利用抗人血小板膜糖蛋白Ⅲa单克隆抗体SZ—21测定生物材料表面粘附血小板数的新方法

本课题对三种血小板膜糖蛋白单克隆抗体进行了筛选.研究了由单克隆抗体SZ—21,用固相放射免疫技术测定生物材料表面粘附血小板的新方法.对聚氨酯、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸乙酯、聚酰胺-胺等47种医用高分子材料进行了定量测定。

抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21基因克隆及单链抗体的构建和表达

目的将能与血小板膜糖蛋白 a特异结合的单克隆抗体 SZ- 2 1构建成单链抗体 ,为其临床应用奠定基础。方法通过逆转录及多聚酶链反应 ,扩增并克隆 SZ- 2 1的可变区基因 VH、VL ,经测序后构建 SZ- 2 1单链抗体 (SZ- 2 1Sc Fv) ,在大肠杆菌中进行表达。EL ISA和 Western印迹检测其与血小板的结合特性。结果 VH、VL 可变区基因符合小鼠抗体可变区特征 ,SZ- 2 1Sc Fv基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外 ,主要以包涵体形式存在 ,表达量占菌体蛋白的 2 1%。经过变性和复性后 ,该单链抗体保留了与血小板特异结合的能力。结论成功表达了 SZ- 2 1单链抗体 ,该小分子抗体具有特异结合血小板的能力 ,有望用于抗血栓治疗。

人源性抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIa Fab噬菌体抗体库的构建

目的:构建人源性Fab噬菌体抗体库,为进一步从抗体库中筛选人源性抗GPIIb/IIIaFab抗体奠定基础。方法:利用RT-PCR和噬菌体表面展示技术,直接从血小板膜糖蛋白抗体(抗-GPIIb/IIIa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次将PCR产物插入噬粒载体pComb3H相应位点,电转化大肠杆菌XL1-blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建成人源性Fab噬菌体抗体库。结果:成功地构建库容量达6.2×106的抗血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIaFab噬菌体抗体库。结论:构建了人源性Fab抗体库,并达到建库标准,可进一步从中筛选人源性Fab抗体。

血栓性脑血管疾病患者治疗前后血小板活化膜表面糖蛋白检测及临床意义

目的 :探讨血栓性脑血管疾病患者治疗前后血小板活化标记物CD62 P,GPⅡb/Ⅲa的表达及其临床应用价值。方法 :采用流式细胞仪 (FCM )检测治疗前后血小板活化标记物CD62 P、GPⅡb/Ⅲa的表达。结果 :血栓性脑血管疾病患者治疗前血小板活化标志物CD62 P、GPⅡb/Ⅲa分别为CD62 P5 2 .19± 12 .3 7% ,GPⅡb/Ⅲa 77.98± 14 .2 2 % ,较正常对照组有显著性升高 (P <0 .0 1) ;治疗后CD62 P3 1.16± 17.43 % ,GPⅡb/Ⅲa 40 .71± 11.64 %较治疗前有显著性下降 (P<0 .0 1) ,但仍高于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论 :血小板活化标志物CD62 P、GPⅡb/Ⅲa对血栓性脑血管疾病的诊断具有重要价值 。

抗血小板膜糖蛋白单抗SZ-21嵌合Fab片段基因的构建和表达研究

目的为降低抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21的免疫原性,克隆了SZ-21可变区基因,构建并表达人-鼠嵌合Fab基因工程抗体。方法利用基因克隆技术,从杂交瘤细胞系SZ-21克隆出轻、重链可变区基因,然后亚克隆到质粒pSW1中,构建成人-鼠嵌合Fab片段基因质粒pSZ-21,在大肠杆菌中表达。结果pSZ-21基因构建正确,在大肠杆菌中表达出可溶性抗体片段,表达产物具有与血小板结合的活性。结论成功地克隆了SZ-21可变区基因,并表达了可溶性人-鼠嵌合Fab基因工程抗体。

抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体洗脱性血管内支架体外实验研究

采用一种涂覆左旋聚乳酸《L-PLA)的镍钛合金支架,进行涂层基质的荧光染色和图像分析,探讨吸附法制备药物洗脱性涂层的可行性,同时通过吸附标记同位素125I的抗GP Ⅱb／Ⅲa单克隆抗体制备药物洗脱性涂层,利用放射性检测方法, 建立了药物的吸附和缓释曲线,并评价相关影响因素。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂ETBT对血小板功能的影响

目的:观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)拮抗剂——依替巴肽(Eptifibatide,ETBT)对血小板聚集、释放、收缩血块和促凝活性等的影响。方法:在正常人全血或富血小板血浆(PRP)中加入不同浓度ETBT,分别检测二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板最大聚集率(rPAmax)、血小板CD62p表达百分率、血块收缩率和血小板3因子(PF3)有效性,通过与对照组比较获得ETBT对血小板功能的抑制率。结果:各种浓度(0.5～5.0μM)ETBT均对rPAmax有显著抑制作用(P<0.01),且随ETBT浓度增加而增加;较高浓度(5.0～10μM)ETBT对血块收缩有显著抑制作用(P<0.01);ETBT(0～80μM)ETBT对血小板CD62p表达(P=0.425)和PF3有效性没有明显抑制作用。结论:ETBT显著抗血小板聚集作用,但对血小板CD62p表达和促凝作用的影响较小;ETBT抗血小板聚集及抑制血块收缩的作用与其浓度呈正相关。

