孕前和孕期维生素D缺乏对子代大鼠肠道菌群及抗菌肽cathelicidin的影响

目的·探讨孕前和孕期维生素D缺乏对子代大鼠肠道菌群及抗菌肽cathelicidin(cathelicidin antimicrobial peptide,CAMP)的影响。方法·将24只8周龄雌性SD大鼠分为3组,对照组(C组)、维生素D缺乏组(VDD组)及维生素D补充组(VDS组)各8只。通过特殊饲料饮食构建大鼠孕前和孕期维生素D缺乏模型。母鼠孕第14日用液相色谱-串联质谱联用法检测血清25(OH)D水平。子鼠4周龄时,取血检测25(OH)D水平;取粪便检测肠道菌群;取结肠组织,用实时荧光定量RT-q PCR法、Western blotting法分别测定大鼠CAMP的mRNA及蛋白表达水平。结果·大鼠孕前和孕期维生素D缺乏模型构建成功。C组、VDD组及VDS组子鼠肠道乳酸杆菌的相对丰度分别为0.050±0.016、0.028±0.013及0.033±0.021。与C组相比,VDD组子鼠肠道乳酸杆菌的相对丰度显著降低(P<0.05),结肠CAMP的mRNA及蛋白表达水平亦显著降低(均P<0.05)。与VDD组相比,VDS组子鼠肠道乳酸杆菌的相对丰度有升高的趋势,但差异无统计学意义;结肠CAMP的mRNA表达水平无明显改变,蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论·孕期维生素D缺乏可致子代大鼠结肠CAMP的mRNA及蛋白表达水平和肠道乳酸杆菌的相对丰度显著降低。孕期维生素D补充后,子代大鼠结肠CAMP的蛋白表达水平显著升高,肠道乳酸杆菌的丰度也有升高的趋势。

鸭抗菌肽Cathelicidin的衍生物设计及抑菌机制研究

鸭抗菌肽Cathelicidin分子[Cath(1-20)]富含疏水性氨基酸及正电荷,通过人工方法设计合成Cath(1-20)的截短肽衍生物,筛选新型安全Cath(1-20)衍生肽,探讨其作用机制。结果表明,与母肽Cath(1-20)相似,三种衍生肽Cath(5-20)、Cath(4-20)、Cath(3-20)均具有明显广谱抑菌活性,MIC值在1~8μmol·L^(-1)范围内,但仅Cath(5-20)溶血及细胞毒性明显降低,治疗指数达19.5,显著高于Cath(1-20)、Cath(4-20)及Cath(3-20)。Cath(1-20)及其衍生肽可破坏E.coli UB1005的内膜完整性,产生去极化作用,并存在时间和剂量依赖效应;透射电镜结果显示Cath(1-20)及Cath(5-20)可破坏细菌细胞膜。研究证实氨基端的色氨酸对鸭抗菌肽Cath(1-20)溶血及细胞毒性起关键作用,其作用靶点主要为细菌细胞膜。

PDX通过P38 MAPK通路促进脓毒症性ARDS抗菌肽cathelicidin表达

目的:探究PDX对脓毒症性ARDS抗菌肽cathelicidin(CAMP)的影响及其具体机制。方法:C57BL/6小鼠行盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型,分为:假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、治疗组(CLP+PDX组)、抑制剂组(CLP+PDX+SB203580组)、溶剂对照组(CLP+PDX+DMSO组)、PDX组。采用HE染色观察肺组织损伤情况,进行肺损伤评分,菌落形成单位(CFU)检测细菌清除情况,qPCR检测肺组织CAMP基因表达情况,Westernblot检测肺组织CAMP蛋白表达以及P38MAPK、ERKMAPK通路激活情况。结果:与Sham组比,CLP组ERKMAPK通路无显著变化,P38MAPK通路受到抑制,CAMP表达显著升高(P<0.05);与CLP组相比,CLP+PDX组小鼠肺组织出血、炎性细胞浸润减轻,CFU显著降低,P38MAPK通路明显活化,且CLP+PDX组中CAMP表达进一步升高(P<0.05)。结论:PDX通过调控P38MAPK通路促进脓毒症性ARDSCAMP的表达。

