基因工程抗角蛋白抗体对豚鼠银屑病样模型的影响

目的观察基因工程抗角蛋白抗体对豚鼠银屑病样模型的治疗作用及对角质形成细胞增殖的影响。方法建立豚鼠银屑病模型,将通过基因工程技术获得的抗角蛋白抗体Fab段以肌注方式给药,从组织病理水平评价抗体对豚鼠银屑病模型的治疗效果;将抗体与角质形成细胞共培养,MTT法观察其对角质形成细胞增殖能力的影响。结果抗角蛋白抗体Fab段可以促进豚鼠银屑病模型的恢复,抑制角质形成细胞的过度增殖。结论提示抗角蛋白基因工程抗体具有促进豚鼠银屑病样模型恢复的作用,对银屑病可能具有一定的治疗作用。

血清中抗核周因子(APF),抗角蛋白抗体(AKA)及抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体在类风湿性关节炎(RA)诊断中的应用价值

目的 探讨类风湿性关节炎(RA)诊断中血清中抗核周因子(APF),抗角蛋白抗体(AKA)及抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体测定的应用价值。方法 将本院2022年06月-2023年06月收治的60例RA患者纳入RA组,同期非RA自身免疫疾病患者58例纳入非RA组,另选取同期体检健康人员60例为对照组,两组均接受APF、AKA及CCP抗体测定。比较两组患者检测结果阳性率,探讨APF、AKA及CCP抗体单独检测及联合检测的诊断价值。结果 较之对照组,RA组和非RA组APF、AKA及CCP抗体这三项检测指标的单项或各种联合检测的的阳性率均明显更高,P<0.05。APF、AKA及CCP抗体联合检测诊断RA的曲线下面积(AUC)及灵敏度均优于这三项检测指标的单独检测。结论 APF、AKA及CCP抗体测定在RA诊断中的应用价值颇高,尤其是多项抗体联合诊断可获得较高阳性率,这对提高早期RA检出率十分有利。

纳米脂质体与基因工程重组蛋白在抗皱化妆品中的应用及效果评估

针对传统抗皱化妆品活性成分渗透率低、稳定性差等问题,纳米脂质体和基因工程重组蛋白技术的应用为提升抗皱功效带来新契机。本文综述了纳米脂质体递送系统和重组人表皮生长因子等在抗皱化妆品中的应用研究进展,并通过临床试验数据客观评估了其抗皱效果与安全性。结果表明,上述技术可显著提高抗皱产品功效,但仍需警惕潜在风险,进一步开展长期验证。新技术的发展将推动化妆品行业革新,为消费者提供更优质的抗衰老方案。

基因工程抗角蛋白抗体在正常皮肤和几种表皮增生性皮肤病皮损中的反应定位

目的 探索一株基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体在正常皮肤及几种表皮增生性皮肤病皮损中的反应定位。方法 利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的质粒转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达出Fab抗体 ,纯化鉴定后用此抗体对正常皮肤及银屑病、鳞癌、基底细胞癌和脂溢性角化病皮损进行免疫组化染色。结果 正常皮肤表皮呈阴性染色 ,毛囊呈阳性染色 ,银屑病、鳞癌、基底细胞癌和脂溢性角化病皮损均呈现明显的阳性着色 ,其中银屑病皮损基底细胞层为强阳性。所有细胞染色部位均位于胞质 ,胞核未见着色 ,真皮为阴性。结论 该株人源性抗角蛋白Fab抗体主要与表皮组织结合 ,对银屑病等表皮增生性皮肤病的损害具有较高特异性。

基因工程人抗角蛋白抗体的免疫学纯化与鉴定

在成功克隆和表达了人源性抗角蛋白抗体之后，利用金属螯合亲和层析法进行提取纯化，并用Western blot、竞争抑制性ELISA和非竞争性酶免疫亲和力测定技术对该抗体的特异性、识别抗原组分以及亲和力等免疫学特性进行鉴定。结果发现，金属螯合亲和层析技术能够有效地将抗角蛋白可溶性Fab从表达上清中纯化出来。所制备抗体特异性良好，能够识别相对分子量45 000～48 000角蛋白，并具有较高的亲和力，亲和系数为3.5×109M－1。这种高特异性、高亲和力的人源性抗角蛋白抗体将在抗角蛋白自身抗体的功能与意义研究以及今后临床应用前景的探讨中发挥重要作用。

