抗转铁蛋白受体鼠源性单链抗体基因的构建、表达及初步鉴定

目的 利用基因工程技术将鼠源性单克隆抗体WuT9改造成单链抗体。方法 从分泌抗CD71单克隆抗体的杂交瘤细胞WuT9中提取总RNA ,采用OligodT为逆转录引物 ,逆转录合成cDNA第一链 ,然后分别采用VL 和VH 框架区的PCR引物 ,扩增VH(重链可变区 )和VL(轻链可变区 )DNA片段 ,利用事先合成的存在于VL 下游引物和VH 上游引物的部分人工连接子重叠互补序列 ,将VL 和VH 的PCR回收产物进行部分重叠PCR(SOE) ,形成单链抗体基因。最后将此基因重组进表达载体pBAD gIII C中 ,经L arabinose(左旋阿拉伯糖 )诱导表达并初步鉴定。结果 构建出 70 0bp左右的单链基因 ,并获得阳性重组表达载体克隆 ,表达产物为相对分子质量 2 70 0 0左右的蛋白分子。结论 经因特网查询表明 ,单链抗体基因重链部分属于小鼠H链可变区ⅠA亚组 ;轻链属于小鼠κ轻链可变区Ⅱ亚组 ,此单链抗体基因的表达产物具有一定的特异结合活性。本研究为抗CD71单链抗体的临床应用打下了基础。

抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达

目的 构建抗转铁蛋白受体 (TfR)单链抗体原核表达载体 ,为进一步研究其效应奠定基础。方法 从抗TfR单克隆抗体重链和轻链可变区基因的克隆载体 pGEM T VH和 pGEM T VL中扩增重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL)基因 ,用重叠延伸PCR的方法 ,在VH和VL基因间引入连接短肽 (Linker) ,构建VH Linker VL的单链抗体 (singlechainFv ,scFv)基因。经NcoⅠ和NotⅠ酶切后亚克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上 ,转化和筛选后 ,阳性细菌经IPTG诱导表达。间接免疫荧光法 (IFA)及抗体封闭试验鉴定其抗体活性。结果 凝胶电泳可见重叠延伸PCR扩增产物约 70 0bp条带 ,SDS PAGE鉴定表达产物的分子量为 2 7kD左右 ,与scFv的理论值一致 ,IFA及抗体封闭试验证明表达产物有抗人TfR的活性。结论 本研究成功地构建并表达了抗人TfRscFv ,为抗人TfRscFv的应用奠定了基础。

抗激活素受体相互作用蛋白1抗体的制备及应用

目的:制备抗激活素受体相互作用蛋白1(ARIP1)抗体并探讨其应用。方法:在大肠杆菌BL21中表达GST-ARIP1融合蛋白,以该蛋白作为抗原免疫新西兰家兔,制备抗ARIP1的多克隆抗体。应用该抗体进行免疫组织化学染色,分析ARIP1在小鼠脑组织的分布。结果:制备的兔抗ARIP1多克隆抗体可以特异识别ARIP1,而与ARIP2无交叉反应。初步应用制备的抗体进行免疫组织化学染色,ARIP1在小鼠大脑组织主要表达在下丘脑及海马。结论:成功地制备了抗ARIP1多克隆抗体,该抗体可用于ARIP1成熟蛋白表达的免疫组织化学染色分析。

糖尿病心肌病患者与抗G-蛋白偶联型受体血管紧张素Ⅱ1型受体和肾上腺素能α_1受体自身抗体的初步研究

目的 :探讨抗G 蛋白偶联型受体血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1受体 )和肾上腺素能α1受体 (α1受体 )自身抗体是否与糖尿病心肌病发病有关。方法 :以合成的AT1与α1受体多肽片段为抗原 ,应用酶联免疫吸附测定技术 ,检测 196例住院及门诊体检者血清中抗G 蛋白偶联型受体AT1和α1受体自身抗体 ,其中糖尿病心肌病患者 46例 (糖尿病心肌病组 ) ,2型糖尿病 5 2例 (糖尿病组 ) ,高血压无靶器官受损患者 5 8例 (高血压组 )及正常对照组 40例。结果 :糖尿病心肌病组抗AT1受体自体抗体阳性率和抗α1受体自身抗体阳性率 ,明显高于糖尿病组、高血压组以及正常对照组 ,有显著性差异 (P均 <0 .0 5～ 0 0 1)。结论 :免疫学机制可能参与糖尿病心肌病病理生理过程。

