柞蚕抗菌肽A基因的克隆和表达

注射大肠杆菌E .coliK12 D31诱导的柞蚕滞育蛹在 2 5℃温育条件下 ,蛹体血淋巴可产生一系列的抗菌物质以抵御外源病菌的入侵 .本研究以脂肪体为材料 ,诱导后提取组织总RNA ,纯化mRNA并用AMV逆转录酶合成cDNA .设计并合成抗菌肽A基因 (cecA)的引物 ,通过PCR法扩增获得柞蚕抗菌肽基因 ,克隆至pBluescriptM13(+)质粒 ,获得相对分子质量 5 .9× 10 4 的融合蛋白表达产物 ,序列分析表明柞蚕抗菌肽A基因及其编码的氨基酸和天蚕具有一定的同源性 .

中国家蚕抗菌肽A基因片段的初步分离

从中国家蚕蛹中提取基因组 Ｄ Ｎ Ａ，根据中国家蚕抗菌肽 Ａ 的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列设计引物，从基因组 Ｄ Ｎ Ａ 中扩增天然抗菌肽 Ａ 基因，得到７５０ ｂｐ、１１００ ｂｐ、１６００ ｂｐ 左右的３ 个片段，用内引物扩增法，初步证实中国家蚕抗菌肽 Ａ 基因至少存在７５０ ｂｐ、１１００ ｂｐ

中国产家蚕抗菌肽A基因部分序列的测定

从大肠杆菌感染的家蚕蛹提取 Ｒ Ｎ Ａ， 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩增未知抗菌肽基因片段， 经过克隆测序， 获得了蚕抗菌肽 Ａ 基因的部分片段１６４ ｂｐ ， 为制备蚕抗菌肽 Ａ 基因探针，