基因工程人抗角蛋白抗体对角质形成细胞增殖的影响

目的 :研究一株基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体在无血清培养的角质形成细胞中的免疫学活性 ,观察其对角质形成细胞增殖的影响。方法 :利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的质粒转化大肠杆菌 ,异丙基 -D -硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达出Fab抗体 ,用免疫组化观察对角质形成细胞的反应性 ,免疫印迹法检测所识别的角蛋白组分及用四甲基偶氮唑蓝比色法 (MTT法 )测定对细胞增殖的影响。结果 :基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体仅识别角质形成细胞中相对分子质量为 4 6 0 0 0的角蛋白区带 ,呈现为一条很强的染色带 ;免疫组化染色呈明显胞浆阳性 ;该抗体明显抑制培养的角质形成细胞增殖 ,并且存在剂量依赖关系。结论 :特异性抗相对分子质量为 4 6 0 0 0的基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体可能是角蛋白抗体家族中影响角质形成细胞增殖的有效成分。

基因工程技术制备的人源性抗Mr48×10^3角蛋白抗体Fab片段的纯化与活性鉴定

目的 用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体Fab片段 ,并对其纯度、抗原结合活性及特异性等进行鉴定 .方法 将从半合成噬菌体抗体库中成功地筛选到的特异表达抗角蛋白 Fab片段的阳性克隆转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达 ,产物经金属鏊合层析纯化 ,并用 EL ISA鉴定抗原结合活性和特异性、SDS- PAGE鉴定纯度和蛋白印迹检测抗角蛋白抗体 Fab片段识别的抗原组分 .结果 可溶性表达的抗角蛋白抗体 Fab片段经金属鏊合层析可有效地纯化 ,蛋白印迹明确纯化产物为人 Fab片段 .所纯化的 Fab片段在非还原 SDS-PAGE中形成 Mr5 0× 10 3单一条带 ,在还原 SDS- PAGE中可见 Mr 2 3× 10 3,Mr 2 5× 10 3两条带 .EL ISA和 Western blot证实该片段具备良好的抗原结合活性和抗原特异性 .结论 成功表达并鉴定了人源性抗 Mr 4 8× 10 3角蛋白的 Fab可溶性片段 ,为人源性抗角蛋白抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了良好的基础 .

基因工程人抗角蛋白抗体在角质形成细胞内的反应定位

目的:探索一株基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体在培养的角质形成细胞内的反应定位。方法:利用从噬菌体抗体库中筛选到的特异表达抗角蛋白Fab片段的质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达出Fab抗体,纯化鉴定后将该抗体作用于培养的人角质形成细胞,在不同浓度和不同的作用时间应用免疫荧光细胞染色法及共聚焦显微镜观察该抗体在角质形成细胞内的反应定位,同时以基因工程抗HBsAg人Fab和1%BSA为对照。结果:基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体作用于角质形成细胞的胞浆,呈明显的绿色荧光,着色均匀,细胞核未见着色,两种对照均未见着色。结论:基因工程人源性抗角蛋白Fab抗体,可与培养状态下的角质形成细胞胞浆中其特异性的抗原相结合,这为其临床应用奠定了基础。

基因工程抗角蛋白人抗体的制备与鉴定

目的 制备亲和力高、性能良好的人源性抗角蛋白抗体。方法 以人表皮角蛋白为抗原从噬菌体抗体库中克隆特异性抗角蛋白抗体 ,采用链替换 (chain shuffling)技术对所获抗体进行亲和力成熟 ,并对其生物学性能进行一系列鉴定。结果 经过筛选半合成噬菌体抗体库 ,成功获得了能与角蛋白特异性结合的人源性抗角蛋白抗体 ;选择其中活性最好的一株抗体 ,通过轻链替换和重链替换使抗体亲和力得到了有效提高 ,达到8× 10 1 0 mol的理想水平。结论 用基因工程的方法可以制备高质量的人源性抗角蛋白抗体 。

靶向模拟Bt Cry1C蛋白抗虫功能的人源化基因工程抗体筛选及鉴定

Bt蛋白制剂及其转基因作物长时间推广应用,害虫抗药性等问题日益凸显,探索新型安全抗虫材料已成为竞先研究的热点。基于抗体免疫网络学说的抗独特型抗体技术被证实可用于研发抗原生物活性类似物,有望成为靶向创制模拟Bt蛋白抗虫功能材料的新途径。以Bt Cry1C蛋白多克隆抗体为包被抗原,从人源化噬菌体单链抗体库中获得9个阳性单克隆,其中E8-Anti-Id scFv经鉴定为β型抗独特型基因工程单链抗体。Bt Cry1C蛋白多克隆抗体、小菜蛾(Plutella xylostella)刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)蛋白和稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)BBMV蛋白对E8-Anti-Id scFv的竞争抑制中浓度(IC_(50))分别为2.625、3.638和4.605μg/mL。室内生物测定显示,噬菌体展示形式的E8-Anti-Id scFv在滴度为1.2×10^(8) CFU/mL浓度条件下,对供试的小菜蛾和稻纵卷叶螟在72 h内的校正死亡率为58.69%和52.82%,其抗虫活性分别达到浓度为20μg/mL的原Bt Cry1C蛋白的77.87%和73.21%。由此表明,获得的E8抗独特型基因工程单链抗体材料初步具备模拟Bt Cry1C蛋白抗虫功能的特性,为后期深入研究和推进应用奠定了技术和材料基础。

