基于定量蛋白质组学同位素相对和对绝定量技术的黄连解毒汤对自发性高血压病大鼠左心室肥厚蛋白质组学的研究

目的基于定量蛋白质组学同位素相对和对绝定量技术(iTRAQ)技术研究黄连解毒汤对自发性高血压病大鼠左心室肥厚蛋白质组学的影响。方法大鼠随机分为模型组和黄连解毒汤组,给予相应干预后取大鼠左心室组织。通过iTRAQ技术方法分析鉴定差异蛋白,利用GO数据库对鉴定出的差异蛋白进行生物信息学分析,KEGG数据库进行通路富集分析,STRING在线数据库构建蛋白互作网络,同时采用cytoscape软件cytoHubba插件筛选关键蛋白基因。结果共鉴定出108种差异蛋白,其中上调蛋白41个,下调蛋白67个,生物信息学分析表明差异蛋白主要参与84种生物学过程、涉及38种细胞组分与23种分子功能;差异蛋白主要集中在26条信号转导通路(P<0.05),其中氧化磷酸化通路与本研究密切相关,筛选出Pdhb、Uqcrc1、Ndufv1、Ndufb9、CYTB、Dlat、Dld、Ndufb6、Acadm、Tufm 10个关键蛋白基因,其中Uqcrc1、Ndufv1、CYTB主要富集在氧化磷酸化通路上。结论黄连解毒汤对自发性高血压病大鼠左心室肥厚心肌组织蛋白和通路具有调节作用,可能通过调节关键蛋白基因Uqcrc1、Ndufv1、CYTB促进线粒体氧化磷酸化功能影响高血压左心室肥厚。

黄连解毒汤6种主要成分高效液相色谱检测方法的建立和应用

目的建立检测黄连解毒汤中6种主要成分的高效液相色谱(HPLC)方法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.03 mg·mL-1磷酸二氢钾-乙腈(V∶V=7∶3)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为345 nm,柱温为37℃,进样量为20μL,建立检测黄连解毒汤6种主要成分(京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀)的HPLC方法。绘制HPLC检测6种成分的标准曲线,并进行方法学评价(线性、加样回收率、准确度和精密度、稳定性)。采用建立的HPLC方法检测黄连解毒汤样本。结果HPLC检测京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的线性范围分别为25.00~800.00、32.00~1024.00、20.00~640.00、20.30~650.00、13.13~420.00、25.00~800.00μg·mL-1,精密度和准确度均<2%,加样回收率分别为105.30%、102.88%、103.51%、107.76%、96.29%、99.34%。稳定性实验结果显示,室温放置24 h、反复冻融3次、2~8℃保存1周、-80℃冻存1个月,京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的峰面积相对标准偏差(RSD)均<2%,检测结果均稳定。采用HPLC检测黄连解毒汤的主要成分,浓度从高到低依次为药根碱(2799.00μg·mL-1)、小檗碱(2358.03μg·mL-1)、京尼平苷(1793.34μg·mL-1)、巴马汀(945.30μg·mL-1)、黄连碱(192.00μg·mL-1)、黄芩苷(171.00μg·mL-1)。结论建立的同时检测黄连解毒汤6种主要成分的HPLC方法快速、简便、重复性好、准确度高,可为后续黄连解毒汤的相关研究和临床应用奠定基础。

黄连解毒汤及其含药血清的化学成分及抗肿瘤作用对比研究

目的:对比黄连解毒汤及其含药血清的抗肿瘤作用及其化学成分的异同。方法:采用HPLC梯度洗脱对比分析黄连解毒汤及其含药血清化学成分的异同。并用MTT方法比较黄连解毒汤及其含药血清对人肝癌Bel-7402、人小细胞肺癌NC I-H446 2种瘤株的抑制作用。结果:发现10个来源于复方的原型成分,几个代谢产物,同时一些原方剂中的主要成分并未在血清中出现。黄连解毒汤及其含药血清对2种瘤株都有显著的抑制增殖作用,并呈量效依赖关系,但抑制程度不同。黄连解毒汤对人肝癌Bel-7402相对更敏感(Bel-7402的IC50为185.34 mg.L-1,NC I-H446的IC50为264.68 mg.L-1),黄连解毒汤含药血清各剂量组对2种瘤株的抑制程度非常相似。结论:黄连解毒汤及其含药血清对2种瘤株抑制程度变化的原因可能是黄连解毒汤中各主要成分吸收入血后含量变化造成的。对其进行深入的研究,将有助于阐明黄连解毒汤抗肿瘤的有效成分及作用机制。

