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gltC基因缺失对单增李斯特菌10403S抗酸应激能力的影响
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作者 杨雨婷 韩旭 +4 位作者 肖金华 方小伟 梁雄燕 刘晶 方春 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3077-3085,共9页
【目的】构建单增李斯特菌gltC基因缺失株,并阐明gltC基因对单增李斯特菌抗酸应激能力的影响。【方法】通过对单增李斯特菌参考菌株10403S进行添加或不添加外源性谷氨酸在致死性酸性条件的抗酸应激试验,测定谷氨酸对菌株抗酸应激存活能... 【目的】构建单增李斯特菌gltC基因缺失株,并阐明gltC基因对单增李斯特菌抗酸应激能力的影响。【方法】通过对单增李斯特菌参考菌株10403S进行添加或不添加外源性谷氨酸在致死性酸性条件的抗酸应激试验,测定谷氨酸对菌株抗酸应激存活能力的影响;利用同源重组方法构建单增李斯特菌gltC基因缺失株;通过生长曲线测定gltC基因缺失对菌株生长能力的影响;通过酸应激存活试验测定gltC基因缺失对单增李斯特菌酸应激能力的影响;通过Western blotting测定gltC基因缺失对GadD2蛋白表达水平的影响;通过构建携带gltBD启动子区域gfp报告质粒,测定在酸性和中性条件下gltC基因缺失对gltBD启动子区域转录水平的影响。【结果】酸应激结果显示,添加外源谷氨酸可极显著提高菌株10403S在pH 2.5酸性条件下的存活能力(P<0.01)。PCR结果显示,缺失株10403SΔgltC构建成功。生长曲线结果显示,gltC基因缺失不影响单增李斯特菌的生长能力。酸应激结果显示,在pH 2.5致死性酸性环境下缺失株10403SΔgltC生长能力弱于亲本株10403S(P<0.01)。Western blotting结果显示,gltC基因缺失不影响GadD2蛋白表达水平(P>0.05)。PCR结果显示,携带gltBD启动子区域的gfp报告质粒构建成功。GFP荧光分析结果显示,gltC基因缺失后在酸性和中性条件下均会极显著降低gltBD启动子区域转录水平(P<0.01)。【结论】gltC基因缺失不影响单增李斯特菌正常生长,缺失株10403SΔgltC表现出抗酸应激能力下降,且会降低gltBD启动子区域转录水平,但不影响GadD2蛋白表达水平。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 谷氨酸合酶调控因子 gltC基因 抗酸应激 报告基因
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黄芪对中华鳖免疫和抗酸应激能力的影响 被引量:28
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作者 周显青 牛翠娟 孙儒泳 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期110-112,共3页
关键词 黄氏 中华鳖 免疫 抗酸应激能力 饵料添加 中草药
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双元调控系统LisRK对单增李斯特菌抗酸应激与侵袭力作用的研究 被引量:1
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作者 陈凌波 张钰 +3 位作者 方小伟 吉俊芝 方春 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期416-423,共8页
【目的】试验旨在阐明双元调控系统LisRK在单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)抵抗不利环境应激以及感染过程中的作用。【方法】以参考菌株10403S为亲本株,利用穿梭质粒pKSV7通过同源重组方法构建lisRK基因缺失株,并基于表达质粒pIMK... 【目的】试验旨在阐明双元调控系统LisRK在单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)抵抗不利环境应激以及感染过程中的作用。【方法】以参考菌株10403S为亲本株,利用穿梭质粒pKSV7通过同源重组方法构建lisRK基因缺失株,并基于表达质粒pIMK2构建了lisRK回补株;比较了亲本株10403S、缺失株ΔlisRK与回补株CΔlisRK在酸(pH 4.5)、渗透压(5%NaCl)和氧化(10 mmol/L H_(2)O_(2))应激条件下的生长与存活能力及其对胃腺癌细胞MGC803和肠上皮细胞Caco-2的侵袭率,进一步比较了亲本株10403S、缺失株ΔlisRK与回补株CΔlisRK经腹腔注射感染的小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量。【结果】应激试验结果显示,lisRK基因缺失显著降低单增李斯特菌在酸应激(pH 4.5)条件下的生长能力,但不影响该菌在5%NaCl和10 mmol/L H_(2)O_(2)中的生长能力;缺失株ΔlisRK在强酸应激条件下(pH 2.5)的存活率(0.57%)极显著低于亲本株(2.07%)与回补株(1.97%)(P<0.01)。细胞侵袭试验显示,缺失株ΔlisRK对肠上皮细胞Caco-2和胃腺癌细胞MGC803的侵袭率分别为2.04%和0.13%,极显著或显著低于亲本株与回补株(P<0.01;P<0.05)。小鼠感染试验显示,在感染后48 h,缺失株ΔlisRK在小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量分别为7.42×10^(7)和1.87×10^(7) CFU,均低于亲本株和回补株感染小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量,但并无显著性差异(P>0.05)。【结论】双元调控系统LisRK缺失减弱单增李斯特菌的抗酸应激能力和对宿主细胞的侵袭能力。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 双元调控系统 抗酸应激 侵袭力
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单核细胞增生李斯特菌SigB调控GadD3的抗酸应激作用 被引量:5
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作者 王宜 方小伟 +5 位作者 刘慧娟 万娇红 郭骞 张钰 田棋 方春 《动物医学进展》 北大核心 2020年第1期45-49,共5页
单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性人兽共患病病原菌,其拥有一系列抗酸应激系统以抵抗酸应激的伤害作用。谷氨酸脱羧酶(GAD)系统是该菌抗酸应激系统重要成员之一,酸应激存活试验表明,GAD系统3个谷氨酸脱羧酶基... 单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)是一种重要的食源性人兽共患病病原菌,其拥有一系列抗酸应激系统以抵抗酸应激的伤害作用。谷氨酸脱羧酶(GAD)系统是该菌抗酸应激系统重要成员之一,酸应激存活试验表明,GAD系统3个谷氨酸脱羧酶基因对单增李斯特菌抗酸应激能力的贡献依次为gadD2、gadD3和gadD1。为阐明GAD系统抗酸作用调控机制,通过荧光定量PCR、GFP报告基因和免疫印迹结合酸应激存活试验,证实了应激调控因子SigB参与正调控gadD3的转录与表达,但是不影响gadD1和gadD2的表达,进而通过gadD3参与单增李斯特菌的抗酸应激作用。研究结果丰富了单增李斯特菌抗酸应激系统的调控网络,并可为李斯特菌病的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 调控因子SigB 谷氨酸脱羧酶 抗酸应激
