佐剂在抗蜱疫苗中的应用

使用抗蜱疫苗是防治蜱类的有效策略之一,而单抗原的免疫原性较低,需要添加佐剂增强其免疫原性。佐剂是疫苗中增强免疫原性的化合物,添加入疫苗中可诱导宿主产生更持久、更广泛的免疫反应。文章简要介绍了抗蜱疫苗中常用的弗氏佐剂、Montanide ISA佐剂、单磷酰脂质A佐剂、细胞因子佐剂和聚阳离子肽IC31佐剂,并对各种佐剂的作用机制及应用效果进行归纳总结,以期为深入揭示佐剂作用机制提供科学依据,为后续研制抗蜱疫苗提供参考。

边缘革蜱铁蛋白1的原核表达与理化特性分析

为探明蜱源铁蛋白1(FER1)在边缘革蜱铁代谢中的功能,本研究经PCR扩增了边缘革蜱源FER1基因编码区(CDs),测序结果显示FER1基因CDs区为519 bp;BLAST分析其与硬蜱科常见蜱FER1的氨基酸序列同源性,利用Mega 6.0软件分析了FER1基因与其他常见蜱该基因之间的系统进化关系;利用Swiss-model、Vaxijen2.0及Allertop等程序预测分析了FER1的空间结构、抗原性等特性。结果显示,FER1基因与革蜱属其他种之间进化关系较近,其编码的氨基酸序列与硬蜱科常见蜱FER1氨基酸序列之间差异很小,边缘革蜱FER1基因的CDs区编码172个氨基酸,理论等电点(pI)为5.04,该蛋白以中空的24聚体形式存在,单个亚基的抗原位点主要集中在aa8~aa12、aa80~aa93处,位于24聚体模型表面,具有抗原性。氨基酸线性片段预测FER1未显示过敏性。将FER1基因克隆至原核表达载体,构建重组质粒pET-28a-FER1,表达重组FER1蛋白(rFER1),western blot检测其免疫原性,结果显示该蛋白具有良好的反应原性,并经His-Bind镍柱亲和层析获得纯化蛋白,其大小为25 ku。本研究分析了FER1蛋白的氨基酸序列同源及FER1基因的系统进化关系,预测了该蛋白的空间结构、抗原性等特性,通过重组蛋白表达与血清学试验,推断FER1可能存在于蜱唾液腺中,说明该蛋白具有作为抗蜱疫苗候选抗原的潜力。

抗硬蜱亚单位疫苗用候选抗原蛋白的筛选及免疫原性分析

对已经构建保存的PET-28a-GSTK1、PET-28a-GSTE3、PET-28a-Fe1、PET-28a-Fe2和PET-28a-CPL质粒,利用PCR技术检测目的基因,经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测5种重组蛋白(rGSTK1、rGSTE3、rFe1、rFe2和rCPL)的表达,利用His标签蛋白纯化试剂盒纯化4种重组蛋白(rGSTK1、rFe1、rFe2和rCPL),并使用BCA蛋白定量测定试剂盒测定蛋白浓度后,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,经Western blot测定4种重组蛋白的反应原性,采用间接Elisa测定多克隆抗体效价以及免疫后抗体消长规律。结果显示,5种目的基因条带正确,并未发生丢失;SDS-PAGE检测发现除rGSTE3外,其余4种蛋白(rGSTK1、rFe1、rFe2和rCPL)均能稳定表达且大小分别为28、25、26、27 kDa,以包涵体形式表达;利用His标签纯化蛋白后测定蛋白浓度,结果显示,以250 mmol/L咪唑进行洗脱时可获得高纯度的目的蛋白,蛋白质量浓度分别为2.633、2.532、2.582和2.506 g/L;将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA结果显示,4种重组蛋白(rGSTK1、rFe1、rFe2和rCPL)制备的多克隆抗体效价分别高达1∶819200、1∶819200、1∶1638400和1∶409600,表明4种重组蛋白的免疫原性较好,其中rFe2的免疫原性最好;三免后的21 d 4种重组蛋产生的抗体均达到峰值后逐渐降低,但三免后的63 d抗体水平仍处于较高水平,其中rFe2的抗体水平最高,为1∶819200;rGSTK1次之,为819200。Western blot结果显示,4种重组蛋白均可与其多克隆抗体发生特异性反应;其中rFe2的反应原性最强,rGSTK1次之。本研究以重组蛋白的稳定性、高表达、免疫后抗体水平以及与多克隆抗体反应原性为指标,筛选出rFe2为最佳候选抗原蛋白,另外rGSTK1效果与其相当,也可以考虑2种蛋白联合使用,为后续抗硬蜱疫苗的研发提供试验基础。

抗蜱亚单位疫苗作用途径解析

蜱是专性吸血的体外寄生虫,可传播多种病原体。目前主要通过化学杀螨剂进行防治,但长期使用化学杀虫剂可造成蜱的抗药性及环境污染。抗蜱亚单位疫苗是有效的蜱类防治手段之一,但其作用机制尚不明确。该文着重介绍了抗蜱亚单位疫苗诱导的宿主免疫应答,包括体液免疫、细胞免疫、补体系统以及免疫后宿主的抗体、免疫细胞和补体对蜱的作用途径,旨在为深入揭示抗蜱疫苗免疫机制奠定基础,为筛选新型抗蜱疫苗提供科学依据。

蜱类保护性抗原研究进展

蜱是一种专性吸血的体外寄生虫,可传播多种病原体,给人类健康和畜牧业发展带来极大危害。筛选高效的保护性抗原用于研制抗蜱疫苗已成为安全有效的蜱类防治新策略。本文简要介绍了商业化的Bm86保护性抗原,着重对蜱类唾液腺、中肠、生殖腺和卵内保护性抗原及酶类、蛋白酶抑制剂、保守性蛋白等不同特性的保护性抗原进行归纳总结,为后续研制抗蜱疫苗提供科学依据。

长角血蜱磷酸丙糖异构酶的真核表达及免疫保护力分析

在前期克隆长角血蜱磷酸丙糖异构酶TIM基因基础上,将密码子优化后的TIM基因合成于真核质粒pPICZaA中,并转入毕赤酵母X33进行真核表达。经镍柱纯化得到重组蛋白rTIM,相对分子质量大小约28 kDa。Western blot结果表明rTIM具有免疫原性。将rTIM与佐剂混合免疫新西兰大白兔,ELISA结果显示,免疫rTIM的新西兰大白兔与对照组相比具有较高的抗体水平。蜱叮咬试验结果显示,与对照组相比,试验组雌蜱饱血体质量(163.30±1.40)mg、产卵量(52.23±1.41)mg和卵孵化率(29.26±2.43)%显著降低,分别减少11.02%,16.00%和44.69%;计算得出rTIM免疫保护率为58.40%。研究结果为进一步筛选抗蜱疫苗提供了理论依据。