噬菌体表面展示技术筛选抗血小板GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体

目的 用噬菌体表面展示技术 ,直接从抗血小板表面蛋白全套单链抗体噬菌体展示文库中筛选能与糖蛋白 (GP)Ⅱb/Ⅲa复合物高亲合力结合的单链抗体克隆 ,为开发有自主知识产权的抗栓药物奠定基础。方法 从活化血小板免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA ,反转录成cDNA后 ,用抗体可变区混合引物扩增全套轻、重链可变区基因 ,经重叠延伸反应 ,装配成单链抗体 (ScFv)基因 ,将其克隆到噬菌体载体pHEN1中 ,构建单链抗体噬菌体抗体库。对抗体库进行亲合筛选后 ,ELISA法鉴定抗GPⅡb/Ⅲa复合物单链抗体。结果 经过 4轮“吸附———竞争性洗脱———扩增”的富集过程 ,phage -ELISA得到一个ELISA活性较高的能与GPⅡb/Ⅲa结合的克隆。序列测定符合抗体可变区结构特点。结论 成功构建了全套抗血小板表面蛋白单链抗体噬菌体展示文库 。

通心络胶囊对冠心病人血小板GPⅡb/Ⅲa复合物活性影响的临床研究

目的:观察通心络胶囊(人参,水蛭,全蝎等)口服对冠心病之不稳定心绞痛或急性心肌梗塞后病人血小板GPⅡb/ Ⅲa复合物活性的影响。方法:病人随机分为常规治疗组与通心络治疗组,应用流式细胞仪检测治疗前后CD43,CD62p, CD63等活性变化。结果:2周通心络治疗后通心络组病例血小板GPⅡb/Ⅲa复合物活性有统计学意义的降低,但较柔 和。结论:通心络具有较温和的抑制GPⅡb/Ⅲa复合物活性的作用,可认为是用于冠心病长期治疗较好的中药制剂。

急诊介入治疗前后AMI患者P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达研究

目的观察急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)患者急诊经皮冠状动脉介入治疗(简称介入治疗)前后血小板活化指标P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达的变化,探讨介入治疗对AMI患者血小板活化的影响。方法选取疑似冠心病且冠脉造影正常的21例患者为对照组,行急诊介入治疗的AMI患者24例(AMI组),应用流式细胞技术检测对照组及AMI组患者行介入治疗前后的P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达率。结果与对照组比较,AMI组患者P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);介入治疗后3dAMI组患者P选择素和血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物表达率较术前下降,但与对照组比较仍有较高水平表达,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论AMI患者急诊介入治疗前后体内血小板均处于高度活化状态,AMI患者术后抗血小板聚集治疗极其重要。

脑梗死急性期患者血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素的表达

目的观察血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素在脑梗死急性期患者体内的表达。方法对比脑梗死急性期患者(脑梗组)及健康对照者(对照组)血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素的表达水平。观察脑梗组中高危组、高血压组、糖尿病组、高血脂组和无危组的血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素表达水平。结果脑梗组血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物及血小板膜P-选择素表达高于对照组(P<0.01);高危组、高血压组、糖尿病组、高血脂组的血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素均高于无危组(P<0.05)。结论血小板膜GPⅡb/Ⅲa复合物和P-选择素可作为表明血小板活化的敏感指标。高血压、糖尿病、高血脂等危险因素可促进血小板活化。

冠心病患者阿司匹林抵抗与识别活化血小板GPⅡ bⅢ/a复合物单克隆抗体(PAC-1)的相关性研究

目的探讨冠心病患者阿司匹林抵抗现象(AR)与PAC-1的相关性。方法经冠脉造影确诊为冠心病患者80例,服用阿司匹林100 mg/d≥7d,以二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)为诱导剂测定血小板聚集率,以ADP诱导的血小板聚集率≥70%定义为AR,<70%为阿司匹林敏感(aspirin sensitive,AS)。同时测定患者血小板PAC-1的表达阳性率。结果AR的发生率为20%,两组患者服药后血小板PAC-1表达有显著性差异,AR组患者服药后PAC-1水平显著高于AS组(P<0.05)。结论冠心病患者AR的发生率为20%,PAC-1可作为检测AR的有效指标。

新型血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂盐酸替罗非班

盐酸替罗非班为一种新型可逆性非肽类血小板表面糖蛋白 (GP)Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂 ,可竞争性抑制纤维蛋白原和血小板GPⅡb/Ⅲa受体的结合 ,静脉注射可剂量依赖性地抑制体外血小板聚集、延长出血时间、抑制血栓形成。其治疗急性冠脉综合征疗效确切 ,安全性好。本文综述了盐酸替罗非班的药理学、毒理学、药代动力学和临床应用方面的研究进展。