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单增李斯特菌双元调控系统lmo1060/lmo1061缺失株的构建及其抗酸应激能力
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作者 张钰 方小伟 +5 位作者 袁梅 郭骞 梁雄燕 刘晶 杨玉莹 方春 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第1期77-83,共7页
为了探明双元调控系统Lmo1060/Lmo1061是否影响单增李斯特菌(LM)的抗应激作用及致病性,本研究以LM 10403S为亲本株,通过同源重组技术构建了Δlmo1060/lmo1061缺失株。应激存活试验结果表明,lmo1060/lmo1061缺失显著增强LM在酸应激(pH=2... 为了探明双元调控系统Lmo1060/Lmo1061是否影响单增李斯特菌(LM)的抗应激作用及致病性,本研究以LM 10403S为亲本株,通过同源重组技术构建了Δlmo1060/lmo1061缺失株。应激存活试验结果表明,lmo1060/lmo1061缺失显著增强LM在酸应激(pH=2.5)条件下的存活率,但不影响该菌在10%NaCl和10 mmol/L H;O;中的存活能力。绿色荧光蛋白(GFP)报告基因筛选显示,lmo1060/lmo1061缺失不影响谷氨酸脱羧酶系统gadD1/gadT1和gadD3报告基因的表达,但显著上调gadT2/gadD2报告基因的表达。Western blot结果证实,缺失株Δlmo1060/lmo1061中GadD2蛋白水平显著高于亲本株,回补株CΔlmo1060/lmo1061中GadD2蛋白水平与亲本株则无显著性差异。小鼠毒力试验显示,缺失株Δlmo1060/lmo1061与亲本株感染24 h后在小鼠肝脏和脾脏中的载菌量并无显著差异。研究表明,双元调控系统Lmo1060/Lmo1061可能感应环境pH值变化,并通过调控gadT2/gadD2表达影响LM的抗酸应激作用。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 双元调控系统 抗酸应激 谷氨酸脱羧酶
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Phosphorylation residue T175 in RsbR protein is required for efficient induction of sigma B factor and survival of Listeria monocytogenes under acidic stress 被引量:3
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作者 Ke He Yong-Ping Xin +3 位作者 Ying Shan Xian Zhang Hou-Hui Song Wei-Huan Fang 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2019年第8期660-669,共10页
Listeria monocytogenes is an important zoonotic foodborne pathogen that can tolerate a number of environmental stresses. Rsb R, an upstream regulator of the sigma B(Sig B) factor, is thought to sense environmental cha... Listeria monocytogenes is an important zoonotic foodborne pathogen that can tolerate a number of environmental stresses. Rsb R, an upstream regulator of the sigma B(Sig B) factor, is thought to sense environmental challenges and trigger the SigB pathway. In Bacillus subtilis, two phosphorylation sites in RsbR are involved in activating the SigB pathway and a feedback mechanism, respectively. In this study, the role of RsbR in L. monocytogenes under mild and severe stresses was investigated. Strains with genetic deletion(Δrsb R), complementation(C-Δrsb R), and phosphorylation site mutations in the rsbR(RsbR-T175 A, RsbR-T209 A, and RsbR-T175 A-T209 A) were constructed to evaluate the roles of these RsbR sequences in listerial growth and survival. SigB was examined at the transcriptional and translational levels. Deletion of rsb R reduced listerial growxth and survival in response to acidic stress. Substitution of the phosphorylation residue RsbR-T175 A disabled RsbR complementation, while RsbR-T209 A significantly upregulated SigB expression and listerial survival. Our results provide clear evidence that two phosphorylation sites of Rsb R are functional in L. monocytogenes under acidic conditions, similar to the situation in B. subtilis. 展开更多
关键词 Listeria monocytogenes RsbR Sigma B (Sig B) factor PHOSPHORYLATION
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