抗角蛋白抗体免疫印迹检测技术的建立及临床应用

目的建立抗角蛋白抗体(Anti-keratin antibody,AKA)的免疫印迹检测技术,探讨其临床适用性和实用性。方法提取大鼠食管上皮组织的角质层抗原,通过SDS-PAGE电泳后将其转移到硝酸纤维素(NC)膜上,对病人标本进行AKA的免疫印迹检测,以间接免疫荧光法作对照。结果类风湿性关节炎(RA),系统性红斑狼疮(SLE)和干燥综合征(SS)的AKA阳性率分别为45.8%,8.6%和16.7%。结论免疫印迹法检测AKA比间接免疫荧光法检测具有更好的灵敏度,而且操作简便,结果易读。

老年类风湿关节炎患者抗角蛋白抗体检测意义

目的 了解抗角蛋白抗体 (AKA)对老年类风湿关节炎 (EORA)的诊断意义。 方法 以Wistar大鼠中 1/ 3食管组织冰冻切片为底物 ,采用间接免疫荧光法检测 5 1例EORA及 139例对照组的血清AKA ,记录同期临床及实验室指标。 结果 AKA对EORA诊断敏感性为 31 4% ,特异性为 98 6%。早期EORA患者AKA阳性率 2 8 6%。AKA阳性组IgM、血沉 (ESR)较阴性组高 ;医生及患者对病情活动性评分、Sharp评分有增高趋势。 16例AKA阳性EORA中 ,类风湿因子 (RF)、抗核周因子 (APF)、抗Sa抗体阳性数分别为 11、15例和 4例。AKA和APF相关。 结论 AKA有助于EORA诊断及早期诊断 。

抗环瓜氨酸肽抗体、抗角蛋白抗体、类风湿因子检测在类风湿关节炎诊断中的意义

类风湿性关节炎（RA）是常见的以关节滑膜慢性炎症病变为主要表现的慢性自身免疫性疾病,发病两年内即可出现不可逆性骨关节破坏。早期诊断并给予治疗能及时控制病情、减少骨关节破坏并改善预后。故早期诊断治疗是降低RA致残的重要途径。

评价类风湿因子与抗环瓜氨酸抗体及抗角蛋白抗体联合检测类风湿性关节炎的参考价值

目的探讨联合检测类风湿因子（Rheumatoid Factor，RF）、抗环瓜氨酸多肽（Cyclic Citrulline Peptide，CCP）抗体及抗角蛋白抗体（Antikeratin Antibody，AKA）对于类风湿性关节炎的临床诊断价值。方法在2014年1月至2016年9月期间本院收治的类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）患者中随机选取85例，将其作为RA组，另选取同期本院收治的非RA患者105例作为非RA组，采用速率散射比浊法对两组受试对象RF进行检测，采用酶联免疫吸附法对抗CCP抗体进行检测，采用间接免疫荧光染色法对AKA进行检测，分别探讨3种指标单独检测与联合检测对RA患者的临床诊断结果。结果在单独检测中，RF对于RA患者的诊断效能维持在70．00％左右水平，其中以AKA（93．33％）、抗CCP抗体（94．29％）单独检测对于RA的诊断特异性较高，均在90．00％以上，但上述二者对于RA的诊断敏感性（64．71％、49．41％）较低；在联合检测中，RF＋抗CCP抗体＋AKA联合检测对于RA的诊断敏感性最低，仅为29．41％，但3种联合检测诊断特异性高达100．00％，诊断准确性高达92．86％，明显高于RF＋抗CCP抗体（74．21％）和RF＋AKA（69．47％）联合检测，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论RF、抗CCP抗体、AKA3种RA血清学指标在RA诊断中单独应用均存在一定局限性，通过3种指标联合应用，可有效提供RA诊断准确率，特别是在提高RA诊断特异性方面具有显著价值，可有效减少误诊或漏诊。