蛇毒抗菌肽Cathelicidin对大肠杆菌抗菌性的研究

目的探讨蛇毒抗菌肽(Cathelicidin)和头孢哌酮舒巴坦对大肠杆菌的抗菌作用.方法选用临床上感染最常见的两种致病菌普通大肠杆菌(E.coli ATCC 25922)和耐头孢菌素大肠杆菌,分为A组(普通大肠杆菌组)、B组(蛇毒抗菌肽Cathelicidin抗耐头孢菌素大肠杆菌组)及C组(头孢哌酮舒巴坦抗耐头孢菌素大肠杆菌组)进行体外抑菌实验并得出U值(抗菌活性单位).结果 A组中,低浓度和高浓度头孢哌酮舒巴坦溶液的U分别为(150±10)U和(230±20)U,抗菌肽水溶液的U为(60±0)U;B组中,抗菌肽水溶液的U为63.3±11.5 U;C组中,低浓度和高浓度头孢哌酮舒巴坦溶液的U均为(0±0)U.结论头孢哌酮舒巴坦对耐头孢菌素大肠杆菌的抗菌作用不明显,但对普通大肠杆菌(E.coli ATCC 25922)的抗菌作用很明显;蛇毒抗菌肽(Cathelicidin)对耐头孢菌素大肠杆菌、普通大肠杆菌的作用提示蛇毒抗菌肽(Cathelicidin)具有稳定的抗菌活性.

棘腹蛙皮肤抗菌肽Cathelicidin-Pb的克隆及表达分析

基于棘腹蛙(Paa boulengeri)皮肤转录组数据库,釆用RT-PCR方法从棘腹蛙皮肤组织中克隆到了编码Cathelicidin-Pb前体的核苷酸序列,其完整ORF长度为441 bp,编码146个氨基酸残基。通过信号肽预测和结构域查找比对,发现Cathelicidin-Pb前体包含N端20个氨基酸残基的信号肽、101个氨基酸残基的中间间隔区(cathelin结构域)和25个氨基酸残基的成熟抗菌肽。进一步研究发现,在适度高温范围内,皮肤组织中Cathelicidin-Pb的表达随着生长环境温度的升高而逐渐增加,但是当环境温度超过27℃后,其表达量急剧降低;Cathelicidin-Pb主要在皮肤组织中表达,在肌肉组织和血液组织的表达量较低。这些结果为棘腹蛙养殖过程中疾病控制及Cathelicidin-Pb抗菌肽的后续开发提供了重要的线索。

抗菌肽Cathelicidin-1真核表达及发酵液抑菌活性鉴定

为了获得体外表达的高活性抗菌肽,通过分子克隆技术构建了抗菌肽Cathelicidin-1重组载体,在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中表达,并鉴定包含该抗菌肽的发酵液的抑菌活性。通过DNA全合成技术合成编码抗菌肽Cathelicidin-1的全长基因,采用PCR技术扩增靶标基因并与真核表达载体pGAPZαA连接,获得重组质粒pGAPZαA-Cathelicidin-1;将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α中扩增,提取质粒并经单酶切处理后转化毕赤酵母GS115;使用YPD培养基培养酵母,72 h后收集发酵液,通过Tricine-SDS-PAGE检测抗菌肽表达,并通过抑菌圈与抑菌曲线测定鉴定发酵液的抑菌活性。结果表明,抗菌肽Cathelicidin-1以分泌肽形式表达于发酵液中,并且该发酵液能够显著抑制大肠杆菌(Escherichia coli)的生长,而对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)则无明显抑菌效果。

抗菌肽Cathelicidins可有效抑制细菌生物被膜形成和促进嗜中性粒细胞的免疫功能

近年来,由于过度使用和滥用抗生素,导致世界范围内多重耐药菌和广泛耐药菌的广泛传播,这些病原菌多数为ESKAPE病原菌(屎肠球菌,金黄色葡萄球菌,肺炎克雷伯菌,鲍曼不动杆菌,铜绿假单胞菌和肠杆菌属),普遍具有形成生物被膜的能力.

