕赤酵母重组质粒构建及其表达

利用重组毕赤酵母表达四联鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ以实现高效制备。根据鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ的氨基酸序列,以及胰弹性蛋白酶和羧肽酶A的特异性裂解位点,设计四联鲎抗菌肽(4Tp Ⅱ)序列,按照毕赤酵母密码子偏好性进行优化,经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后构建重组质粒pPICZαA-4Tp Ⅱ,电转至毕赤酵母X-33,利用Zeocin抗性筛选阳性转化子,经甲醇诱导表达后SDS-PAGE分析。成功构建重组质粒pPICZαA-4Tp Ⅱ,并筛选出阳性转化子,经30℃、250 r/min、1%甲醇诱导表达5 d后,获得重组蛋白,可为高效制备鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅱ奠定基础。

抗菌肽F1高产菌株筛选鉴定及其对多重耐药菌生物膜形成的抑制作用

该研究以L.paracasei subsp.Tolerans FX-6为出发菌株,经过^(60)Coγ射线辐照诱变,筛选出一株高产抗菌肽F1的突变菌株(菌26)。对菌26进行16S rDNA序列比较分析发现其与FX-6具有高度相似性。进一步对菌26的牛奶发酵粗提物进行分离纯化,成功富集抗菌肽F1。通过抑菌实验发现,菌26的牛奶发酵粗提物对E.coli的最低抑菌质量浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)为3.16 mg/mL,较FX-6牛奶发酵粗提物的MIC降低了75%,同时抗菌肽F1的产量也提高了3.03倍,初步推断抗菌肽F1质量浓度与菌株的抑菌活性之间可能存在正相关关系。前期研究已经发现抗菌肽F1对黏菌素耐药大肠杆菌SHP45的MIC为320.0μg/mL,该实验进一步研究表明当抗菌肽F1的质量浓度达到2×MIC时,可抑制50%以上的黏菌素耐药大肠杆菌SHP45生物膜的形成。基于以上研究结果表明,菌26比出发菌株具有更高的产抗菌肽F1能力,且抗菌肽F1对黏菌素耐药大肠杆菌SHP45的生物膜形成具有显著的抑制作用。该研究为高产抗菌肽菌株的获得提供研究思路,并有望为多重耐药细菌感染的防控提供物质基础。

鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2的表达及其抗菌特性

为建立鼠李糖乳杆菌细菌素替抗、防腐应用平台,探究鼠李糖乳杆菌细菌素的抗菌特性,利用DNASTAR软件对鼠李糖乳杆菌细菌素进行全基因序列分析,确定了鼠李糖乳杆菌细菌素的主要调控基因为wo-a/2,利用原核表达的方法表达细菌素WO-A/2,并对WO-A/2的可溶性、诱导表达条件、免疫原性、溶血活性、抑菌特性进行了分析。结果表明,作者成功构建了pET-32a-wo-a/2质粒,表达了鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2,其主要以包涵体的形式存在。当表达pET-32a-wo-a/2质粒的菌株接种于含Amp^(+)的LB液体培养基中培养,以终浓度1.0 mmol/L的IPTG诱导8 h后,细菌素WO-A/2的表达量最大。通过双层牛津杯血琼脂平板法验证表明,不同浓度的鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2均无溶血活性。采用双荧光染色法,通过激光共聚焦显微镜观察到细菌素WO-A/2可促使金黄色葡萄球菌凋亡。该研究为鼠李糖乳杆菌细菌素成为安全可靠的生物替抗剂提供了依据。

鲎素抗菌肽的分子结构稳定性及生物活性

为了实现鲎素这种高效、广谱的抗菌肽在生产实践中的应用,采用不同温度、pH值、体外蛋白酶（胃蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶B）分别处理鲎素,通过检测鲎素最小抑菌浓度（M IC）的变化来衡量鲎素的生物活性稳定性;采用高效液相色谱（HPLC）检测鲎素残留量,通过HPLC图谱变化来评定鲎素分子结构的稳定性.结果表明：温度小于120℃、pH值小于11.30时,鲎素对大肠杆菌K88的M IC为1.25～5.00mg/L;高效液相色谱检测得鲎素残留量在65.46～70.21μg之间;鲎素对胃蛋白酶的作用表现出很高的稳定性,对胰蛋白酶、羧肽酶B、弹性蛋白酶的作用稍微敏感;在胃蛋白酶酶活浓度不高于5.33mmol/（s.L）、胰蛋白酶酶活浓度不高于0.67mmol/（s.L）、羧肽酶B酶活浓度不高于0.17mmol/（s.L）、弹性蛋白酶酶活浓度不高于0.021mmol/（s.L）的条件下,鲎素仍具有活性.这说明鲎素抗菌肽具有较强的高温耐受性,在酸性条件下具有稳定性,且具有一定的耐受蛋白酶降解的能力.