抗角蛋白抗体在老年类风湿关节炎中检测意义

目的 :了解抗角蛋白抗体 (AKA)对老年类风湿关节炎 (EORA)诊断意义。方法 :以 Wistar大鼠中 1/ 3食管组织冰冻切片为底物 ,采用间接免疫荧光法检测 5 1例 EORA及 13 9例对照组的血清 AKA,记录同期临床及实验室指标。结果 :AKA对 EORA诊断敏感性 3 1.4% ,特异性 98.6%。早期 EORA患者 AKA阳性率 2 8.6%。 AKA阳性组 Ig M、ESR较阴性组高 ;医生及患者对病情活动性评分、Sharp评分有增高趋势。 16例 AKA阳性 EORA中 ,RF、APF、抗 Sa抗体阳性数分别为 11例、15例和 4例 ,AKA与 APF相关。结论 :AKA有助于 EORA诊断及早期诊断 。

大肠癌淋巴结微转移免疫组化检测与预后关系

目的:探讨大肠癌淋巴结微转移免疫组化检出率及淋巴结微转移与临床预后的关系.方法:应用抗细胞角蛋白(CK)和癌胚抗原(CEA)mAb,对82例大肠癌(Dukes’B期)根治术后经病理常规检查为转移阴性的667枚淋巴结进行免疫组化(SP法)检测,结合随访资料进行临床预后分析.结果:转移阴性的82例667枚淋巴结中,18例(21.9%,18/82)42枚(6.3%,42/667)淋巴结中发现微小转移的癌细胞,其中13例10a内因局部复发和远处转移死亡.64例免疫组化检测阴性的患者仅24例复发死亡.免疫组化诊断微转移阳性和阴性组10a生存率分别是27.8%(5/18)和62.5%(40/64).差异非常显著(P<0.05).结论:应用肿瘤特异性抗体检测常规病理检查阴性的淋巴结有助于发现微小转移的癌细胞,对估计临床预后,指导治疗有重要意义.

角蛋白阳性细胞检测在肿瘤转移诊断中的意义

目的 :探讨建立早期诊断肿瘤转移的方法。方法 :用免疫组化方法检测癌症患者的骨髓涂片中的角蛋白阳性细胞。结果 :2 1株人的癌细胞株中 ,凡上皮来源者均呈阳性反应 ,非上皮来源者均呈阴性反应。 2 4例癌症患者中 ,18例骨髓中有角蛋白阳性细胞 ,其中 1/ 3的患者淋巴结没有转移。另外冰冻检查发现 ,分化不明显的癌细胞角蛋白表达更多 ,染色更深。结论 :骨髓中角蛋白阳性细胞检测技术 ,可用于某些癌症血行转移的早期诊断和形态分化不明确。

抗人细胞角蛋白7(CK7)单克隆抗体的制备及鉴定

用KLH偶联合成细胞角蛋白7(CK7)优势表位多肽片段(C14)免疫小鼠,经细胞融合技术制备CK7单克隆抗体(mAb),并收集临床组织进行免疫组化鉴定。C14多肽作为抗原具有良好的免疫反应性。本研究共获得了3株能稳定分泌抗CK7抗体的单克隆细胞株,选择亲和力较好的7A8单克隆抗体进行免疫组化鉴定,结果表明,本研究筛选的7A8单克隆抗体的质量浓度为0.49μg/mL时,与收集的临床标本均有良好的特异性反应,低于医院常用CK7检测试剂盒中抗体质量浓度2~5μg/mL,表现出较高的灵敏度。本研究筛选的7A8单克隆抗体为研发CK7快速诊断试剂提供了关键的原材料。

不同种类抗角蛋白抗体的应用比较

抗角蛋白抗体是鉴别上皮性肿瘤的有效标记物之一,由于角蛋白分子量多种多样,故形成之抗体亦不完全相同,其免疫反应亦异。本文应用8种不同种类之抗角蛋白抗体(其中5种系北京生研所提供)对87例各种类型之肿瘤比较了它们在免疫组化反应上的差异。结果显示,多克隆抗体k-D反应谱系较广,且对低分化鳞癌的反应亦较好,但非特异性染色较重易造成判断上的困难。单克隆抗角蛋白抗体的特异性较强,非特异性染色轻。但反应谱较窄。其中HK2对腺癌的敏感性较高,如将HK2、HK5按1∶1比例混合使用则更可提高其对腺癌的反应程度,同时还相应提高了对鳞癌的反应能力。

