转基因甘蓝、花椰菜的抗虫检测

1997～ 1999年对甘蓝、花椰菜转Bt抗虫基因R0 代及R1代植株离体叶片进行了抗虫检测试验。结果表明 ,使用小菜蛾 1龄幼虫 ,每9cm圆形叶片接种 2 0条 ,在 2 0～ 2 2℃培养 5～6d ,以校正死亡率和叶片损害程度综合评估抗虫性 ,可取得有效的结果 ,此检测方法比较简便 ,可用于单株抗虫性的初步筛选。

高效Bt抗虫基因表达结构的构建及其在转基因烟草中表达行为的研究

构建了高效植物表达载体ｐ Ｂｉｎ Ｍｏ Ｂｃ ，其携带有超强表达复合启动子 Ｏ Ｍ 及Ω因子控制下的 Ｃｒｙ Ｉ Ａ（ｃ） 基因，作为对照，本实验构建了含有 Ｃａ Ｍ Ｖ３５ Ｓ 启动子控制下的 Ｃｒｙ Ｉ Ａ（ｃ）基因的植物表达载体ｐ Ｂｉｎｏ Ｂｃ 。分别使用两个植物表达载体转化烟草， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测表明，在ｐ Ｂｉｎ Ｍｏ Ｂｃ 转基因烟草中 Ｃｒｙ Ｉ Ａ（ｃ） 基因的平均表达水平是ｐ Ｂｉｎｏ Ｂｃ 的２４４ 倍，最高可达可溶蛋白的０２５５ ％ 。抗虫检测结果表明，ｐ Ｂｉｎ Ｍｏ Ｂｃ 转基因烟草与ｐ Ｂｉｎｏ Ｂｃ 转基因烟草相比，具有更强的抗棉铃虫效果。上述结果表明， Ｏ Ｍ 启动子比 Ｃａ Ｍ Ｖ ３５ Ｓ 启动子更具有实际应用价值，此结果在植物抗虫基因工程研究中具有重要意义。

金标Bt-CryIAb/Ac试纸条定性检测转Bt基因棉花的方法研究

鉴于转Bt基因抗虫棉的抗虫性存在时空表达差异的现象,因此,采用免疫检测法中的金标Bt-CryIAb/Ac抗虫检测试纸条进行Bt毒蛋白定性检测,并对其使用方法中的样品取样部位、时期与样品稀释参数进一步调整。结果表明,检测苗期的子叶、顶部第二叶及蕾期的顶部第二叶等组织器官时,样品稀释倍数应控制在10～15;检测花蕾时,应控制在15～20倍;检测开花期的顶部第二叶时,应控制在5～10倍;检测铃期的顶部第二叶及苞叶时,应控制在5～10倍;检测成熟的种子应为15～20倍。金标Bt-CryIAb/Ac试纸条定性检测转Bt基因棉花时,不同时期、不同器官应采用相应适宜的浓度才能获得可靠的鉴定结果。

转基因烟草中Bt毒蛋白基因的表达行为

构建了高效植物表达载体pBinMoBc ,该载体携带超强表达复合启动子OM及Ω因子控制下的CryIA(c)基因。采用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导的方法转化烟草 (NicotianatabacumL .) ,ELISA检测表明 ,大多数转基因烟草中CryIA(c)基因表达量均超过 0 .1% ,最高可达 0 .2 5 5 % ;转基因烟草中CryIA(c)基因表达水平与植株发育的时间和空间有关。抗虫检测结果表明 ,转基因烟草具有很强的抗棉铃虫 (He liothisarmigevaHubner)效果。上述结果表明 ,pBinMoBc是一个高效抗虫植物表达载体。