脑药物转运载体——抗转铁蛋白受体单链抗体的克隆表达及鉴定

为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,约占菌体总蛋白量的 4 0 % .包涵体经 6mol L盐酸胍变性后 ,过SephacrylS 30 0HR分子筛柱复性蛋白 .免疫酶染色实验表明 ,该单链抗体能与转铁蛋白受体特异性结合 。

跨血脑屏障药物载运中转铁蛋白受体抗体作用的研究进展

综述了从转铁蛋白受体抗体与药物之间不同的连接方式并讨论了以转铁蛋白受体抗体为基础的中枢神经系统药物载运措施的研究进展

抗代谢型谷氨酸受体1抗体相关性脑炎1例并文献复习

目的探讨抗代谢型谷氨酸受体1(mGluR1)抗体相关性脑炎的临床特征及预后,以提高临床医生对本病的认识。方法报道一例抗mGluR1抗体相关脑炎患者的临床资料,并结合文献报道的34例抗mGluR1抗体相关脑炎患者的临床资料进行回顾性分析。结果患者为38岁男性,主要表现为头晕、共济失调2个月余,脑脊液蛋白、IgG指数轻度增高,头颅MRI平扫+增强检查结果正常,血清及脑脊液mGluR1-IgG滴度均为1∶100,诊断为抗mGluR1抗体相关脑炎,患者经过大剂量糖皮质激素、丙种球蛋白、利妥昔单抗等治疗后明显好转。35例抗mGluR1抗体相关脑炎患者年龄(48.3±20.3)岁,临床主要表现为小脑共济失调(33例)、认知功能下降(11例)。8例(22.9%)患者合并有肿瘤性疾病,所有患者血清或/和脑脊液mGluR1抗体阳性。头颅MRI主要表现为小脑半球或蚓部、小脑幕异常。85.7%(30/35)的患者接受免疫治疗,其中11例患者使用2种免疫治疗,11例使用3种及以上的免疫治疗。随访结果显示,21例(60.0%)患者好转,4例(11.4%)患者好转后复发,7例(20.0%)患者病情稳定,2例(5.7%)患者无明显变化,1例(2.9%)患者死亡。结论抗mGluR1抗体相关脑炎主要表现为小脑共济失调,血清或脑脊液抗mGluR1抗体检测有助于诊断,大多数患者经糖皮质激素联合丙种球蛋白或血浆置换或免疫抑制剂或利妥昔单抗治疗后好转,少部分患者有复发且预后差。

抗代谢型谷氨酸受体1抗体相关性脑炎的研究进展

抗代谢型谷氨酸受体1抗体(mGluR1)是一种新发现的抗体,可引起自身免疫性脑炎,被称为抗代谢型谷氨酸受体1抗体相关性脑炎,主要表现为小脑共济失调,伴有认知障碍、精神和行为障碍、舞蹈样动作、味觉丧失、自主神经功能障碍、局灶性癫痫和睡眠障碍,还可能与血液系统恶性肿瘤和男性生殖系统恶性肿瘤以及系统性自身免疫性疾病(如干燥综合征和桥本甲状腺炎)有关。本研究旨在综述抗mGluR1抗体相关性脑炎的病因、发病机制、辅助检查、治疗及预后等方面的最新研究进展,以提高临床医生对该病的认识。

抗转铁蛋白受体抗体靶向脑内药物递送的研究策略

血脑屏障的存在限制循环中药物向大脑的渗透,给中枢神经系统疾病的治疗造成巨大挑战。近年来,研究人员发现脑毛细血管内皮细胞存在一类特异性高表达受体,能将循环中特定物质转运到脑内。转铁蛋白受体1 (Transferrin Receptor 1, TfR1)即是其中之一,基于TfR1单克隆抗体的抗体融合蛋白显示了治疗阿尔茨海默病等疾病的潜力,激发了利用TfR1靶向脑内递送药物的研究。本文旨在论述靶向TFR1抗体进行药物脑内递送的研究进程,从而为TfR1抗体药物运载平台的开发提供相关理论基础。