一种国产抗环瓜氨酸肽抗体酶联免疫吸附试验检测试剂盒的评价

近年来，国内外均有研究报道抗核周因子（APF）、抗角蛋白抗体（AKA）和抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）的共同抗原决定簇环瓜氨酸肽（CCP）对类风湿关节炎（RA）具有较高的特异性和敏感性，这对早期诊断RA具有重要意义，被视为RA新的血清学指标。目前，开展抗CCP抗体检测项目的国内医院用的都是国外产品，因国外产品价格偏高。限制了其广泛使用。

天然抗角蛋白单克隆抗体3B4的多反应性鉴定及其分子机制的初步探讨

目的：对天然抗角蛋白单克隆抗体384的多反应性进行鉴定，并探讨其分子基础．方法：用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)和免疫组化法检测384与多种抗原的反应活性，分析其可变区基因与氨基酸序列．结果：384除与角蛋白和皮肤发生较强的反应外。尚能选择性与多种具有不同表位的抗原和不同的组织反应；同源性分析表明。其重、轻链可变区基因分别与胚系基因VH1 J558．42及VK1 am4高度同源；HCDR3区为该抗体区别于其他同源性较高的免疫球蛋白的惟一基序，

免疫组化染色检测淋巴结微转移癌的价值

肿瘤微转移可能影响患者的预后，检测肿瘤的微转移对肿瘤的临床分期、治疗方案的选择具有重要意义。大量研究认为常规H—E染色对发现肿瘤淋巴结微转移的作用有限，而免疫组化染色检测能明显提高微转移灶的检出率，但亦有相反的意见。本研究将区域淋巴结标本作细胞角蛋白19（CK19）和上皮膜抗原（EMA）免疫组化染色，比较其与常规H—E染色在检测淋巴结微转移癌方面的作用。

类风湿关节炎四种自身抗体的检测及意义

为评估类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated pepdide,CCP)抗体、抗Sa抗体和抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)自身抗体对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断的意义,采用速率散射比浊法定量测定RF、ELISA法定量测定抗CCP抗体、免疫印迹法检测抗Sa抗体、间接免疫荧光法检测AKA,检测了123例诊断明确的类风湿关节炎患者、105例其他结缔组织病患者和78名键康人血清样本。结果显示:RF、抗CCP抗体、抗Sa抗体和AKA的诊断敏感性分别为62.6%、69.9%、35.8%和33.3%,RF的诊断特异性(79.8%)显著低于其它三种自身抗体(94.5%、95.6%和95.6%,P<0.01);RF阴性患者的抗CCP抗体、抗Sa抗体和AKA阳性率分别为41.3%、15.2%和13.0%,RF与抗CCP抗体检测的阳性符合率为49.6%,具有较高的一致性(kappa值0.501)。因此,同时检测两种以上靶抗原不同的自身抗体可显著提高RA的诊断率,并可以发现不同个体RA病程中自身抗体表达的差异。

抗CCP抗体,AKA与RF联合检测在类风湿关节炎诊断中的临床意义

目的 评价抗CCP抗体,AKA与RF联合检测在类风湿关节炎（RA）诊断中的临床意义.方法 对80例RA患者、103例非RA患者和30例健康对照者血清标本分别采用ELISA法、间接免疫荧光法、散射比浊法检测抗CCP抗体,AKA和RF.结果 ①抗CCP抗体,AKA和RF在非RA组中的阳性检出率分别为2.9％,1.9％和22.3％,RA组阳性检出率分别为71.3％,46.3％和80％,两组间比较差异均具有统计学意义（χ2 =33.4,17.7,24.1,P＜0.05）;②单独检测时,抗CCP抗体,AKA和RF敏感度分别为71.3％,46.3％和80％,特异度分别为96.2％,98.5％和80.5％.联合检测时,抗CCP＋ RF对RA的敏感度最高（48.8％）,两两联合或三者联合检测的特异度显著提高（98.5％～100％）.结论 抗CCP抗体,AKA和RF联合检测可以提高RA早期诊断的准确率,降低误诊率及漏诊率.