鲎素抗菌肽多效协同抗菌机理的初步研究(英文)

为了研究鲎素的抗菌机制,采用紫外吸收法检测细菌与鲎素共同孵育前后大分子泄漏情况;采用透射电镜观察细菌和鲎素共同孵育前后细菌形态和结构的变化;采用紫外吸收法和凝胶电泳技术观察鲎素对细菌基因组DNA和质粒DNA结构的影响。结果表明,经鲎素处理的细菌,胞内生物大分子泄漏显著,细胞壁膜遭到不同程度的破坏;鲎素可与细菌基因组DNA和质粒DNA结合,高浓度鲎素可以使DNA发生断裂,进而使质粒DNA复制和转录功能受到抑制。由此可初步得出结论:鲎素抗菌肽抗菌机理是一种协同作用,包括使细菌细胞膜通透性发生变化、作用细胞质内生物功能物质、结合细胞遗传物质DNA、抑制复制转录等多效的协同的作用机制。

蜂毒素-死亡素重组抗菌肽的小鼠毒性试验

本试验旨在探索蜂毒素-死亡素重组抗菌肽(MT-W)对昆明小鼠的毒性影响。试验通过小鼠口服急性毒性试验和口服生物利用度试验,研究了MT-W对小鼠主要脏器的影响,并检测了血液中碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等生化指标,并对MT-W的体内吸收情况进行了检测。结果显示,MT-W在试验设定浓度下,对试验小鼠的体重、器官/体重比率没有显著影响,血液生化指标与对照组也无统计学差异;在按照50 mg/kg体重给实验小鼠灌服MT-W溶液后,在血浆中未检测到MT-W。研究表明,MT-W对小鼠没有明显毒副作用,MT-W在口服后未被有效吸收。

抗菌脂肽表面活性素在提高断奶仔猪生产性能中的应用

抗菌脂肽表面活性素(Surfactin)具有广谱杀菌性、无毒副作用、无免疫原性和不产生耐药性等特点,对有害细菌、病毒、寄生虫和支原体等具有较强的杀灭作用。在断奶仔猪养殖中应用Surfactin可降低腹泻率,促进消化,促进生长,提高免疫力,防止抗氧化损伤,抗炎和抗肿瘤。文章综述Surfactin作为饲料防腐剂和油脂乳化剂的应用方式及其在断奶仔猪生产中的应用,为Surfactin在断奶仔猪生产中的进一步应用提供参考。

小分子海洋抗菌肽鲎素Ⅰ里氏木霉表达系统构建

为实现鲎素Ⅰ基因的高效表达,以对鲎素Ⅰ敏感度较低的里氏木霉为宿主,构建鲎素Ⅰ里氏木霉表达系统。根据里氏木霉偏爱密码子优化合成鲎素Ⅰ基因,构建鲎素Ⅰ-里氏木霉组成型表达载体pAN-PSGT-Tac,经PEG介导转化至里氏木霉原生质体,PCR法鉴定重组子基因型。基因型鉴定和基因测序检测显示,鲎素Ⅰ基因成功重组到里氏木霉基因组DNA上,因此本研究成功构建了鲎素Ⅰ里氏木霉表达系统。

抗菌肽鲎素的研究进展

已报道的抗菌肽鲎素(tachyplesins,TPs)共分5种,均由鲎血细胞分离产生,是鲎先天免疫系统的重要功能物质,为鲎机体抵抗病原物入侵提供天然防御屏障。近30年的研究表明,TPs抗菌肽显示出广谱生物活性、较低正常细胞毒性、不易产生微生物抗性等特点,作为一种全新型的肽类药物备受关注。文中主要从TPs的分子结构,对微生物、藻类细胞、肿瘤细胞及一些病毒的抑杀活性,作用机制,以及工程表达情况等方面进行介绍,综述TPs的应用前景,并对当前研究瓶颈进行评述。