复发性流产影响生命全程保健的免疫病因学研究——可能与抗层粘蛋白-1抗体、血管内皮生长因子及其可溶性受体相关

目的本研究探讨抗层粘连蛋白(anti-Laminin-1,抗LN-1)、血管内皮生长因子(VEGF)及其可溶性受体(s Flt-1)与复发性流产和女性保健的关系。方法 URSA组选择2015年1月至2016年12月在北京市友谊医院妇产科复发性流产专科门诊就诊的URSA患者30例,所有患者就诊前均连续自然流产2次以上,流产都发生于妊娠20周以前。对照组选择同期156例无不良妊娠史的健康妇女,对照组妇女均无肝、肾疾病,无自然流产史、早产史、血栓或出血史、妊娠期高血压疾病史,并且至少有1次成功的妊娠分娩史。本研究采用ELISE方法测定抗LN-1抗体、VEGF、s Flt-1。结果病例组与对照组血清中抗LN-1抗体、VEGF的滴度没有统计学差异(P=0. 407,P=0. 435),但是复发性流产组与对照组s Flt-1的血清滴度有统计学差异(P <0. 01)。结论复发性流产的发生可能与s Flt-1的表达增高密切相关,s Fl T-1与VEGF亲合,可降低妊娠妇女血清内VEGF的含量,阻碍VEGF促进孕妇胎盘血管的生成,干扰孕妇早期胎盘的生长发育,导致孕期内复发性流产。复发性流产病患血清中的血管内皮生长因子及其可溶性受体的表达增高可能是导致早期胚胎停育引发RSA的关键因素之一。RSA是严重危害女性健康及其生命全程包括老年期健康的常见病,病因学复杂,阐明其病因是女性涉及生命全程的保健医学的关键。

抗转铁蛋白受体抗体跨血脑屏障改造策略

实现有效的跨血脑屏障递送是开发治疗中枢神经系统疾病药物的关键一步,特别是近几年发展迅速的生物药物,如抗体、核酸药物和酶等,在给药以后,这些生物大分子基本上无法进入大脑,需要开发高效的跨脑转运系统。研究人员发现脑毛细血管内皮细胞上的一些转运蛋白具有药物递送的潜力,转铁蛋白受体1(Transferrin receptor 1, TfR1)就是其中之一,多家医药公司或研究机构基于TfR1的跨BBB递送平台开发出了中枢神经系统疾病的治疗药物已经被批准上市或正在进行临床实验,这激发了脑部靶向药物的研发。本文旨在讨论具有跨BBB递送的TfR1抗体的改造,从而为高脑转运效率的TfR1抗体递送平台的开发提供理论基础。

糖尿病心肌病与抗心肌β_1和M_2受体自身抗体的关系

目的 探讨抗心肌β1 和M2 受体自身抗体是否与糖尿病心肌病变(DC)发病有关。 方法 以M2 受体和β1 受体多肽片段为抗原,应用酶联免疫吸附测定法检测198例患者血清抗G蛋白偶联型M2 和β1 受体自身抗体。其中DC 48 例,2 型糖尿病(T2DM)组52 例,高血压无靶器管受损(HT)组58 例,正常对照(NC)组40 例。结果 DC组抗β1 和M2 受体阳性率分别为60.4%和54.2%,明显高于T2DM组(16.1%和16.1%)、HT(19%和12.1%)及NC组(15%和17.5%),差别有统计学意义(P<0.01)。 结论 免疫学机制可能参与DC病理生理过程。

抗AT_1受体自身抗体阳性难治性高血压氯沙坦与伊那普利降压疗效交叉对比试验

目的:难治性高血压患者存在抗AT1受体自身抗体(ATR-AA),这一抗体具有受体激动剂样作用,可能参与了高血压的发病。本研究拟探讨AT1受体阻滞剂氯沙坦可否通过阻断ATR-AA的激动作用起到更优越的降压作用,从临床水平阐明ATR-AA是否参与高血压的发病。方法:收集难治性高血压患者,测定患者血清ATR-AA,将抗体阳性难治性高血压交叉给予氯沙坦和转化酶抑制剂伊那普利治疗各4周,观察两组血压下降差异,以抗体阴性难治性高血压作为对照。结果:最终完成试验34例,氯沙坦治疗组血压平均下降(2.2±1.2)/(1.0±0.5)kPa,伊那普利组平均下降(1.6±1.0)/(0.6±0.6)kPa,两组收缩压及舒张压下降差异均极显著(P<0.01);而对照组血压下降差异无显著性。结论:ATR-AA阳性难治性高血压氯沙坦降压疗效显著优于伊那普利,氯沙坦可能不仅阻断血管紧张素II引起的AT1受体激动,还可能通过阻断ATR-AA引起的AT1受体激动,起到额外的降压作用。ATR-AA是参与抗体阳性难治性高血压的发病的因素之一,氯沙坦可阻断其病理效应。