基因工程抗体融合蛋白的构建

抗体融合蛋白可以具有抗体的特性和所融合的功能蛋白的活性 ,可广泛用于免疫治疗、免疫诊断、抗体纯化及抗体和抗原的分析定量等 ,特别可用于免疫导向药物的制备。基因工程抗体融合蛋白比传统的化学交联的抗体融合蛋白具有更多的优越性。

抗氨基末端脂多糖结合蛋白基因工程抗体库的构建及体外表达筛选

目的构建人源化的单链可变区抗体库,运用体外表达技术翻译并筛选特异性的抗NHLBP抗体。方法分离健康人外周血单核细胞,抽提总RNA设计引物,扩增抗体轻重链的可变区,通过一段柔性片段将其连接成单链抗体库;应用体外表达技术翻译抗体库,并筛选出与NHLBP高度结合的单链抗体片段。结果扩增的单链抗体可变区片段分别为340bp和325bp,经连接后约为750bp。经过体外表达得到了约27000的抗体片段,经过5轮筛选进化,得到了可与NHLBP高度结合的抗体。结论已成功构建了人源化的单链抗体库;通过体外表达技术筛选到可与NHLBP高度结合的抗体。

基因工程抗体与IL-2融合蛋白研究的进展

利用基因重组技术构建抗肿瘤的小抗体/IL-2融合蛋白是肿瘤导向治疗中的一种新探索,这种策略治疗可增加肿瘤局部的IL-2浓度,减少其毒副作用,延长蛋白在体内的半衰期,更好地发挥IL-2介导的免疫细胞的抗肿瘤作用。本文就此融合蛋白的构建策略及表达、纯化的技术作一介绍。

利用噬菌体抗体库技术制备人源化抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体

近年来随着人们生活方式的改变,血栓性疾病正成为威胁人类生命健康的"头号杀手",发病率高居各种疾病之首,并有渐增趋势,是当代医学研究的重点和热点之一.

抗角蛋白抗体及相关自身抗体在RA诊断中的应用评价

目的评价抗角蛋白抗体（AKA）及其相关自身抗体对诊断类风湿关节炎(RA)的敏感性和特异性以及在临床上的意义。方法收集血清279例，包括正常人30例，RA56例，SLE114例，其它结缔组织病179例，检测AKA（IFA）、RF、ANA及ssDNA。结果4种自身抗体对诊断RA疾病的敏感性和特异性为：AKA 39.3%和96.0%；RF 37.5%和86.5%；ANA 55.4%和39.5%；ssDNA 37.5%和49.8%；敏感性无显著性差异(P>0.05)，特异性则AKA明显高于其它3种抗体（P<0.001）。RF阳性率在RA患者AKA阳性组和阴性组有显著性差异（P<0.001），且RF含量与AKA滴度呈正相关；而ssDNA和ANA则无显著性差异（P>0.05）。结论AKA是RA的又一个特异性抗体，联合检测AKA及RF对于RA的诊断与早期诊断具有重要意义。

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用

大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂，具有抗虫特性。从未成熟的大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）子叶中提取总ＲＮＡ，然后反转录成单链ｃＤＮＡ，以此为模板，用ＰＣＲ方法扩增出大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂基因，并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ（＋）的ＳｍａⅠ位点上。序列分析表明：克隆片段大小为６６３ｂｐ，包含了基因完整的编码序列。编码多肽由２１７个氨基酸组成，其中包括Ｎ端２５个氨基酸组成的信号肽序列，１８１个氨基酸组成的成熟蛋白序列和Ｃ端１１个氨基酸组成的液泡定位信号序列。构建了此基因的一系列植物表达载体，用于烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）、水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）、棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）等作物的转化。利用棉铃虫（ＨｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａＨｕｂｎｅｒ）对经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交验证获得的转基因烟草进行了抗虫测试，结果表明，转基因烟草和对照烟草相比，具有明显的抗虫能力。