鲎素抗菌肽对海兰褐蛋鸡生产性能、蛋品质及血液激素水平的影响

为了给鲎素抗菌肽作为饲料添加剂在家禽无抗养殖中的应用提供理论依据,试验选取385日龄海兰褐商品蛋鸡600只,随机分为Ⅰ组(对照组)和Ⅱ组,Ⅰ组饲喂基础日粮,Ⅱ组在基础日粮中添加浓度为0.01 L/kg的鲎素抗菌肽,试验期为35 d,测定生产性能、蛋品质和血液激素水平以及排泄物含氮量。结果表明:Ⅱ组的产蛋率比Ⅰ组提高了2.13%(P<0.05)。与Ⅰ组相比,Ⅱ组血液孕酮和促黄体素含量分别提高了1.06%和1.75%(P>0.05),雌二醇和促卵泡素含量分别提高了14.21%和13.43%(P<0.05),蛋壳强度提高了15.47%(P<0.05),排泄物含氮量降低了38.71%(P<0.05)。说明鲎素抗菌肽能延缓产蛋后期蛋鸡产蛋率的下降幅度,对改善鸡蛋品质和降低鸡舍内NH3浓度有一定的促进作用。

天蚕素抗菌肽对僵猪生长性能的影响

天蚕素抗菌肽具有抗菌谱广、抗菌强度高、不产生耐药性、不破坏生物体细胞(即无毒副作用)、无免疫原性等特点,在很大程度上避免了抗生素的弊病,因此越来越受到人们的重视和关注。因此,这里介绍了天蚕素抗菌肽的化学结构、来源、生物学效应,并用试验方法证明了天蚕素抗菌肽对改善僵猪生长性能具有显著的效果。

生物抗菌多肽辅助治疗Ⅲ期牙周炎的短期疗效观察

目的探讨生物抗菌多肽在辅助治疗Ⅲ期牙周炎患者中的疗效。方法将51例患者根据治疗方式随机分为单纯机械刮治组、盐酸米诺环素组和生物抗菌多肽组,3组患者均进行牙周序列治疗,超声龈上洁治后进行刮治、根面平整、抛光、冲洗。盐酸米诺环素组、生物抗菌多肽组分别于治疗后的牙周袋内注入盐酸米诺环素软膏及生物抗菌多肽牙周凝胶,单纯机械刮治组不用药。记录基线及治疗后90 d的牙周检查表,比较3组间牙周探诊深度(probing depth,PD)、牙龈出血指数(bleeding index,BI)、附着水平(attachment level,AL)差异;收集3组基线、治疗后7 d、治疗后90 d的龈沟液,利用酶联免疫吸附法(enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELSIA)检测肿瘤坏死因子⁃α(tumour necrosis factor⁃α,TNF⁃α)、白细胞介素(interleukin,IL)⁃1β变化。结果基线时,3组牙周临床检查指标(PD、BI、AL)以及龈沟液中TNF⁃α、IL⁃1β含量差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后7 d及90 d,3组各项指标均较治疗前改善;分层分析发现,在PD≤5 mm的牙周袋中,3组间各项指标差异无统计学意义;在PD≥6 mm的牙周袋中,盐酸米诺环素组、生物抗菌多肽组各项指标差异无统计学意义,但均优于单纯机械刮治组。结论牙周基础治疗为Ⅲ期牙周炎的重要治疗手段,对有PD≥6 mm的深牙周袋患者而言,盐酸米诺环素和生物抗菌多肽均为辅助治疗的有效药物。

鲎抗菌抗内毒素肽的研究进展

鲎是一种从古生代的三叶虫演化而来的低等无脊椎海洋动物。研究表明,鲎的蓝色血液中拥有一个非常强大的先天免疫防御体系,其中存在着多种具有抗菌抗内毒素的小分子活性多肽,如tachystatins,tachyplesins等。目前国外正着手以这些多肽为先导化合物开发新的抗菌、抗病毒、抗肿瘤药物。我国是鲎资源大国,为了极大地利用好这种宝贵资源,并尽早开发、研制出具有自主知识产权的新型抗菌、抗病毒、抗肿瘤药物,本文就鲎抗菌肽的研究进展进行了综述。