黄沙鳖抗菌肽cathelicidin基因克隆及表达特征分析

【目的】克隆黄沙鳖cathelicidin基因并分析其组织分布特征及在攻毒后的表达变化,为深入研究cathelicidin功能及在黄沙鳖先天免疫中的潜在作用提供基础数据。【方法】采用RT-PCR结合RACE克隆黄沙鳖cathelicidin基因cDNA全长序列,利用生物信息学分析软件对黄沙鳖cathelicidin基因及其推导氨基酸序列进行结构特征分析,并采用实时荧光定量PCR检测黄沙鳖cathelicidin基因在不同组织中的表达特征及攻毒后的表达变化。【结果】黄沙鳖cathelicidin基因cDNA序列全长1026 bp(GenBank登录号MK250818),包括483 bp的开放阅读框(ORF)、315 bp的5'非编码区(5'UTR)和228 bp的3'非编码区(3'UTR)。黄沙鳖cathelicidin基因cDNA序列编码160个氨基酸,包括氨基端的信号肽区域、含有4个保守半胱氨酸(Cys)残基的cathelin区域及羧基端的成熟肽区域。黄沙鳖cathelicidin基因推导氨基酸序列与中华鳖cathelicidin基因推导氨基酸序列(KY948708.1)的相似性最高,为97.5%;基于cathelicidin基因推导氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示黄沙鳖与中华鳖的亲缘关系最近。黄沙鳖cathelicidin基因在脾脏和肝脏中的相对表达量相对较高,其次是心脏,在脑组织、肾脏、肠道、肌肉、表皮和背甲的相对表达量较低。以温和气单胞菌攻毒后,黄沙鳖脾脏cathelicidin基因相对表达量呈升—降—升—降的波动变化趋势,出现2个峰值(攻毒后第3和36 h),对应的cathelicidin基因相对表达量分别是对照(注射等量无菌生理盐水)的23.1和3.5倍。【结论】黄沙鳖cathelicidin基因在脾脏和肝脏中高表达量,且可被温和气单胞菌感染诱导,说明cathelicidin基因在黄沙鳖抵抗病原感染过程中发挥重要作用。

抗菌肽对鱼类肠道菌群及免疫功能影响的研究进展

抗菌肽是先天免疫的组成部分,构成许多生物体抵御入侵病原体的第一道防线。抗菌肽是基因编码的(小于100个氨基酸),具有空间排列的疏水性和阳离子氨基酸特性的两性分子,具有多种生物学功能。抗菌肽(作为饲料添加剂)能够改善水产动物的生长性能,增强水产动物机体的抗病能力。鱼类肠道承担着营养物质消化吸收的功能,同时鱼类肠道内的微生物也参与机体的免疫反应。文章对抗菌肽的来源、分类、生物学功能、抗菌机制以及抗菌肽对鱼类肠道菌群和机体免疫功能的影响进行了系统的阐述,进而分析了抗菌肽、肠道菌群、机体免疫三者的关系。为抗菌肽替代抗生素在鱼类健康养殖中的应用提供了技术指导,为揭示抗菌肽在鱼体的相关作用机制奠定基础。