黄连解毒汤及其单味药精制前后抗血小板聚集作用的研究

目的比较黄连解毒汤复方及其单味药经不同精制方法前后对家兔血小板聚集率的影响。方法采用血小板聚集功能测定法,测定黄连解毒汤复方及其单味药以及二者经过大孔树脂吸附、醇沉、絮凝等精制方法处理过后对家兔血小板聚集率的影响。结果全方共煎液聚集抑制率达到89.03%;经过AB-8树脂处理后全方聚集抑制率达到87.34%。结论精制前后,全方的聚集抑制率均高于单味药复配、各单味药的聚集抑制率;其中经过AB-8树脂处理后的全方聚集抑制率高于其他精制方法处理后的聚集抑制率。

五苓散合黄连解毒汤加减治疗难治性高血压的临床效果

目的探讨五苓散合黄连解毒汤加减治疗难治性高血压的临床效果及其作用机制。方法随机将难治性高血压患者分为对照组和治疗组,每组60例。对照组口服氯沙坦钾氢氯噻嗪片、苯磺酸氨氯地平片治疗,治疗组在对照组的基础上联合使用五苓散合黄连解毒汤加减治疗,两组均治疗4 w。观察治疗前后24 h动态血压、杜氏高血压生活量表及C-反应蛋白(CRP)、内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)水平。结果治疗组总有效率明显高于对照组(P<0.05);治疗组可以降低日间、夜间、24 h收缩压和舒张压均值水平(P<0.05),提高杜氏高血压生活质量量表积分(P<0.05),且治疗组改善上述指标均明显优于对照组(P<0.05);治疗组可以降低CRP、ET及提高CGRP水平,且明显优于与对照组(P<0.05)。结论五苓散合黄连解毒汤加减治疗难治性高血压临床疗效肯定,可以降低患者血压、提高患者的生活质量,其机制可能与降低CRP、ET及提高CGRP水平相关。

黄连解毒汤对幼龄自发性高血压大鼠血管超微结构的影响

目的研究幼龄自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉超微结构的变化及黄连解毒汤(HLJD)对其的影响。方法 6周龄自发性高血压大鼠20只,随机分为模型组(n=10)、HLJD组(n=10),年龄和体质量匹配的wistar-Kyoto(WKY)大鼠为空白组(n=10)。灌胃法给药6周后观察各组大鼠收缩压变化及胸主动脉超微结构的改变。结果透射电镜下HLJD能使SHR胸主动脉超微结构的改变得到明显逆转,明显减轻SHR大鼠血管内皮细胞超微结构的损伤,使胸主动脉内皮细胞基本保持完整形态,无核坏死;减轻细胞肿胀、细胞器的外漏现象;保持线粒体排列整齐、血管内皮细胞间隙正常;内弹力层较完整,均匀。结论 SHR在高血压前期已存在内皮细胞结构的损伤,黄连解毒汤早期应用可改善SHR胸主动脉血管内皮超微结构的改变。

黄连解毒汤对幼龄自发性高血压大鼠炎性因子、血管性假血友病因子水平的影响

目的研究黄连解毒汤对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)炎性因子、假性血管性血友病因子、血压等的影响,探讨黄连解毒汤预防高血压的机制。方法雄性6周幼龄自发性高血压大鼠16只随机分为黄连解毒汤组、模型组2组,治疗6周,检测治疗前后的血压变化,测定大鼠血浆高敏C反应蛋白(hs-CRP)、单核细胞趋化蛋白1(CMP-1)及血管性假血友病因子(vWF)浓度变化,并以同龄Wistar Kyoto大鼠8只做空白对照比较。结果SHR血压呈进行性增高,血浆中hs-CRP、vWF升高,CMP-1无显著变化。黄连解毒汤可以控制幼龄SHR血压,降低SHR血浆hs-CRP、vWF含量。结论早期应用黄连解毒汤可以改善SHR的炎性反应和保护血管内皮。