饲料中添加天蚕素抗菌肽对湘云鲫生长性能、非特异性免疫功能及抗病力的影响

本研究旨在探讨饲料中添加不同水平的天蚕素抗菌肽对湘云鲫生长性能、非特异性免疫功能与抗病力的影响.试验选取了1 242尾湘云鲫[初均重（46.14±0.13） g],随机分成6组,每组3个重复,分别饲喂在基础饲料中添加4 mg/kg金霉素及0（对照）、100、150、200和250 mg/kg天蚕素抗菌肽的6种等氮（粗蛋白质32.27％）等能（消化能12.85MJ/kg）试验饲料.试验期为8周,试验结束后测定湘云鲫生长、免疫、形体指数等指标.结果表明：1）与对照组比,150 mg/kg天蚕素抗菌肽组湘云鲫末均重、增重率和特定生长率均显著高于对照组（P＜0.05）,分别提高了15.0％、37.4％和27.5％.2）150 mg/kg天蚕素抗菌肽组湘云鲫肥满度显著高于对照组（P＜0.05）.3）与对照组相比,饲料中添加200和250 mg/kg天蚕素抗菌肽能显著提高湘云鲫的血清超氧化物歧化酶活性（P＜0.05）;添加150和200mg/kg天蚕素抗菌肽均显著降低了血清丙二醛含量（P＜0.05）;添加各水平天蚕素抗菌肽均显著提高了血清溶菌酶活性（P＜0.05）,但各添加水平组之间差异不显著（P＞0.05）.4）饲料中添加250 mg/kg天蚕素抗菌肽组的湘云鲫肌肉粗脂肪含量显著低于对照组（P＜0.05）.但各组肌肉水分和粗蛋白质含量没有显著性差异（P＞0.05）.5）采用嗜水气单胞菌进行攻毒后,湘云鲫48 h内死亡率较低,攻毒48～72 h是死亡的高峰期,天蚕素抗菌肽组的成活率明显高于对照组,其中对照组成活率最低.由此得出,本试验条件下,在饲料中添加天蚕素抗菌肽对湘云鲫有促生长效果,且150和2C0 mg/kg添加组效果较佳,同时提高了鱼体的非特异性免疫功能和抗病力.

中国鲎鲎素抗菌活性

中国鲎血细胞经酸提取后，抽取液经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶与ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换剂柱层析，分离得到鲎素（ｔａｃｈｙｐｌｅｓｉｎ）．体外（ｉｎｖｉｔｒｏ）实验表明，鲎素在较低浓度下就可抑制革兰氏阴性菌（大肠杆菌、绿脓杆菌）和革兰氏阳性菌（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌）的生长．其中以葡萄球菌对鲎素的反应最为敏感．其最小致死剂量为１０μｇ／ｍＬ．这表明，鲎素具有很强的抗菌活性．它是鲎血细胞用以抵抗入侵微生物的自我防御系统的主要组份．

天蚕抗菌肽A与蜂毒素杂合肽基因的合成及在大肠杆菌中的克隆与表达

根据天蚕抗菌肽A(cecropinA ,CA)N端第 1～ 7个氨基酸残基、蜂毒素 (melittin ,M )N端第 5～ 12个氨基酸残基 ,以大肠杆菌偏爱的密码子设计合成了杂合肽CA(1～ 7) -M(5～ 12 )基因 ,同载体 pGEMEX - 1连接后转化大肠杆菌JM 10 9,经打点杂交筛选和序列测定 ,获得一个与设计一致的克隆。将此克隆中的质粒亚克隆至JM10 3(DE3) ,经IPTG诱导、BrCN切割和抑菌圈试验表明 ,克隆的杂合肽基因在JM 10 9(DE3)中获得了表达。

鲎素的抗菌靶点初探

采用体外抑菌法测定鲎素的抑菌动力学特点,钼酸铵比色法和紫外吸收法分别检测细菌与鲎素共同孵育前后无机磷和大分子泄漏情况,扫描电镜和透射电镜观察细菌与鲎素共同孵育前后细菌形态和结构的变化,紫外吸收法和凝胶电泳法分别观察鲎素对细菌基因组DNA和质粒DNA结构的影响,质粒转化实验检测鲎素对质粒DNA复制和转录功能的影响.结果表明,鲎素对革兰氏阳性菌和阴性菌具有不同的抑菌动力学特点,经鲎素处理的细菌,胞内无机磷和大分子泄漏显著,细胞壁膜和菌体遭到不同程度的破坏,鲎素可与细菌基因组DNA和质粒DNA结合,高浓度鲎素有可能使DNA发生断裂,进而使质粒DNA复制和转录功能受到抑制.上述结果提示,鲎素的抗菌靶点至少包括细胞壁膜和菌体DNA.