抗辐射不动杆菌碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达

本研究将来自抗辐射不动杆菌CMC-1的碱性脂肪酶基因去掉信号肽,经密码子优化及全基因合成后克隆到pPICZαA载体,构建了重组质粒pPICZαA-ARL,质粒线性化后转化毕赤酵母X33,筛选得到分泌表达碱性脂肪酶的重组毕赤酵母X33/pPICZαA-ARL。摇瓶发酵液上清酶活最高达65 U/mL,初步研究了该脂肪酶的酶学性质,其最适作用温度为50℃,最适pH为9.0,最适底物是对硝基苯酚辛酸酯。

多重耐药鲍曼不动杆菌耐药谱及耐消毒剂qacEΔ1基因分析

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌的临床分布、耐药谱特征及耐消毒剂基因qacEΔ1的携带情况,为医院感染防控提供实验室依据。方法收集2013年10月至2014年8月临床标本中分离的鲍曼不动杆菌共56株,分别采用微量肉汤稀释法和聚合酶链反应(PCR)进行药物敏感性试验和耐消毒剂基因qacEΔ1的检测;随机抽取qacEΔ1基因阳性标本进行序列测定。结果临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌主要分离于痰液和分泌物标本,分别占70.7%和15.5%;病区主要来自重症监护病房和呼吸内科,分别占41.1%和17.9%。药敏试验除对头孢哌酮/舒巴坦(32.1%)的耐药率较低外,对其余抗菌药物普遍耐药。耐消毒剂qacEΔ1基因检测出50株阳性标本,携带率为89.3%。测序结果与GeneBank中相应基因序列相比较,同源性为98%。结论多重耐药鲍曼不动杆菌以呼吸道为主要感染途径且病区集中趋势明显。耐消毒剂qacEΔ1基因携带率高,加强监测多重耐药鲍曼不动杆菌的消毒剂抗性,对临床科学使用消毒剂具有重要意义。

90株鲍曼不动杆菌OXA基因及ISAba1对OXA-23基因表达的影响

目的研究该院鲍曼不动杆菌(Ab)OXA基因流行趋势及ISAba1对OXA-23基因表达的影响。方法采用VITEK 2Compact全自动微生物鉴定仪检测90株非重复Ab,多重聚合酶链式反应(PCR)检测Ab的OXA基因和插入序列(ISAba1)。TA克隆耐药基因全序列blaOXA-23、插入序列ISAba1和ISAba1-blaOXA-23,并分别用大肠杆菌进行转化,肉汤稀释法测定阳性菌株和转化子对亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)。结果多重PCR检测90株Ab,blaOXA-23阳性73株,blaOXA-51阳性90株,ISAba-1阳性86株,未检测到blaOXA-24、blaOXA-58阳性菌株。17株未检测到blaOXA-23阳性的菌株中有11株对亚胺培南敏感,其中11株中有4株未检测到ISAba1。转化阳性菌株pET28b(+)-blaOXA-23、pET28b(+)-ISAba1、pET28b(+)-ISAba1-blaOXA-23和转化子[pET28b(+)]对亚胺培南MIC值分别为4.00、1.00、64.00和0.12μg/mL;对美罗培南MIC值分别为4.00、0.50、16.00和0.03μg/mL。结果显示ISAba1对blaOXA-23基因的表达有影响。结论该院Ab流行以blaOXA-23和blaOXA-51为主。ISAba1对blaOXA-23的高表达可能是Ab对碳青霉烯类抗菌药物高度耐药的主要原因。

复合诱变抗性筛选法选育高转化甘油产1,3-二羟基丙酮菌株

在测定不动杆菌(Acinetobacter sp.)Asp16菌株链霉素最低杀菌浓度的基础上,对菌株进行UV和60 Co诱变处理后,利用链霉素抗性平板筛选获得1株遗传性能稳定、高转化甘油产1,3-二羟基丙酮的突变株Asr168,将突变株在5.0g·L-1酵母膏、140.0g·L-1甘油、7.0g·L-1 CaCO3组成的发酵培养基中于30℃、250r·min-1摇床培养50h,1,3-二羟基丙酮的产量达到136g·L-1,比出发菌株提高200%。表明通过UV和60 Co诱变,结合链霉素抗性平板筛选,可大幅提高不动杆菌转化甘油产1,3-二羟基丙酮的能力。