利用噬菌体抗体库技术制备人源化抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体

近年来随着人们生活方式的改变,血栓性疾病正成为威胁人类生命健康的"头号杀手",发病率高居各种疾病之首,并有渐增趋势,是当代医学研究的重点和热点之一.

抗人血小板膜糖蛋白Ⅲa单克隆抗体抑制兔血栓形成的实验研究

目的 评价抗人血小板膜糖蛋白Ⅲa单克隆抗体SZ2 1抑制兔血栓形成的能力。方法不同浓度的SZ2 1( 0、10及 2 0 μg/ml)分别加入兔富血小板血浆 (PRP)中 ,进行二磷酸腺苷 (ADP)诱导的兔血小板聚集试验 ;体内注射SZ2 1( 1 5mg/kg) ,注射前及注射后 5、30及 6 0分钟时制备兔PRP ,分别进行聚集试验 ;用颈动静脉旁路血栓模型研究SZ2 1对兔血栓形成的作用 ,2 0只新西兰兔随机分成 4组 ,体内注射SZ2 1,剂量为A组 0 1mg/kg ,B组 0 4mg/kg ,C组 0 75mg/kg ,D为对照组 (SZ391mg/kg) ,然后测定血栓重量。 结果 体外 2 0 μg/ml的SZ2 1对兔血小板抑制率为 80 % ;SZ2 1体内注射 6 0分钟时完全抑制血小板聚集功能 ;血栓模型分组试验 ,各组平均栓重为A组 31mg ,B组 2 1mg ,C组 2 0 2mg ,D组 31mg ,B、C组与对照组间有明显统计学差异 (P <0 0 1)。 结论 单克隆抗体SZ2

抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-2单链抗体的构建、表达及功能研究

目的 :降低鼠源性抗体的免疫原性及分子量 ,为其进一步研究、应用奠定基础。方法 :应用RT PCR技术 ,克隆SZ 2重链、轻链可变基因。应用基因重组技术构建SZ 2单链抗体表达载体pET2 2 2scFv ,导入大肠杆菌BL2 1(DE3)Plys ,诱导表达。流式细胞术、ELISA、Westernblot检测SZ 2scFv与血小板结合能力 ,瑞斯托霉素、凝血酶和ADP诱导血小板聚集试验对表达产物功能进行研究。结果 :克隆基因序列符合小鼠轻、重链可变区基因特征 ;pET2 2 2scFv表达质粒拼接正确 ;表达产物以包涵体形式为主 ,表达量占菌体总蛋白的 2 5 % ;纯化、复性后证明表达产物具有与血小板结合的活性 ,并可抑制瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集。结论 :成功表达了SZ 2单链抗体 ,该小分子抗体具有与血小板结合的活性 ,并可抑制瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集。

血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa拮抗剂─新型的抗血小板药

血小板膜糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ拮抗剂有特异、高效抗血小板聚集作用，在治疗冠心病方面很有潜力。有一些类别在临床试验评价阶段取得了积极结果，其中Ｃ７Ｅ３已被联邦食品药品管理署批准用于临床。

血小板特异性糖蛋白抗体在血小板输注无效患者中分布的研究

目的探讨血小板输注无效(PTR)患者的血小板特异性糖蛋白抗体的表达及PTR与血小板特异性抗原的相关性。方法采用ELISA方法检测27名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体,应用PCR-SSP的方法检测其HPA-1～17基因分型。结果 27名PTR患者的HPA基因频率为HPA-1a(0.900),1b(0.100);HPA-2a(0.926),2b(0.074);HPA-3a(0.648),3b(0.352);HPA-4a(0.981),4b(0.019);HPA-5a(0.940),5b(0.060);HPA-6a(0.815),6b(0.185);HPA-7a～14a、16a、17a(1.000),7～14、16、17b(0.000);HPA-15a(0.463),15b(0.537);PTR患者的HPA抗原分布与健康献血者的基因频率无统计学差异(P>0.05)。血小板抗体阳性的27名PTR患者中,血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体阳性表达者占78%(21/27)、GPⅠa/Ⅱa抗体阳性占70%(19/27)。对3名PTR患者作血小板特异性抗原分析发现:患者产生的血小板特异性糖蛋白抗体与HPA基因型密切相关,以抗-HPA-3b、-5b为常见。结论多次输注血小板无效的患者,应选择与其HPA基因型一致的血小板供者,以提高血小板输注疗效,避免血液资源的浪费。

