齐墩果酸和去氧胆酸衍生物合成及抗血管生成活性研究

目的合成齐墩果酸、去氧胆酸-丙酮基衍生物并评价2者对新生血管生成的影响。方法以丙酮/K2CO3作为反应体系,利用溴代川芎嗪分别与齐墩果酸和去氧胆酸发生亲核取代反应,得到齐墩果酸和去氧胆酸衍生物。采用鸡胚绒毛尿囊膜模型(chorioallantoic membrane,CAM)对其进行在体新生血管活性评价。结果产物结构经1H-NMR、13C-NMR及IR确证为齐墩果酸乙酰甲酯和和去氧胆酸乙酰甲酯;二者作用于CAM模型后,新生血管的数目均比空白组减少。结论在丙酮/K2CO3/溴代川芎嗪反应体系中,得到齐墩果酸和去氧胆酸-丙酮基衍生物;经CAM模型测试发现去氧胆酸-丙酮基衍生物对新生血管具有较好抑制活性。

基于斑马鱼模型对α-倒捻子素抗血管生成活性的初步探讨

目的:研究α-倒捻子素的抗血管生成活性。方法:首先我们测定了α-倒捻子素对斑马鱼的急性毒性,然后在安全浓度条件下,采用转基因斑马鱼和野生型斑马鱼模型分别通过不同的检测方法来测定α-倒捻子素的抗血管生成活性。结果:α-倒捻子素能够抑制转基因斑马鱼节间血管的生成数目,并且呈现剂量依赖性;α-倒捻子素能够降低72 hpf野生型斑马鱼胚胎体内的碱性磷酸酶含量,呈现剂量相关性。结论:α-倒捻子素具有明显的抗血管生成活性。

土党参的化学成分及其抗血管生成活性研究

目的对土党参（金钱豹Campanumoea javanica的根）的化学成分及其抗血管生成活性进行研究。方法采用多种柱色谱技术进行分离纯化,通过波谱分析鉴定化合物结构,并用斑马鱼模型评价其抗血管生成活性。结果从土党参90%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位中分离得到14个化合物,分别鉴定为金钱豹苷（1）、lobetyol（2）、4E,8E,12E-三烯-10-炔-1,6,7-十四烷三醇（3）、9-（2-四氢吡喃）-8E-烯-4,6-二炔-3-壬醇（4）、9-（2-四氢吡喃）-2E,8E-二烯-4,6-二炔-1-壬醇（5）、lobetyolinin（6）、（Z）-3-己烯-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（7）、3,4-二羟基苯甲酸（8）、党参苷II（9）、zanthocapensol（10）、蛇葡萄素（11）、贝壳杉双芹素（12）、β-脱皮甾酮（13）、α-托可醌（14）。结论化合物1为新的聚乙炔苷,命名为金钱豹苷;化合物2~14为首次从金钱豹属植物中分离得到。化合物3和4表现出一定的抗血管生成活性。

粤蛇葡萄的化学成分及其抗血管生成活性研究

目的对粤蛇葡萄Ampelopsiscantoniensis地上部分的化学成分及其抗血管生成活性进行研究。方法采川多种托色谱技术进行分离纯化，通过波谱分析鉴定化合物结构，并用斑马龟模型筛选其抗血管生成活性。结果从粤蛇葡萄地上部分90％乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部分中分离得到15个化合物，分别鉴定为粤蛇葡萄醇（1）、圆柚酮（2）、aromadendrane-4B，1013．diol（3）、脱落酸（4）、12-oxo—hardwickiicacid（5）、白桦脂酸（6）、platanicacid（7）、香草酸（8）、h黎芦醉（9）、nectandrinB（10）、nectandrinA（11）、3，5，7-三羟基色原酮（12）、5，7，3’，4‘，5’．五羟基：：氧黄酮（13）、化腆松系（14）、杨梅营（15）。结论化合物1为新的桉烷倍半萜，命名为粤蛇葡萄醇；化合物2～7、10～12为首次从蛇葡萄植r}一分离僻剑；其余化合物为首次从该植物中分离得到。化合物9、11、12表现出一定的抗斑马鱼血管生成活性。

蜈蚣藻中一种硫酸半乳聚糖的分离纯化、结构鉴定及其抗新生血管生成活性

为了寻找多糖类血管生成抑制剂,我们以蜈蚣藻(Grateloupia filicina)为原料,经水提、醇沉、DEAE-Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B凝胶柱层析分离纯化,得到一个均一多糖(GFP15).采用HPGPC、糖组成分析、绝对构型测定、甲基化分析、IR和NMR等技术对GFP15进行结构鉴定.结果表明,GFP15为一琼胶和卡拉胶中间型的硫酸半乳聚糖,主要由1,3连接的β-D-半乳糖和1,4连接的2,3位硫酸基双取代的α-D-半乳糖交替组成,1,3连接β-D-半乳糖的4位和6位上分别有少量的硫酸基取代,1,4连接的半乳糖有少量是α-L-半乳糖,此外,还有极少量的木糖、3,6-脱水半乳糖和6-甲基-半乳糖.利用鸡胚尿囊膜法(CAM)对GFP15进行抗新生血管生成活性评价,结果显示,GFP15(100μg/egg)能抑制尿囊膜新生血管的形成,提示GFP15作为一种多糖类血管生成抑制剂具有开发为抗肿瘤药物的潜在价值.