2-取代亚肼基-1,3-二硫杂环戊烷类化合物的合成及抗菌活性

目的为了寻找高效、低毒的农用杀菌剂,用超声波法合成新型的2-取代亚肼基-1,3-二硫杂环戊烷类化合物。方法以CS2、NH2NH2·H2O、BrCH2CH2Br为原料,在超声波辐射下合成中间体1,3-二硫杂环戊烷,然后再和取代芳香醛缩合得到3种未见文献报道的新化合物。结果总收率在60%以上。结构经IR,MS,1HNMR和元素分析所确证。结论该类化合物合成方法简单。初步的生物活性实验表明,这3种化合物对大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、草绿色链球菌等有较好的抑杀作用。

鮰鱼肌肉组织中不动杆菌的分离及鉴定

将鮰鱼在4℃冷库中取得背部肌肉组织,进行真空包装,在4℃冰箱中贮藏7 d,分离得到2株细菌,分别编号为by 7-2、bs 7-3,进行细菌形态学观察、革兰氏染色、生化鉴定、16S rDNA测序及负染等。结果表明:菌株by 7-2在LB琼脂培养基上为圆形、湿润、白色菌落,菌株bs 7-3在LB琼脂培养基上为圆形、湿润、乳白色菌落;革兰氏染色镜检表明,2株细菌均为革兰氏阴性菌;负染结果表明,by 7-2为短杆菌,bs 7-3为长杆菌,且二者均无鞭毛;生化鉴定结果显示,菌株by 7-2和bs 7-3硝酸盐还原、精氨酸双水解酶、乙酰胺酶、分解木糖、分解麦芽糖、分解甘露醇、DNA酶和氧化酶实验均为阴性,菌株bs 7-3的利用柠檬酸盐和O-F实验为阳性,菌株by 7-2利用柠檬酸盐和O-F实验为阴性;进一步通过16S rDNA测序及系统发育树分析显示,by 7-2与约翰逊不动杆菌(Acinetobacter johnsonii)亲缘关系最近,相似度达99.90%,bs 7-3与抗辐射不动杆菌(Acinetobacter radioresistens)亲缘关系最近,相似度达99.79%。因此,菌株by 7-2为约翰逊不动杆菌,bs 7-3为抗辐射不动杆菌。

产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶耐药鲍曼不动杆菌对消毒剂的抗力研究

目的研究临床分离的产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)耐药鲍曼不动杆菌对医院常用消毒剂的抗力。方法采用悬液定量杀菌试验方法,对临床分离产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌抗消毒剂能力进行研究,同时与消毒试验标准菌株作平行比较。结果以浓度为5 500 mg/L邻苯二甲醛、2 000 mg/L苄索氯铵、体积分数75%乙醇、20 g/L葡萄糖酸氯己定醇对临床分离产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌作用15 s,杀灭对数值均>5.00,结果与四种标准菌株完全一致。以有效碘5 178 mg/L聚维酮碘对产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌和三种标准菌株作用15 s和对金黄色葡萄球菌作用60 s,杀灭对数值均>5.00。浓度为1 000 mg/L的十一酰胺丙基甜菜碱和聚六亚甲基胍作用60 s,对临床分离的产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌和金黄色葡萄球菌杀灭对数值均>5.0,对大肠杆菌和铜绿假单胞菌的杀灭对数值均<5.0。结论临床分离的产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌对上述消毒剂抗力与其标准菌株相当,且与其他标准菌株相比抗力持平或略低。

石油开采区地下水污染微生物净化方法

为了实现对地下水中石油类污染物的有效处理,降低石油污染程度,必须对污染物进行净化。为此,提出石油开采区地下水污染微生物净化方法研究。分析了石油开采区地下水污染的形成原因和构成成分;以某石油开采区的实际地下污水为测试对象,采用生物炭作为微生物载体,以草芽孢杆菌,多食鞘氨醇杆菌和抗辐射不动杆菌作为微生物净化群体;测试这些微生物在不同使用方式下对硫化物、挥发酚、氯化物、液相石油类物的净化效果。测试结果表明,在90d的净化周期内,三种微生物的使用比例为2:3:3时,对硫化物的净化效果最佳;三种微生物的使用比例为3:2:2时,对挥发酚的净化效果最佳;三种微生物的使用比例为1:1:1时,无法实现对卤化物进行有效净化;三种微生物的使用比例为3:2:3时,对液相石油类物质的净化效果最佳。