类风湿性关节炎患者类风湿因子抗环瓜氨酸抗体抗角蛋白抗体联合检测的临床意义

目的:探讨类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、抗角蛋白抗体(AKA)联合检测对类风湿性关节炎(RA)的诊断价值,及Ig G、Ig A、Ig M、C3、C4在类风湿性关节炎中的意义。方法:采用免疫散射比浊法检测RF、Ig G、Ig A、Ig M、C3、C4,采用ELISA法检测抗CCP抗体,间接免疫荧光法检测AKA的水平,并对结果进行统计学分析。结果:RA患者组RF、抗CCP抗体、AKA、Ig G、Ig A、Ig M、C3、C4的水平均高于健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);RF、抗CCP抗体、AKA在RA诊断中的敏感度为95%、83.3%、68.3%,特异度为81.2%、96.9%、100%;RF、抗CCP抗体、AKA联合检测串联实验的敏感性为58.3%,特异性为100%;RF、抗CCP抗体、AKA联合检测并联实验的敏感性为98.3%,特异性为78.1%。结论:以上指标对类风湿性关节炎的诊断具有参考价值;联合检测在一定程度上避免了抗CCP抗体跟AKA的敏感度低,以及RF的特异性低而造成的漏诊,为临床早期诊断断提供依据。

抗环瓜氨酸肽抗体、抗角蛋白抗体、抗核周因子抗体和类风湿因子联合检测在老年类风湿关节炎诊断中的意义

目的探讨抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子抗体(APF)和类风湿因子(RF)联合检测在老年类风湿关节炎(RA)诊断中的应用价值。方法分别采用酶联免疫、间接免疫荧光、斑点免疫荧光和免疫散射比浊法检测83例老年RA患者血清中抗CCP抗体、AKA、AFP和RF。结果抗CCP抗体灵敏度为50.6%,特异性96.3%;AKA检测灵敏度为38.6%,特异性96.3%;APF检测灵敏度为57.8%,特异性95.3%;RF灵敏度为77.1%,特异性83.2%;抗CCP+AKA+APF+RF四种自身抗体联合检测灵敏度19.2%,特异性100%。结论 CCP、AKA、APF及RF四种抗体联合检测,提高了老年RA的诊断率。

抗环瓜氨酸肽抗体、类风湿因子与抗角蛋白抗体在类风湿关节炎诊断中的价值比较

目的比较抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)与抗角蛋白抗体(AKA)在类风湿性关节炎(RA)诊断中的作用。方法对118例(RA 61例,非RA 57例)患者血清同时进行抗CCP抗体、RF和AKA检测,检测方法分别为酶联免疫吸附试验(ELISA)、BECKMAN全自动蛋白分析仪、间接免疫荧光法。结果RA组中3种抗体的阳性率显著高于非RA组(P<0.01);抗CCP抗体对RA诊断的敏感性(67.2%)明显高于AKA(41.6%,P<0.01),且两者显著相关(P=0.004),与RF(77.0%)差异无显著性;抗CCP抗体对RA诊断的特异性(94.7%)明显高于RF(73.7%,P<0.01)与AKA(91.2%),差异无显著性;抗CCP抗体和RF联合检测的敏感性达90.2%。结论抗CCP抗体有适度的敏感性和很高的特异性,对诊断RA具有良好的应用价值;联合检测抗CCP抗体和RF具有更高的敏感性。

抗角蛋白抗体、抗RA33抗体及类风湿因子在老年起病的类风湿关节炎中的意义

目的探讨抗角蛋白抗体(AKA)、抗RA33抗体与类风湿因子(RF)对老年起病的类风湿关节炎(EORA)诊断的特异性和敏感性,探讨以上3种抗体与EORA病情活动性之间的相关性。方法对39例EORA患者、82例非老年起病的类风湿关节炎(NEORA)患者及30例正常老年人的血清同时进行了AKA(间接免疫荧光法)、抗RA33抗体(ELISA法)与RF(免疫比浊法)的测定,并对以上3种抗体与EORA病情活动性之间的关系进行了分析。结果39例EORA患者中,AKA、抗RA33抗体及RF的阳性率分别为30.8%(12/39)、35.9%(14/39)及64.1%(25/39)。82例NEORA患者中,AKA、抗RA33抗体及RF的阳性率分别为43.9%(36/82)、47.6%(39/82)及81.7%(67/82)。30例正常老年人中,均仅有1例检测到AKA及抗RA33抗体,有2例检测到RF低滴度阳性。AKA、抗RA33抗体及RF在39例EORA患者中的敏感性分别为30.8%、35.9%及64.1%,特异性分别为99.7%、99.7%及93.3%。AKA及抗RA33抗体在EORA组及NEORA组的敏感性均无明显差异,而RF在NEO-RA组的敏感性则显著高于EORA组。以28处关节疾病活动度积分(DAS28)来评价EORA患者的病情活动性,在39例EORA患者中,AKA、抗RA33抗体及RF阳性组的病情活动性均显著高于各自阴性对照组。结论AKA、抗RA33抗体及RF有助于EORA的诊断及病情活动性判断。