金属抗菌肽SIF_(4)对大肠杆菌拓扑异构酶活性及胞内核酸合成的影响

为系统阐明金属抗菌肽SIF_(4)基于DNA拓扑异构酶靶点的非细胞质膜抑菌机理,以大肠杆菌为模式菌株,研究了金属抗菌肽SIF_(4)与基因组DNA的结合方式、对DNA拓扑异构酶I/II活性以及胞内核酸生物合成的影响机理。研究发现,金属抗菌肽SIF_(4)可能以类似溴化乙锭嵌插方式与基因组DNA结合,对拓扑异构酶I有较强抑制活性,但对拓扑异构酶II影响较小,可通过影响DNA负超螺旋解链和RNA聚合酶结合催化RNA转录过程发挥抑菌活性。研究还发现,经金属抗菌肽SIF_(4)处理12 h后,大肠杆菌胞内总DNA和总RNA生物合成量均受到不同程度的抑制,且呈现良好的量-效关系,1/2最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)组与对照组(0 MIC)相比,胞内DNA和RNA生物量差异不显著(P>0.05),MIC和2 MIC组与对照组相比,胞内DNA和RNA生物量差异显著(P<0.05)。实验结果可为金抗肽SIF_(4)在食源性大肠杆菌生物防控中的应用提供理论支持。

黄粉虫抗菌肽的诱导·分离及其抗菌活性研究

[目的]探讨不同方法诱导对黄粉虫抗菌肽活性的影响,为黄粉虫抗菌肽的修饰改造、分子克隆、外源表达等奠定基础。[方法]选7龄、8龄、9龄的黄粉虫幼虫,以巴氏杆菌和沙门氏菌为诱导菌采用微量注射法、针刺法诱导抗菌肽,对不同菌液浓度和不同方法诱导的不同龄期黄粉虫幼虫抗菌肽的抑菌效果进行研究。[结果]①黄粉虫龄期对抗菌肽活性有显著影响。采用巴氏杆菌和沙门氏菌作为诱导菌,对7龄、8龄和9龄黄粉虫进行诱导,在诱导处理中,8龄幼虫诱导的抗菌肽活性显著大于其他龄期幼虫诱导的抗菌肽活性(P<0.05)。②不同菌液浓度诱导黄粉虫幼虫产生的抗菌肽抑菌活性存在差异。菌液浓度为对数期浓度稀释100倍时抗菌肽活性显著大于其他稀释倍数诱导的抗菌肽活性(P<0.05)。③不同方法诱导产生的抗菌肽抑菌活性存在差异。微量注射诱导的抗菌肽活性显著大于针刺诱导的抗菌肽活性(P<0.05)。④2种细菌诱导的抗菌肽活性有显著差异。采用沙门氏菌诱导的抗菌肽最高活性显著大于采用巴氏杆菌诱导的抗菌最高活性(P<0.05)。[结论]黄粉虫抗菌肽的活性受黄粉虫龄期、诱导源微生物种类、菌液浓度、诱导方法的影响。该研究中,以8龄黄粉虫为试验动物,采用对数期沙门氏菌液稀释100倍进行微量注射法诱导,所获得的抗菌肽活性最好。

抗菌肽对大口黑鲈生长代谢的影响研究

为评估不同水平抗菌肽对大口黑鲈生长代谢的影响,试验以不含抗菌肽的基础饲料为对照组,在基础饲料中分别添加50 mg/kg(D1组),100 mg/kg(D2组),150 mg/kg(D3组),200 mg/kg(D4组)抗菌肽为试验组,在养殖水箱中饲喂初始平均体质量(12.49±0.2)g的大口黑鲈幼鱼,养殖8周后测定试验鱼的生长性能、饲料表观消化率、鱼体成分、营养代谢等相关指标。试验结果表明:(1)生长和体组成方面,各组试验鱼增重率均高于对照组但差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,D4组干物质消化率显著升高6.58%(P<0.05);D3和D4组饲料转化率分别显著升高9.4%和10.8%(P<0.05);各组试验鱼全鱼粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分均无显著差异(P>0.05),D3组脏体比比对照组显著升高9.4%(P<0.05);(2)消化吸收方面,与对照组相比,D2和D3组前肠钠钾ATP酶活性分别显著升高32.35%和39.04%(P<0.05),前肠碱性磷酸酶活性分别显著升高12.09%和10.05%(P<0.05),肝脏溶菌酶活性分别显著升高11.81%和10.9%(P<0.05),D3组前肠脂肪酶活性显著升高12.62%(P<0.05);(3)蛋白质代谢方面,与对照组相比,D3和D4组血清总蛋白含量分别显著升高19.53%和18.7%(P<0.05),D3和D4组蛋白质效率分别显著升高10.31%和10.82%(P<0.05),D4组肝脏AST活性显著升高22.49%(P<0.05);(4)脂肪代谢方面,D4组血清总胆固醇含量比对照组显著下降18.76%(P<0.05)。本研究表明,在大口黑鲈饲料中添加抗菌肽可以提高饲料转化率,促进蛋白质沉积,能在一定程度上提升鱼体免疫性能,抗菌肽添加量为150 mg/kg时效果较佳。