原发免疫性血小板减少症GPⅡb/Ⅲa抗体检测的临床意义

目的:检测原发免疫性血小板减少症(ITP)患者GPIIb/IIIa抗体水平并探讨其临床意义。方法:应用流式微球技术(CBA)检测血小板GPⅡb/Ⅲa自身抗体,记录各个样本的平均荧光强度(MFI),计算样本的MFI与正常对照MFI均值的比率。结果:ITP组、非免疫性血小板减少组和正常对照组的MFI比率分别为(2.61±1.09)、(1.32±0.59)和(0.95±0.40),非参数检验得ITP组MFI比率高于非免疫性血小板减少组和正常对照组(P<0.01),而后两者MFI比率差异无统计学意义(P>0.05)。经统计学处理,CBA对ITP诊断的敏感性为71.88%,特异性为84.62%,由ROC曲线得CBA区分ITP患者与非免疫性血小板减少患者的能力为0.848。结论:CBA检测血小板GPIIb/IIIa抗体敏感性、特异性均较高,且操作简便,重复性好,对ITP的辅助诊断具有一定的实用价值。

重组抗人血小板GPⅡb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)_2在Beagle犬体内药动学

目的研究了重组抗人血小板GPIIb/Ⅲa嵌合单抗F(ab′)2经静脉单次给药后在Beagle犬中的药动学。方法按不同时间点采血,分离血浆,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定犬血浆中嵌合单抗F(ab′)2的浓度,根据非房室统计矩模型进行曲线拟合并计算药动学参数。结果Beagle犬分别静脉单次注射高、中、低(1.2,0.8,0.4mg.kg-1)后,t1/2分别为(7.35±0.65),(8.28±0.68)和(7.03±3.26)h,CLs与Vss随着剂量的减小发生增加的变化,血药浓度-时间曲线下面积AUC0-inf分别为(2453.70±371.59),(1097.64±142.11)和(362.63±169.12)μg.h.L-1,剂量之比为3:2:1,对应的AUC0-inf比值为6.8:3:1,剂量与AUC成正相关性,相关系数R2=0.9714,但是AUC0-inf的增加量大于剂量的增加量。结论在本实验的剂量范围内,剂量与AUC0-inf成正相关性,AUC0-inf的增加量大于剂量的增加量,预示在以上剂量范围内嵌合单抗F(ab′)2在Beagle犬血浆中的浓度变化可能呈非线性药动学规律;动物性别对药动学参数无显著性影响。

血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂的进展与临床评价

目的:本文介绍血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂的进展与评价。方法:采用国内、外文献综述方法。结果及结论:作为抗血小板药中的一支奇葩,血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂进展十分迅速,对膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受体选择性高,在治疗血栓、急性心肌梗死、急性冠脉综合征、非ST段抬高心肌梗死者方面展现了良好的治疗前景。

血小板膜糖蛋白GP Ⅱb/Ⅲa及其受体拮抗剂与冠心病

血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa是血小板膜上的一种糖蛋白受体,在凝血过程中的血小板黏附和聚集中起关键作用,血小板激活导致GPⅡb/Ⅲa构型发生变化,继而使GPⅡb/Ⅲa受体与配体纤维蛋白原的结合加强,纤维蛋白原在相邻血小板分子间形成桥梁,导致血小板聚集的加速。GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂正是基于这一原理应用于冠心病的治疗中,临床实验已证实其在PTCA术后、不稳定性心绞痛、急性心肌梗死具有良好的疗效,研究GPⅡb/Ⅲa及其受体拮抗剂具有重要意义。因而,本文对GPⅡb/Ⅲa及其受体拮抗剂与冠心病作一简要阐述。

GPⅡb/Ⅲa抑制剂抗血小板机理及临床应用进展

GPⅡb/Ⅲa糖蛋白复合物在血小板聚集过程中起关键作用,GPⅡb/Ⅲa抑制剂也逐渐开始应用于血栓性疾病的预防和治疗。本文着重综述GPⅡb/Ⅲa在血小板聚集中的作用及GPⅡb/Ⅲa抑制剂在抗血小板聚集的临床应用。

抑制血小板聚集功能的抗血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体的筛选

目的:筛选出血浆中含有抑制血小板聚集的血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体的血小板减少性紫癜(ITP)患者,为人源化抗GPⅡbⅢa基因工程抗体的研制做准备。方法:用改良MAIPA法检测24例慢性ITP患者血浆有无血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢa自身抗体,用血小板聚集试验研究抗GPⅡbⅢa自身抗体对血小板聚集的影响。结果:24例慢性ITP患者中10例(41.7％)血浆中抗GPⅡbⅢa自身抗体阳性,2例明显抑制血小板聚集功能。结论:少数抗CPⅡbⅢa自身抗体可抑制血小板聚集功能。