糖尿病合并难治性高血压抗AT1受体自身抗体阳性患者缬沙坦靶向治疗疗效研究

目的观察糖尿病合并难治性高血压抗AT1受体自身抗体阳性患者缬沙坦靶向治疗的降压疗效。方法以合成的AT1受体多肽片段为抗原,应用ELISA技术,检测糖尿病合并2级以上高血压患者169例,正常对照组60例。糖尿病合并难治性高血压患者抗AT1受体自身抗体阳性者为治疗组,阴性者为对照组,两组均给予尼群地平、氢氯噻嗪、肠溶阿司匹林、缬沙坦。结果(1)糖尿病合并难治性高血压98例(抗AT1受体自身抗体阳性者61例,占62.2%),糖尿病合并非难治性高血压71例(抗AT1受体自身抗体阳性者11例,占15.5%),两组比较具有显著性统计学意义。糖尿病合并难治性高血压抗AT1受体自身抗体阳性组(61例,治疗组)缬沙坦降压疗效明显优于抗AT1受体自身抗体阴性组(37例,对照组),两组有统计学差异。(2)临床降压效果评定,治疗组总有效率为95.1%,对照组为32.4%,差异具有极显著性意义(P<0.001)。结论检测糖尿病合并难治性高血压患者的抗AT1受体自身抗体,有针对性地选择降压药物缬沙坦,降压效果好,且较安全。

抗血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体在子痫前期患者血清及新生儿脐血中的表达

目的观察抗血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT_1-AA)在孕妇妊娠中期及分娩前后血清、新生儿脐血中的表达水平及其与子痫前期发病的关系。方法选取2012年5月至2014年4月于安阳市中医院、安阳市妇幼保健院剖宫产终止妊娠孕妇80例,其中轻度子痫前期孕妇26例(轻度子痫前期组),重度子痫前期孕妇24例(重度子痫前期组),健康妊娠孕妇30例(对照组)。采用酶联免疫吸附试验检测各组孕妇在妊娠中期及剖宫产前1 d和产后1 d血清、新生儿脐血中AT_1-AA表达水平,同时进行相关临床指标的检测并分析其与AT_1-AA表达水平的相关性分析。结果对照组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组孕妇妊娠中期血清中AT_1-AA表达水平分别为(46.932±6.868)、(58.426±7.146)、(67.120±8.922)ng·L^(-1),产前1 d血清中AT_1-AA表达水平分别为(68.593±9.241)、(135.395±10.766)、(180.320±13.795)ng·L^(-1),产后1 d血清中AT_1-AA表达水平分别为(45.681±4.277)、(47.274±5.120)、(48.899±5.065)ng·L^(-1)。轻度子痫前期组、重度子痫前期组孕妇妊娠中期和产前1 d血清中AT_1-AA表达水平均高于对照组,重度子痫前期组孕妇妊娠中期和产前1 d血清中AT_1-AA表达水平高于轻度子痫前期组(P<0.01);产后1 d血清中AT_1-AA表达水平重度子痫前期组高于对照组(P<0.05),其余各组两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各组孕妇产前1 d血清中AT_1-AA表达水平均高于产后1 d(P<0.05)。对照组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组新生儿脐静脉血中AT_1-AA表达水平分别为(62.125±10.317)、(110.522±13.368)、(131.512±15.198)ng·L^(-1),各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。子痫前期孕妇产前1 d血清中AT_1-AA表达水平与新生儿出生体质量、胎盘质量呈明显负相关,与脐动脉收缩期最高血流速度与舒张期最低血流速度比值(S/D)、脐动脉血流阻力指数(RI)、收缩压、舒张压、24 h尿蛋白、血肌酐呈明显正相关(r=-0.853、-0.788、0.836、0.744、0.956、0.759、0.869、0.773,P<0.05)。多元线性回归分析显示,AT_1-AA表达水平主要受收缩压、24 h尿蛋白、RI影响。妊娠中期血清AT_1-AA表达水平预测子痫前期,曲线下面积为0.916,界限值为53.200 ng·L^(-1),敏感度和特异度分别为0.880、0.800。结论 AT_1-AA在子痫前期患者血清、新生儿脐血中高表达,可以作为子痫前期的预测指标。