抗菌肽对肉牛生长性能及经济效益的影响

试验旨在研究不同水平的抗菌肽对西门塔尔杂交肉牛生长性能、瘤胃发酵参数、血清免疫力及养殖经济效益的影响。试验选择32头健康、体重相近的西门塔尔杂交肉牛,随机分成4组,每组8个重复,每个重复1头肉牛。对照组饲喂基础饲粮,试验A组、B组、C组分别饲喂含有2、4、8 g/(头·d)抗菌肽的饲粮。预试期7 d,正式试验期150 d。结果表明:与对照组比较,试验B组和试验C组的末重和平均日增重显著升高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05);瘤胃液的pH值和菌体蛋白含量显著升高(P<0.05),乙丙比显著降低(P<0.05);所有试验组瘤胃乙酸浓度显著降低(P<0.05);所有试验组血清中白细胞介素-4水平显著升高(P<0.05),白细胞介素-6水平显著降低(P<0.05);试验B组和试验C组血清白细胞介素-10水平显著升高(P<0.05),免疫球蛋白M和免疫球蛋白G水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,试验A组、B组、C组的增重收入分别增加了10.40%、22.34%和23.55%,利润分别增加了19.31%、46.54%和48.45%。研究表明,在肉牛养殖中添加适量的抗菌肽可以提高生长性能,促进瘤胃发酵功能,增强机体的免疫功能,增加养殖利润,且添加4 g/(头·d)的抗菌肽较为适宜。

爱媛类芽孢杆菌抗菌肽对白色念珠菌生物膜的抑制作用机制

研究爱媛类芽孢杆菌抗菌肽对白色念珠菌生物膜的抑制作用,采用微量二倍稀释法和时间-杀菌曲线测定抑制效果,显微镜观察对白色念珠菌芽管和菌丝形成的影响,2,3-二(2-甲氧基-4-硝基-5-磺酸基苯基)-2H-四唑-5-甲酰苯胺法研究对生物膜、预成型生物膜形成和成熟生物膜清除率的影响,荧光探针观察对生物膜结构和膜内菌体状态的影响,平板涂布法和实时聚合酶链式反应测定生物膜内活菌数量和相关基因表达水平。结果表明,抗菌肽对白色念珠菌的最小抑菌浓度为8.28 AU/mL。抗菌肽能降低白色念珠菌的芽管形成率,阻止菌丝的生成,使其以酵母形式存在。抗菌肽对生物膜的形成和清除产生影响,能在较短时间内破坏生物膜的结构完整性,导致菌体受损和死亡,减少膜内菌落数量。在基因水平上,抗菌肽可降低多个生物膜形成相关的基因(如ALS1、ALS3、HWP1、EFG1、ECE1和UME6)的表达水平,从而抑制生物膜的形成。研究证明抗菌肽能够有效抑制白色念珠菌生物膜形成、成熟膜清除、成膜基因表达等,结果可为白色念珠菌新型抑菌物质的开发奠定理论基础,为食品病原微生物污染防治和食品质量安全保障提供依据。