血小板GPⅡb/Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对GPIIb/IIIa活化的影响

目的探讨GPⅡb/Ⅲa拮抗剂RGDS和钙通道拮抗剂Nifedipine对ADP诱导的血小板GPⅡb/Ⅲa活化的影响。方法 GP II b/11I a特异性抗体PAC-1标记活化GP II b/11I a,流式细胞仪检测静息及ADP(5μmol/L)诱导的血小板PAC-1表达率。结果静息状态下的血小板PAC-1表达率为(0.80±0.85)%;在ADP(5μmol/L)激动下,PAC-1表达率为(77.27±9.47)%;RGDS以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率,IC50值为206μmol/L;Nifedipine能以浓度依赖性的方式抑制PAC-1表达率,IC50值为178μmol/L;RGDS联合Nifedipine对PAC-1表达的联合抑制率为(60.15±16.35)%,二者的交互效应差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GPIIb/IIIa受体拮抗剂RGDS和Ca2+拮抗剂Nifedipine均抑制ADP诱导的血小板GPIIb/IIIa活化,其抑制作用呈浓度依赖性,随拮抗剂浓度增加抑制作用增强;两者对血小板GPIIb/IIIa活化的抑制存在协同作用。

新型抗血小板药物——GPⅡb／Ⅲa受体抑制剂在冠心病防治中研究进展

越来越多的研究表明血小板高活性在冠心病患者心肌缺血的发生、发展过程中起着重要作用。因此抗血小板药物的研究成为冠心病治疗的一个重要方面。近年来一类新型的抗血小板膜糖蛋白受体的药物日益受到人们的重视，其中最突出的就是对血小板GPⅡb／Ⅲa受体抑制剂的研究。本文就近年来运用该类药物在心血管血栓性疾病的防治方面所进行的一系列基础和临床研究作一综述。

新型血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂Z4A5抗血小板作用的研究

目的研究血小板GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂Z4A5抑制血小板聚集的活性、稳定性以及对已聚集血小板的解聚作用。方法采用比浊法测定Z4A5对体外二磷酸腺苷(aden-osine diphosphate,ADP)诱导血小板聚集的抑制作用和稳定性及对ADP诱导聚集血小板的解聚作用。结果 Z4A5浓度依赖性的抑制ADP诱导的血小板聚集,半数抑制浓度(50%concentration of inhibition,IC50)为(0.46±0.05)μmol.L-1(n=10,P<0.05);Z4A5在血浆中孵育3 h仍保持85.55%(P<0.05)的活性;10μmol.L-1 Z4A5在加入ADP诱导聚集的血小板3 min及7 min后的解聚率为分别为22.66%(P<0.05)及30.93%(P<0.01)。结论 Z4A5在体外有较强的、稳定的抑制血小板聚集作用,而且对聚集血小板有一定的解聚作用。

急性心肌梗死伴血小板计数减少患者血小板表面膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物表达观察

目的：观察急性心肌梗死伴血小板减少患者血小板表面糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa复合物表达变化并探讨其临床意义。方法选择急性心肌梗死伴血小板减少患者50例为急性心肌梗死伴血小板减少组，急性心肌梗死血小板正常或增多患者52例为急性心肌梗死伴血小板正常或增多组，健康人20例为对照组。用流式细胞术检测血小板表面CD41和CD61，二者其中之一阳性或者均阳性视为GPⅡb／Ⅲa复合物表达阳性。计算各组血小板表面GPⅡb／Ⅲa复合物阳性表达率。结果急性心肌梗死伴血小板减少组、急性心肌梗死伴血小板正常或增多组、对照组患者血小板表面GPⅡb／Ⅲa复合物阳性表达率分别89．0％±7．4％、97．0％±10．9％、79．0％±4．2％。急性心肌梗死伴血小板减少组、急性心肌梗死伴血小板正常或增多组患者血小板表面GPⅡb／Ⅲa复合物阳性表达率均高于与对照组，P均＜0．05。按照血小板计数对急性心肌梗死伴血小板减少组患者进行分层，结果血小板计数80×10^9／L～＜100×10^9／L者、50×10^9／L～＜80×10^9／L者、30×10^9／L～＜50×10^9／L者血小板表面GPⅡb／Ⅲa复合物阳性表达率分别为96．5％±18．9％、92．4％±8．0％、50．1％±4．1％。与对照组相比，血小板计数80×10^9／L～＜100×10^9／L、50×10^9／L～＜80×10^9／L的急性心肌梗死患者血小板表面GPⅡb／Ⅲa复合物阳性表达率升高（P均＜0．05），血小板计数30×10^9／L～＜50×10^9／L的急性心肌梗死患者血小板表面GPⅡb／Ⅲa复合物阳性表达率降低（P＜0．05）。结论急性心肌梗死伴血小板减少患者血小板表面GPⅡb／Ⅲa复合物阳性表达率高于健康人，血小板50×10^9／L～＜100×10^9／L的急性心肌梗死患者有必要进行抗血小板聚集治疗。