联合检测RF和抗CCP、AKA对AR的诊断意义

目的比较抗环胍氨酸肽抗体(anti-CCP)、抗角蛋白抗体(AKA)和类风湿因子(RF)诊断类风湿性关节炎(RA)的敏感性及特异性,探讨三者联合检测在RA诊断中的意义。方法以70例健康体检者为对照,80例为RA组,71例为其他自身免疫性疾病组。检测所有研究对象血清RF和抗CCP、AKA的水平,并比较三种指标的敏感性和特异性之间的关系。结果 RF、抗CCP、AKA诊断RA的敏感度分别为76.2%、72.5%和38.7%,特异度分别为84.7%,96.3%和100%。RA患者三种抗体联合检测诊断的敏感度可达93.8%。结论三种抗体联合检测诊断RA患者,优于其他单项或两项检测方法,具有重要的临床诊断价值。

评估RF、抗CCP、AKA、GPI联合检测在类风湿关节炎诊断中的价值

目的探讨类风湿因子(RF)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗环瓜氨酸多肽抗体(抗CCP)及葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)4种血清标记物联合检测对类风湿关节炎(RA)的临床价值。方法方便选取2014年1月-2018年12月期间在该院就诊的80例RA患者为研究组对象,以同期65名健康志愿者为对照组。两组人员均检测这4种血清标记物,观察单一检测和联合检测的准确率。结果研究组患者RF(32.17±5.43)IU/mL、抗CCP(28.75±2.98)U/mL、AKA(55±7)、GPI(4.56±1.34)mg/mL平均值均显著高于对照组RF(18.44±3.39)IU/mL、抗CCP(8.54±1.07)U/mL、AKA(15±5)、GPI(0.22±0.25)mg/mL(t=12.829、17.103、16.827、20.505,P<0.05)。单一标志物检测时,RF的敏感性81.25%最高,抗CCP特异性95.38%最高;两两联合检测中RF联合抗CCP敏感度68.75%最高,抗CCP联合AKA特异性96.92%最高;两项以上联合检测时四者联合检测特异性98.46%最高。结论对于RA的检测可以RF、抗CCP、AKA、GPI 4种血清标记物联合检测,以提高诊断准确率。

几种自身抗体检测对类风湿性关节炎的意义

类风湿性关节炎是一种常见的自身免疫性疾病 ,其早期诊断困难 ,而早期又是疾病发展最快的阶段 ,易造成骨质破坏 ,从而晚期严重致残 ,故早期诊断和治疗甚为重要。自身抗体的检测为其早期诊断提供了重要的依据 ,并为探索其发病机制提出了新的见解 ;其中有意义的自身抗体有 :抗角蛋白丝聚集素 (原 )抗体、抗Sa抗体、RA33/ 36。

RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体联合检测诊断类风湿关节炎的价值

目的探讨类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸(CCP)抗体、抗核周因子(APF)抗体、抗角蛋白(AKA)抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体联合检测诊断类风湿关节炎(RA)的价值。方法检测RA组(196例)、非RA组(157例)、健康对照组(73例)上述5种指标的阳性率、灵敏度和特异度,以及不同方案联合检测后的灵敏度和特异度。结果 RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体灵敏度分别为76.02%、75.00%、45.92%、44.39%、72.45%,特异度分别为79.57%、96.52%、94.78%、96.09%、94.78%。RF与抗CCP抗体联合检测灵敏度为93.37%,特异度78.26%,RF、抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体5个指标联合检测灵敏度为96.43%,特异度为75.65%。结论在5种指标中,RF、抗CCP抗体、抗MCV抗体灵敏度相对较高,除RF外,抗CCP抗体、抗APF抗体、抗AKA抗体、抗MCV抗体特异度均很高。5种指标联合检测后,灵敏度大大提高,特异度略有下降。