澳洲坚果抗菌肽分离纯化及其肽段鉴定与分析

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备澳洲坚果多肽(macadamia nut peptide⁃0,MNP⁃0),以对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌活性为跟踪指标,通过超滤、DA201⁃C型大孔吸附树脂、交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25对其进行逐级分离纯化,获得抑菌活性较强的抗菌肽,并运用液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC⁃MS/MS)技术对其进行肽段组成与氨基酸序列分析。结果表明:超滤分离的不同分子量澳洲坚果多肽在所有多肽中所占质量分数不同,抑菌活性也有所差异。其中,澳洲坚果多肽组分MNP⁃4占比最高,为29.55%;抑菌活性也最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为10.01 mm与9.41 mm。大孔吸附树脂纯化多肽组分MNP⁃4的技术条件为75%乙醇溶液为解吸剂,静态吸附3 h,动态洗脱体积60 mL。经大孔吸附树脂与交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25分离纯化,获得3个澳洲坚果纯化多肽(macadamia nut purified peptide,MPP)组分,其中组分MPP⁃2的抑菌活性最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为18.67 mm与16.83 mm,优于多肽MNP⁃0与超滤分离多肽组分。分离纯化的澳洲坚果抗菌活性多肽MPP⁃2含有DDLTDPAPA、VLL、WDY、VPV、WDL、LLW、LWL、FDW 8个肽段,经预测分析,属于抗菌肽的肽段为WDL与FDW,其概率得分a(1.00≥a≥0.50)均为1.00,疏水率均为66.67%,均带有1个负电荷,等电点分别为0.69与0.67,并具有较好的溶解性。研究结果表明澳洲坚果可通过酶法制备具有抗菌活性的肽类成分。

鱼类抗菌肽-壳聚糖抑菌保鲜剂的制备

为研发安全高效的抑菌保鲜剂,本研究以安康鱼为原料,采用定向酶解技术制备鱼类抗菌肽,与海洋天然产物壳聚糖复配制备新型抑菌保鲜剂。结果如下:通过单因素实验确定鱼类抗菌肽和壳聚糖对大肠杆菌的最佳抑菌浓度,响应面优化实验确定鱼类抗菌肽-壳聚糖抑菌保鲜剂的最佳添加量为,鱼类抗菌肽7.796 mg/mL,壳聚糖1号0.716 mg/mL,壳聚糖2号0.389 mg/mL,复配得到的抑菌保鲜剂对大肠杆菌的抑菌圈直径为9.77 mm,接近回归模型预测值10.19 mm。此外,将鱼类抗菌肽-壳聚糖抑菌保鲜剂应用于新鲜鱼糜,结果表明,该抑菌保鲜剂能够延长新鲜鱼糜发生质变的时间,具有明显的抑菌保鲜作用,后续可应用于即食鱼糜制品抑菌保鲜剂的开发。

复合抗菌肽对肉牛生长性能、瘤胃发酵和血清抗氧化指标的影响

试验旨在探究复合抗菌肽(CAMP)对肉牛生产性能、瘤胃发酵和血清抗氧化性能的影响。选取健康状况良好、体重(450±12)kg的1周岁西门塔尔杂交公牛40头,随机分为对照组和CAMP组,每组4个重复,每个重复5头牛。对照组饲喂基础日粮,CAMP组饲喂含600 g/(头·d)CAMP的日粮。试验周期共90 d,预试期15 d。结果表明:CAMP组肉牛终末体重和平均日增重高于对照组(P<0.05),耗料增重比低于对照组(P<0.05);CAMP组肉牛瘤胃内乙酸和挥发性脂肪酸含量高于对照组(P<0.01),氨态氮含量低于对照组(P<0.01);CAMP组肉牛血清中总抗氧化能力、总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性高于对照组(P<0.05),丙二醛含量低于对照组(P<0.01)。由此可见,日粮中添加600 g/(头·d)CAMP能提高肉牛生长性能、瘤胃发酵和抗氧化水平。