羟乙基淀粉急性高容量血液稀释对老年癌症患者硬膜外阻滞复合全麻下血小板膜表面糖蛋白的影响

羟乙基淀粉急性高容量血液稀释（acute hypervolemic hemodiliution，AHH）作为一种血液保护、减少异体输血的方法之一，具有操作简便、省时、费用低廉、减少血液污染机会等特点而被推广应用^[1]。但不同种类的羟乙基淀粉（HES）由于相对分子质量、分子结构及体内降解速度的不同，对凝血功能的影响也不同^[2]。本文通过流式细胞术行血小板CD42b、CD41／CD61、CD62p、CD63检测，旨在观察HES130／0．4急性高容量血液稀释对老年癌症患者硬膜外神经阻滞复合全麻下的血小板功能的影响。

缺血性脑卒中发病早期血小板膜糖蛋白Ⅵ和血清白介素-6水平变化

目的:探讨血小板膜糖蛋白Ⅵ(GPVI)和白介素-6(IL-6)在急性缺血性脑卒中早期诊断中的意义。方法:分别采用流式细胞术和ELISA检测缺血性脑卒中患者和健康对照人群GPVI和IL-6水平。通过受试者工作曲线评估GPVI和IL-6的灵敏度、特异度及界值。结果:缺血性脑卒中病人血小板GPVI和血清IL-6水平显著高于对照组,差异有非常显著性(P<0.01)。缺血性脑卒中病人GPVI与IL-6水平呈正相关(P<0.01)。缺血性脑卒中病人GPVI的ROC曲线下面积为0.984,在最适诊断参考值17.76荧光强度(FI)时,诊断的灵敏度为90.00%,特异度为93.33%。IL-6的ROC曲线下面积为0.918,在最适诊断参考值0.55ng/L时,诊断的灵敏度为66.67%,特异度为86.67%。结论:血小板GPVI含量和血清IL-6水平升高与缺血性脑卒中有关。GPVI对缺血性脑卒中具有较高的诊断价值和准确度。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的结构与功能:抗血小板治疗的新进展

本文从血小板在正常和疾病中的作用与理解血小板的功能出发 ,对研制中的抗血小板新药血小板GPⅡb/Ⅲa拮抗剂作了介绍。该类药物目前是与血小板激动剂无关的最强的血小板聚集特异性拮抗剂 ,已用于急性心肌缺血综合征 ,并作为标准抗血小板治疗的辅助药。临床试验表明 ,虽然GPⅡb/Ⅲa抑制剂的安全与疗效比、优化给药时间及出血等问题还有待解决 ,但其疗效显著 。

国产血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa受体拮抗剂盐酸替罗非班治疗PCI术后亚急性血栓患者的临床评价

2005年“中国多中心药物洗脱支架急性或亚急性血栓的调查”显示支架术后的血栓并发症是导致术后死亡的主要因素，近年来我们不断强化抗血小板治疗仍未能避免支架术后的血栓事件，支架术后的血栓问题将成为介入心脏病学研究的新热点。按支架置入后到发生血栓的时间长短将支架内血栓分为急性、亚急性和晚期血栓，其中以亚急性血栓（subacute stent thrombosis，SST）最为多见，SST指支架置入术后1-30天内形成的血栓。SST形成与血小板的活性密切相关，局部血栓多为富含血小板的血栓，常规的溶栓治疗往往不能取得很好的效果。盐酸替罗非班（tirofiban）为一种可逆性非肽类血小板膜糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa受体拮抗剂，由美国Merck公司研制开发，于1998年5月首次在美国上市，目前国产盐酸替罗非班（商品名：欣维宁）已上市。我们观察了11名PCI术后SST患者使用该药的效果，现报告如下。

抗血小板糖蛋白IIb/IIIa Fab抗体的原核表达及其生物活性

目的 :研制抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIaFab抗体。方法 :通过间接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验 ,选取鼠源抗血小板糖蛋白IIb/IIIa单克隆抗体 (mAbP14 0 )。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株 (P14 0 )中 ,克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因 ,构建原核表达重组质粒p3MH/P14 0к Fd ,并在XLI Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P14 0Fab抗体进行纯化 ,用SDS PAGE、ELISA和Westernblot等方法 ,对P14 0Fab抗体进行检测 ,并通过血小板聚集抑制试验 ,观察P14 0Fab抗体的抗栓活性。结果 :SDS PAGE和Westernblot表明 ,纯化的P14 0Fab抗体的相对分子质量 (Mr)约为 4 70 0 0。ELISA的结果显示 ,P14 0Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中 ,P14 0Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性 ,IC50 的平均值为 16 .85mg/L。结论

糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在抗血小板治疗中的应用及其研究进展

近年来 ,抗血小板药物在基础研究及临床应用方面取得了一些新的进展 ,尤其在心脑血管疾病的预防和治疗中疗效显著。新型的抗血小板药物正在不断进入临床试用 ,特别是抗血小板膜糖蛋白药物在广泛深入的研究之中。