1,3-二氢-1,3-二氧-2H-异吲哚类衍生物的合成及抗新生血管生成活性研究

根据整合素 αvβ3 受体内源性配基 RGD三肽构效关系和作用机制 ,以沙利度胺为先导化合物 ,设计并合成了 5个未见文献报道的 5 -羧基 -1 ,3-二氢 -1 ,3-二氧 -2 H-异吲哚类衍生物 ,其结构经元素分析、红外光谱及核磁共振谱确证 .体外初步生物活性筛选实验结果表明 ,部分目标物对脐静脉血管内皮细胞株 ( ECV30 4 )增殖有显著抑制活性 .

姜黄属植物提取物的抗侵染和抗血管生成活性

作者评价了姜黄属植物的抗肿瘤活性。

血管发生抑制因子restin的克隆表达及其抗血管活性的初步研究

目的 :克隆人血管发生抑制因子restin(hRS) ,在E .coli中融合表达 ,并测定其抗血管活性。方法 :用RT PCR法从中国人胎盘组织中扩增hRS基因 ,重组入pGEM T载体中并测序鉴定 ,构建原核表达载体pGEX hRS ,表达融合蛋白GST hRS。融合蛋白经亲和纯化及凝血酶切后 ,采用鸡胚绒毛膜尿囊膜试验检测其抗血管生成活性。结果 :RT PCR产物为 5 64bp ,测序结果与Genbank中胶原XV(COL15A1)的C端序列一致 ,但在 2 1位 (TCT→TCG)引起丝氨酸的同义突变 ,82位 (ACA→TCA)引起丝氨酸突变为苏氨酸。诱导表达的人GST hRS融合蛋白经凝血酶切后 ,分子量为 2 0kD ,具有抗血管生成活性。结论 :hRS的成功克隆、表达为抗血管生成治疗实体瘤的研究奠定了实验基础。

肿瘤抑素Tum5对人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性以及碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的研究肿瘤抑素Tum5对人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性以及碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法取对数生长期人脐静脉血管内皮细胞分为4组:正常对照组:无任何处理的人脐静脉血管内皮细胞;rAd-GFP组:人脐静脉血管内皮细胞经rAd-GFP感染并培养;rAd-Tum5组:人脐静脉血管内皮细胞经rAd-Tum5感染并培养;rAd-Tum5+VEGF组:人脐静脉血管内皮细胞经rAd-Tum5感染后经外源性VEGF处理。通过CCK-8活性检测试剂盒、Transwell实验、Matrigel实验分别检测细胞增殖率、迁移细胞数及管腔形成情况。取雄性健康清洁级SD大鼠64只采用随机数字表法将大鼠分为:正常对照组、碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组、碱烧伤+rAd-Tum5组,每组16只,除正常对照组外其余各组建立角膜碱烧伤模型。其中正常对照组无任何处理,碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组、碱烧伤+rAd-Tum5组于烧伤后分别经结膜下注射等量无菌生理盐水、rAd-GFP、rAd-Tum5病毒,记录碱烧伤后第1天、第7天、第14天角膜新生血管相对面积及浸润炎性细胞数。结果 CCK-8实验结果显示rAd-Tum5组较正常对照组、rAd-GFP组细胞增殖率降低(均为P<0.01);而rAd-Tum5+VEGF组细胞增殖率较rAdTum5组显著升高(P=0.004),rAd-Tum5+VEGF组与正常对照组和rAd-GFP组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Transwell实验结果显示rAd-Tum5组相对于正常对照组、rAd-GFP组每个视野细胞迁移数显著降低(均为P<0.01);而rAdTum5+VEGF组相对于rAd-Tum5组显著升高(P=0.000),但其迁移能力尚未恢复到正常水平,与正常对照组和rAd-GFP组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Matrigel实验结果显示rAd-Tum5组相对于正常对照组、rAd-GFP组每个视野细胞成管数显著降低(均为P<0.01);而rAd-Tum5+VEGF组相对于rAd-Tum5组显著升高(P=0.001)。大鼠角膜碱烧伤后第1-14天,各组角膜新生血管密度及数量逐渐增高,但是碱烧伤+rAd-Tum5组第7天、第14天角膜新生血管相对面积均显著低于碱烧伤组和碱烧伤+rAd-GFP组,提示Tum5能降低角膜新生血管生长速率并减少新生血管密度,抑制大鼠碱烧伤诱导的新生血管的形成。碱烧伤后第7天、第14天,正常对照组角膜完整、细胞排列有序,无炎性细胞浸润;碱烧伤后第7天,碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组上皮结构紊乱,角膜水肿,炎性细胞浸润明显,而碱烧伤+rAd-Tum5组每个视野炎性细胞浸润数较碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组明显减少,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。碱烧伤后第14天,碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组和碱烧伤+rAd-Tum5组每个视野炎性细胞浸润数较第7天显著下降,同时碱烧伤+rAd-Tum5组角膜上皮结构整齐,水肿消退,每个视野炎性细胞浸润数显著低于碱烧伤组以及碱烧伤+rAd-GFP组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论 Tum5可能经VEGF通路抑制人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性;Tum5可显著抑制碱烧伤诱导的角膜新生血管生成及炎性细胞浸润。