抗菌肽F1高产菌株筛选鉴定及其对多重耐药菌生物膜形成的抑制作用

该研究以L.paracasei subsp.Tolerans FX-6为出发菌株,经过^(60)Coγ射线辐照诱变,筛选出一株高产抗菌肽F1的突变菌株(菌26)。对菌26进行16S rDNA序列比较分析发现其与FX-6具有高度相似性。进一步对菌26的牛奶发酵粗提物进行分离纯化,成功富集抗菌肽F1。通过抑菌实验发现,菌26的牛奶发酵粗提物对E.coli的最低抑菌质量浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)为3.16 mg/mL,较FX-6牛奶发酵粗提物的MIC降低了75%,同时抗菌肽F1的产量也提高了3.03倍,初步推断抗菌肽F1质量浓度与菌株的抑菌活性之间可能存在正相关关系。前期研究已经发现抗菌肽F1对黏菌素耐药大肠杆菌SHP45的MIC为320.0μg/mL,该实验进一步研究表明当抗菌肽F1的质量浓度达到2×MIC时,可抑制50%以上的黏菌素耐药大肠杆菌SHP45生物膜的形成。基于以上研究结果表明,菌26比出发菌株具有更高的产抗菌肽F1能力,且抗菌肽F1对黏菌素耐药大肠杆菌SHP45的生物膜形成具有显著的抑制作用。该研究为高产抗菌肽菌株的获得提供研究思路,并有望为多重耐药细菌感染的防控提供物质基础。

杂合抗菌肽KL-21与抗生素体外协同抗菌效果研究

为了进一步研究杂合抗菌肽KL-21的抗菌活性和探索其应用潜力,试验测定了KL-21和抗生素对4种常见致病菌的抑菌活性,同时评估了KL-21与4种常见抗生素联用的协同效果。试验采用微量倍比稀释法测定KL-21和4种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC),利用棋盘试验法测得部分抑菌浓度指数(FIC)评估联用后的协同效果。结果表明,KL-21对4种致病菌均有良好的抑菌活性,与卡那霉素、庆大霉素、链霉素及氯霉素联合使用时具有协同或部分协同作用,可以将抗生素体外抑菌试验的MIC减少至1/16~1/2,为人工设计杂合抗菌肽KL-21的实际应用提供了参考,为畜牧生产以及动物疫病治疗提供更多选择。

低能离子注入诱变法选育新硫肽类抗生素166A高产菌株

目的为进一步提高产量,以小单孢菌Micromonospora sp.TMD166-MU1为出发菌株,采用低能离子注入技术,研究不同离子注入参数对菌株存活率、正负突变率的影响,通过突变株抑菌活性变势参数分析,初步探讨N+离子注入对166A生产菌所产生的诱变效果,并结合卡那霉素抗性筛选及牛津杯固体发酵高通量筛选,获得高产菌株。方法利用低能N+离子注入技术对出发菌株TMD166-MU1的孢子进行辐照诱变,以卡那霉素耐受性为选择压力,不同诱变条件处理的菌悬液涂布在含有卡那霉素培养基平板上培养后获得单菌落,并以牛津杯固体发酵高通量筛选方法进行高产菌株初筛,之后对高产菌株进行摇瓶复筛,利用高效液相法检测突变株摇瓶发酵的化学效价。结果通过研究30和60 keV能量下不同注入剂量与小单孢菌正突变率的生物学效应关系,确定了在注入能量为30 keV、注入剂量4×10^(13)ions/cm^(2)、卡那霉素抗性筛选浓度为6 mg/L条件下,可获得最高达36.33%的正突变率。复筛效价是出发菌株1.5倍以上的有4株,其中突变株IK-3的166A产量是菌株TMD166-MU1的1.8倍。结论采用低能N+离子注入诱变方式,再结合抗生素抗性筛选及牛津杯固体发酵高通量筛选的集成方法能简单、高效地获得166A高产突变菌株。