解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因TasA克隆与表达

[目的]克隆解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因Tas A并进行原核表达和抑菌活性研究。[方法]采用PCR方法扩增抗菌蛋白基因Tas A,连接p ET22b载体,导入E.coli BL21(DE3)菌株,进行IPTG低温诱导表达,用His柱纯化表达产物,采用纸片方法测定其抑菌活性。[结果]从解淀粉芽孢杆菌TF28中克隆了抗菌蛋白基因Tas A,以p ET22b为表达载体构建高效表达抗菌蛋白Tas A的基因工程菌株,该菌株在0.05 mmol/L IPTG 15℃诱导4 h,Tas A蛋白表达率为34.2%,经His柱纯化后获得SDS-PAGE电泳一条带的纯化Tas A蛋白,其含量为67.8 mg/L,收率为90.8%。该蛋白抑制番茄灰霉病和叶霉病、玉米茎基腐病和水稻稻曲病菌生长。[结论]实现抗菌蛋白基因Tas A的原核表达,表达率34.2%,表达蛋白具有广谱抑菌活性,在植病生防方面具有应用潜力。

植物抗真菌病害基因工程的研究策略

控制真菌病害的关键 ,取决于对植物与病原真菌相互作用的分子机理的了解。向植物导入抗病基因、植物防卫反应基因、抗菌蛋白基因 ,或将病菌的 avr基因、avr- R基因与一真菌诱导型启动子相连 ,组成“双组分系统”,并导入含或不含相应 R基因的植物中 。

植物抗菌基因工程的研究策略及进展

植物抗菌基因工程是目前植物抗病育种的热点之一 .本文就近几年植物抗菌基因工程中植物抗病基因、病原菌无毒基因、植物防卫基因。

转基因(LJAMP2)烟草对紫色土根际微生物和酶的影响

本试验在盆栽条件下,以转抗菌蛋白基因(LJAMP2,T-Lj)和转空载体烟草(T-Vi)为试验植株,亲本非转基因烟草(Nt-X)为对照,研究转基因烟草在不同生育期对紫色土根际微生态环境的影响,包括可培养细菌、真菌数量和土壤酶活性.试验结果表明,相对于非转基因的对照处理,转基因(T-Lj、T-Vi)并不影响烟草本身的农艺性状.在烟草整个生育周期,T-Lj与T-Vi处理根际的细菌数量变化趋势与Nt-X一致;但在成熟期,T-Lj和T-Vi处理的细菌CFU显著低于Nt-X.由于供试的两个转基因材料中含有抗性标记基因(NPTII),所以对根际可培养细菌数的影响是否为目的基因(LJAMP2)的导入所致,尚需进一步验证.3种处理的烟草根际真菌数量较稳定,不同处理间无显著性差异.土壤酶活性研究表明,在烟草的生长发育期间,不同处理间根际土壤蛋白酶活性差异不显著;在烟草团棵期,T-Lj处理的脲酶活性显著低于Nt-X;在残茬期T-Vi处理的过氧化氢酶和脲酶活性均显著低于Nt-X.表明转抗菌蛋白基因和转空载质粒基因烟草种植一年对紫色土土壤过氧化氢酶、脲酶活性具有一定的抑制作用,其内在原因有待进一步研究.

转LTP基因T_0代小麦的获得及抗条锈病鉴定

以小麦生产品种小偃22、科农199和西农1376为受体品种,植物抗菌蛋白基因LTP作为目的基因,构建pAHC25-LTP表达载体,利用基因枪法转化小麦幼胚愈伤组织,获得转LTP基因T0代小麦1247株。经草铵膦(Phosphinothricin,PPT)抗性筛选及PCR分子检测,获得阳性再生植株209株,转化率1.87%。阳性再生植株接种条锈菌CYR29、CYR31和CYR32混合小种后进行抗条锈病鉴定,获得抗性植株74株,其中抗性显著提高的抗病植株11株。本研究初步证明抗菌蛋白基因LTP在小麦抗条锈病菌的侵染中有一定作用,为获得转抗菌蛋白基因的抗条锈病小麦品种奠定基础,以期获得育种中可应用的新型抗源材料。

Isolation of a Genomic DNA for Gastrodia Antifungal Protein and Analyses of Its Promoter in Transgenic Tobacco

A genomic DNA containing 5'-upstream region and complete open reading frame of a Gastrodia antifungal protein was isolated by screening of a genomic library from Gastrodia elata B1. To investigate the promoter activity, the 5'-flanking region - 1 157 lip upstream from the putative transcription start site was fused to the coding sequence of beta-glucuronidase (GUS) gene and transformed into Nicotiana tabacum. The strongest GUS activity was detected in the roots of transgenic tobacco, followed by stems. The leaves only showed a low GUS activity. Furthermore, the promoter established inducible expression pattern in transgenic tobacco upon fungus Trichoderma viride inoculation and jasmonic acid and salicylic acid treatments.

一种降低dATP用量的简单易错PCR方法

易错PCR是基因体外诱变的主要方法之一,是通过在PCR体系中添加Mn2+、提高Mg2+浓度和dCTP/dTTP浓度等措施达到基因诱变的目的。【目的和方法】本研究在不添加Mn2+、不调整其它任何PCR成分的情况下,通过降低dATP浓度的底物不平衡作用,对洋葱抗菌蛋白基因Ace-AMP1和苏云金芽胞杆菌毒蛋白(Bt)基因cry1A(c)进行了PCR诱变。【结果】结果表明:随着dATP浓度的降低,序列变异率和碱基突变率均呈升高趋势。当dTTP/dCTP/dGTP∶dATP在20∶1-40∶1时,碱基突变率介于1.4%-1.8%之间,序列变异率介于77.8%-100%之间。【讨论和结论】该方法简化了常规易错PCR诱变中的条件优化过程,简单实用。降低dATP浓度的诱变方法主要引起AT→GC的变异,适用于提高靶基因GC含量的体外诱变。本研究降低单一底物浓度的诱变方法可以提高诱变基因的AT或GC含量,是对易错PCR诱变方法的拓展。