黄连解毒汤治疗急性期高血压性脑出血的临床研究

目的观察黄连解毒汤对高血压性脑出血急性期血浆TNF-α和IL-6的影响,为其临床应用提供一定的科学依据。方法将52例高血压性脑出血急性期患者分为治疗组24例,对照组28例,采用双抗体夹心固相酶联免疫吸附法(ELISA)比较治疗前后血浆TNF-α和IL-6含量及神经功能缺损评分的变化。结果黄连解毒汤治疗组血浆TNF-α和IL-6含量治疗后明显低于治疗前(P<0.01),神经功能缺损评分治疗后减少程度明显优于对照组(P<0.01)。结论黄连解毒汤对高血压性脑出血急性期治疗可发挥一定的免疫抑制作用,值得临床推广应用。

黄连解毒汤对自发性高血压大鼠血管内皮功能的保护作用

目的观察黄连解毒汤对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)血管内皮功能的保护作用。方法 24只12周龄雄性SHR随机分为黄连解毒汤组、卡托普利组和模型组3组,8只同龄雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为空白对照组,通过BP-6动物无创血压测试仪测定各组治疗前血压,连续给药6周,1次/d,第1,2,4,6周的第7天下午定时测量各组血压,6周后由腹主动脉取血,检测血清血栓素A2(TX-A2)、6酮前列环素(6-K-PG)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)和血管性血友病因子(vWF)。结果黄连解毒汤和卡托普利均可降低SHR血压、TX-A2、ET-1、MDA、ANG-Ⅱ和vWF,增加6-K-PG、NO和SOD。结论黄连解毒汤可降低SHR的血压,且对血管内皮功能具有保护作用。

基于iTRAQ技术的黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉差异蛋白的研究

目的:基于iTRAQ技术分析黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用蛋白,对差异蛋白进行鉴定和生物信息学分析,探讨黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用机制。方法:大鼠随机分为模型组和黄连解毒汤组,分别给予相应干预后取大鼠的主动脉组织。通过iTRAQ方法分析得到差异蛋白,将相关的差异蛋白基因通过DAVID数据库搜索结合GO数据库搜索进行功能注释和富集分析,采用KEGG数据库进行信号转导通路分析,STRING数据库进行蛋白质相互作用分析。结果:共鉴定出56种差异蛋白,生物信息学分析发现,差异蛋白主要参与了26种生物学过程、20种细胞组分、15种分子途径,差异蛋白参与4条信号转导通路,差异蛋白基因的功能主要包括ATP能量代谢、氧气转运、线粒体质子转运ATP合酶,差异蛋白主要富集在氧化磷酸化信号通路上。结论:黄连解毒汤可能通过上调ATP合酶基因蛋白Q6PDU7,P19511,D3ZAF6促进线粒体氧化磷酸化功能达到保护血管的作用。

黄连解毒汤对自发性高血压大鼠血压及血浆t-PA和PAI-1的影响

目的研究黄连解毒汤对自发性高血压大鼠(SHR)血压及纤溶系统改变,探讨SHR是否存在血栓前状态及黄连解毒汤的治疗作用。方法雄性自发性高血压大鼠(SHR)24只随机分为黄连解毒汤组、卡托普利组、模型组,治疗6周,分别检测治疗前后的血压变化,酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、组织型纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、血管性假血友病因子(vWF)变化,并设Wistar-kyoto(WKY)大鼠8只做空白对照。结果模型组血浆PAI-1增高,t-PA下降,vWF上升,黄连解毒汤组治疗后可以明显降低SHR血压,降低血浆vWF,但与模型组相比不能使PAI-1降低,t-PA升高。结论 SHR存在血栓前状态,黄连解毒汤能降低SHR的血压,保护内皮,但不能改善SHR血浆t-PA和PAI-1的变化。

黄连解毒汤对自发性高血压大鼠炎性因子及血管性假血友病因子水平的影响

目的:探讨黄连解毒汤治疗原发性高血压的作用机制。方法:雄性自发性高血压大鼠(SHR)24只随机分为黄连解毒汤组、卡托普利组、模型组3组,治疗6周,分别检测治疗前后的血压变化及血浆高敏C反应蛋白(hs-CRP)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及血管性假血友病因子(vWF)的浓度变化。结果:黄连解毒汤可以降低SHR血压,降低血浆hs-CRP、MCP-1、vWF。结论:SHR存在炎性反应和内皮损伤,黄连解毒汤在降压同时,能改善SHR的炎性反应,保护血管内皮。