高山尖杉酯碱抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成

目的 了解高山尖杉酯碱 (H)对血管生成的影响 ,为进一步研究打基础。方法 于发育第 8天的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上植入明胶海绵载体 ,其中加入不同剂量的H ,计数长入载体的血管和载体内的微管密度 (MVD)。结果 在CAM上 ,长入载体边缘的血管数和MVD在 10 0ng以上组与对照组间的差别有统计学意义 (p <0 .0 1)。结论 在CAM中 ,10 μg/kg的低剂量能抑制CAM的血管生成 。

重组人内皮抑素在大肠杆菌中表达及其生物学活性鉴定

目的 利用大肠杆菌原核表达系统表达重组人内皮抑素Endostatin ,并对其进行生物学活性鉴定。方法 采用RT PCR方法从人胚肝中钓取人内皮抑素cDNA ,将其克隆入pGEM TEasy克隆载体中 ;经全自动序列分析仪测序确证后 ,将人内皮抑素cDNA亚克隆入原核表达载体pWR450 1 ,构建含人内皮抑素cDNA的重组质粒 ;将该重组质粒转化入大肠杆菌TG1 中进行诱导表达 ,表达产物经SDS PAGE鉴定 ;表达产物初步纯化复性后以鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和小鼠伤口愈合实验对其进行生物学活性鉴定。结果 成功获得 549bp人endostastin基因 ,测序证实序列正确。经IPTG诱导的重组原核表达质粒表达出重组人内皮抑素的融合蛋白 ,此蛋白在SDS PAGE凝胶上显示出一条约 75KD的阳性条带。重组人内皮抑素融合蛋白的初纯物在体外能抑制鸡胚尿囊膜血管生成及延长小鼠伤口愈合时间。结论 人内皮抑素融合蛋白在大肠杆菌原核表达系统中高水平表达 ,并具有抗血管生成活性 。

低分子多糖对肿瘤血管生长因子抑制作用的研究

目的探讨低分子多糖对肿瘤血管生长因子的抑制作用。方法采用低分子多糖点样于接种肿瘤血管生长因子的鸡胚绒毛尿囊膜上,分别50 ug、100 ug、200 ug及对照组,置37℃CO2培养箱,48 h后观察结果。结果低剂量组50 ug组肿瘤血管生长略受抑制,中剂量100 ug组肿瘤血管生长受到明显抑制,高剂量200 ug组肿瘤血管出现坏死。结论低分子多糖能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜中的肿瘤血管生长,并随剂量增加对肿瘤血管生长因子的抑制作用而增强,且具有很强的抗血管生成活性。

恩度+吉西他滨治疗卵巢恶性肿瘤4例报告

目前，治疗卵巢癌多选用以铂类为基础的联合化疗方案治疗，但仍存在复发及转移。恩度为重组人血管内皮抑制素，有广谱抗血管生成活性，可通过抑制血管内皮细胞迁移而抑制肿瘤新生血管生成，阻断肿瘤营养供应，从而抑制肿瘤增殖或转移。2010～2011年，我院采用恩度＋吉西他滨（GCTB）治疗卵巢恶性肿瘤患者4例，取得较好疗效。现报告如下。

3-芳基-2,3-二氢苯并呋喃类化合物的合成研究

二氢苯并呋喃类化合物在自然界分布广泛,具有极高的应用价值.其中尤为重要的是,二氢苯并呋喃类化合物是关键的药物合成中间体,本身还具有抑制肿瘤血管生成的作用,因此探索关于二氢苯并呋喃类化合物的合成方法是十分必要的.通过实施本章介绍的实验方案便捷、高效地合成得到一种3-芳基二氢苯并呋喃类化合物4,期望以化合物4为先导化合物,通过实施此方案进一步合成一系列其它3-芳基-2,3-二氢苯并呋喃类化合物,继而筛选出具有较强抗肿瘤血管生成活性的目标分子.