抗血管紧张素Ⅱ1型受体抗体与冠状动脉粥样硬化性心脏病关系研究

目的:探讨抗血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体1型(AT1受体)自身抗体与冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的关系。方法:80例患者用酶联免疫吸附法检测血清抗AT1受体自身抗体,分为抗AT1受体自身抗体阳性组和抗AT1受体自身抗体阴性组,采用Judkin法作冠状动脉造影检查。结果:46例抗AT1受体自身抗体阳性,34例阴性,在抗AT1受体抗体阳性组中32例冠脉造影至少1支血管狭窄≥50%,抗AT1受体自身抗体阴性组中12例冠脉造影至少1支血管狭窄≥50%,抗AT1受体自身抗体阳性组狭窄病变例数显著高于阴性组(P<0.01)。结论:抗AT1受体自身抗体阳性是冠心病的危险因素之一,对冠心病有一定的预测价值。

舒张性心力衰竭抗β1受体自身抗体水平相关性研究

目的:研究急性心肌梗死(AMI)早期舒张性心力衰竭(DHF)患者血中抗β1受体自身抗体(β1-AR-Ab)的水平及其与预后的关系。方法:入选AMI早期DHF患者35例为DHF组,AMI心功能正常患者84例为对照组,入院后即刻抽血通过ELASA方法测定β1-AR-Ab的水平,根据β1-AR-Ab的水平分为β1-AR-Ab阳性组和阴性组,比较两组间β1-AR-Ab阳性率有无差异。出院后电话或门诊随访16个月,观察主要心血管不良事件(MACE),包括心绞痛、再发心肌梗死、因心力衰竭再住院、心源性死亡,根据MACE的发生分为MACE组和无MACE组,比较两组间β1-AR-Ab阳性率有无差异,同时对DHF组和对照组患者进行无事件率生存分析。结果:AMI早期DHF患者血中β1-AR-Ab水平明显高于对照组(48.6%vs.16.7%,P<0.05)。出院后随访,MACE组β1-AR-Ab水平与无MACE组比较差异无统计学意义(P>0.05),对DHF组与对照组进行生存分析显示对照组无事件率高于DHF组,存在统计学差异(P<0.05)。结论:AMI早期DHF患者β1-AR-Ab水平明显高于对照组患者,但β1-AR-Ab水平与AMI后MACE发生无明显相关。AMI早期DHF患者预后较心功能正常患者差。

正常与心力衰竭大鼠心脏抗β_1受体自身抗体生物效应的比较研究

目的 :对比观察正常与病理性心脏 β1 受体自身抗体的生物效应。方法 :分级盐析法结合离子交换层析法分离提纯正常无抗体组、β1 受体生理性抗体组及 β1 受体病理性抗体组大鼠血清中的 Ig G,应用乳鼠心肌细胞培养技术及放射免疫分析方法 ,观察各组自身抗体及 β1 受体单克隆抗体对培养乳鼠心肌细胞跳动频率和大鼠心室肌细胞c AMP产生量的影响。结果 :在正常大鼠血清中 ,抗 β1 受体自身抗体的阳性率与抗体滴度均显著低于病理性抗体组大鼠阳性血清的阳性率和抗体滴度。生理性抗体、病理性抗体和单克隆抗体均表现出激动剂样生物学效应 ,且具有浓度依赖性。但是 ,在相近抗体浓度条件下 ,生理性抗体对心率和 c

糖尿病心功能不全患者血浆抗AT_1受体自身抗体和AngⅡ检测的临床价值

目的探讨抗AT1受体自身抗体和AngⅡ对糖尿病心功能不全(糖心病)患者检测的临床价值。方法以合成的AT1受体多肽片段为抗原,应用ELISA技术,检测(1)糖尿病心功能不全患者49例,(2)高血压病患者58例,(3)糖尿病组61例,(4)正常对照组41例,血清中抗AT1受体自身抗体。用放射免疫法测定血浆中神经内分泌激素指标(PRA和AngⅡ)。结果糖尿病心肌病患者抗AT1受体阳性率(63.3%)明显高于糖尿病组(11.5%)及高血压组(12.1%)、正常对照组(12.2%),差异有极显著性(P<0.01)。糖尿病心功能不全患者组神经内分泌激素指标PRA和AngⅡ明显高于糖尿病组、高血压组、对照组(P<0.05,P<0.01)。结论糖尿病心功能不全患者发病与抗AT1受体自身抗体有关,同时伴有神经内分泌激活。对早期无症状的糖尿病心功能不全患者检测具有重要的临床价值。