黄连解毒汤加减治疗高血压病30例临床研究

用黄连解毒汤加减治疗肝火型高血压病30例，结果显效16例，有效12例，无效2例，总有效率93．3％，与对照组比较有显著性差异（P＜0.05），并能改善症状、血脂、血液流变学、血浆内皮素、缺血性心电图，其机理可能与降低内皮素浓度、保护血管内皮细胞有关。

黄连解毒汤等多种施加因素对高血压大鼠血压的影响

原发性高血压(essential hypertension,EH)是临床常见的心血管疾病之一,炎症与高血压互为因果、相互影响,二者是一个恶性循环的关系,炎症在高血压病中的作用和地位已愈加受到重视[1]。高血压病存在热毒的特征,阳盛体质,饮食失节,五志过极等因素相互作用,导致机体脏腑功能紊乱,气血功能失常,热毒盛[2]。原发性高血压热毒证是脏腑气血功能紊乱、气血功能异常所引起的。致脏腑功能失常的原因繁多,而以体质与饮食失节、五志过极相互综合作用而导致心肝脾火热炽盛为最重要。临床多以面红目赤,烦躁易怒为主症,以苦寒降泄、清肝泻火为热毒高血压的治疗大法。黄连解毒汤以黄连泻心火,兼泻中焦之火为君;黄芩清肺热、泻上焦之火为臣;黄柏泻下焦之火,栀子通泻三焦之火,导热下行,合为佐使,共收泻火解毒之功[3]。

高血压性脑出血患者血浆TNF-α、IL-6变化及黄连解毒汤的干预作用

目的观察黄连解毒汤对高血压性脑出血患者血浆TNF-α、IL-6的影响,并阐明黄连解毒汤治疗高血压性脑出血急性期的作用机制,从而为脑出血急性期提供有效的脑保护方剂。方法将高血压性脑出血患者52例随机分为治疗组(A组)24例与对照组(B组)28例,另选取健康老年人30例为正常对照组(C组)。B组予以常规西医治疗,A组在B组基础上加用黄连解毒汤,两组均以2周为1疗程;A组及B组分别于治疗前及治疗后测血浆TNF-α及IL-6。结果高血压性脑出血患者TNF-α、IL-6显著高于正常对照者,治疗后A组TNF-α、IL-6与C组均无显著性差异;治疗后B组TNF-α、IL-6与C比较差异有显著性,A、B两组TNF-α、IL-6比较差异非常显著。A组在改善神经功能缺损方面显著优于B组。高血压性脑出血患者TNF-α及IL-6含量与神经功能缺损程度及血肿的大小呈正相关。结论TNF-α、IL-6可作为观察高血压性脑出血的病情监测指标,TNF-α和IL-6的含量反映病情严重程度,其含量越高则病情越重。黄连解毒汤对高血压性脑出血急性期的治疗有显著作用,能显著降低TNF-α、IL-6的含量,抑制白细胞对血肿周围脑组织的浸润,明显改善脑出血患者的病情。黄连解毒汤治疗高血压性脑出血安全有效,可为高血压性脑出血急性期提供有效的脑保护作用。

黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀治疗高血压合并高脂血症疗效观察

目的观察黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀治疗高血压合并高脂血症的临床疗效。方法选取诊治的高血压合并高脂血症患者90例,随机分为对照组和观察组,每组45例,2组均接受常规治疗,对照组在常规治疗基础上口服瑞舒伐他汀治疗,观察组在对照组基础上加用黄连解毒汤。疗程均为8周。观察2组疗效及收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、脉压差、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、全血低切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、斑块数量、斑块面积、内膜至中膜厚度(IMT)、臂踝脉搏波传导速度(ba PWV)、踝臂指数(ABI)及不良反应。结果观察组血压、血脂治疗总有效率较对照组显著提高,不良反应发生率较对照组显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。治疗前2组收缩压、舒张压、脉压差、TC、TG、LDL-C、HDL-C、全血低切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、斑块数量、斑块面积、IMT、ba PWV、ABI比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。治疗后2组收缩压、舒张压、脉压差、TC、TG、LDL-C、全血低切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、斑块数量、斑块面积、IMT、ba PWV均较治疗前显著降低,HDL-C、ABI均较治疗前显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05),且观察组改善程度优于对照组(P <0. 05)。结论黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀治疗高血压合并高脂血症能够有效调节血压、血脂,改善外周动脉硬化,值得临床推广应用。

黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀对高血压合并高脂血症患者氧化应激和血管内皮功能的影响

目的观察黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀对高血压合并高脂血症患者氧化应激和血管内皮功能的影响。方法选取2016年1月至2018年1月诊治的高血压合并高脂血症患者90例,随机分为对照组和观察组,每组45例。2组均接受常规治疗,对照组在常规治疗基础上口服瑞舒伐他汀治疗,观察组在对照组基础上加用黄连解毒汤。疗程均为8周。观察2组治疗前后血清氧化应激指标[丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、隐性氧化蛋白产物(AOPP)、总抗氧化力(TAOP)]、血管活性物质[血管性血友病因子(v WF)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、血栓素(TXB2)、6-酮-前列腺素F-(1a)(6-Keto-PGF-1a)]、血小板膜糖蛋白CD62p、CD63及肱动脉血管内皮血流介导的舒张功能(FMD)、肱动脉血管内皮硝酸甘油介导的舒张功能(NMD)变化。结果治疗前2组血清MDA、SOD、GSH-Px、AOPP、TAOP、v WF、ET-1、NO、TXB2、6-Keto-PGF-1a、CD62p、CD63及FMD、NMD比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。治疗后2组血清MDA、AOPP、v WF、ET-1、TXB2、CD62p、CD63均较治疗前显著降低,SOD、GSH-Px、TAOP、NO、6-Keto-PGF-1a、FMD、NMD均较治疗前显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05),且观察组改善程度优于对照组(P <0. 05)。结论黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀治疗高血压合并高脂血症能够有效抑制患者体内氧化应激反应,改善血小板功能和血管内皮功能。

黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀对高血压合并高脂血症患者炎性因子和脂肪因子的影响

目的观察黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀对高血压合并高脂血症患者炎性因子和脂肪因子的影响。方法选取2016年1月至2018年1月诊治的高血压合并高脂血症患者90例,随机分为对照组和观察组,每组45例。2组均接受常规治疗,对照组在常规治疗基础上口服瑞舒伐他汀治疗,观察组在对照组基础上加用黄连解毒汤。疗程均为8周。观察2组治疗前后血清炎性因子[白介素-6(IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超敏C-反应蛋白(hsCRP)]、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、脂肪因子(瘦素、脂联素、Vaspin)及外周血单核细胞(PBMC)NF-κB mRNA和蛋白表达变化。结果治疗前2组血清IL-6、IL-10、TNF-α、hs-CRP、MCP-1、ICAM-1、瘦素、脂联素、Vaspin及PBMC NF-κB mRNA和蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后2组血清IL-6、TNF-α、hs-CRP、瘦素、MCP-1、ICAM-1及PBMC NF-κB mRNA和蛋白表达均较治疗前显著降低,IL-10、脂联素、Vaspin均较治疗前显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组改善程度优于对照组(P<0.05)。结论黄连解毒汤联合瑞舒伐他汀治疗高血压合并高脂血症能够有效降低患者血清炎性因子、脂肪因子水平,其机制与抑制外周血单核细胞NF-κB炎症信号通路的活化有关。

黄连解毒汤对幼龄自发性高血压大鼠血管内皮NO通路影响的研究

目的:研究黄连解毒汤(HLJD)对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮保护作用及该药物的作用机制。方法:40只6周龄雄性SHR大鼠随机分为模型组(SHR组)、阳性组(卡托普利组)、黄连解毒汤高剂量组、黄连解毒汤低剂量组每组10只,空白组10只(正常WKY大鼠),灌胃6周并用无创尾套法测量其尾动脉收缩压及舒张压;酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清中一氧化氮(NO)、超氧物歧化酶(SOD)、血管紧张素II(AngII)、钙调素(CaM)含量变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹技术(Western blot)测定胸主动脉中Ras同源基因家族成员A(RhoA)、环鸟苷酸依赖性蛋白激酶(cGK)、肌球蛋白结合亚单位(MYPT1)mRNA与蛋白表达情况。结果:给药6周后,与模型组相比,黄连解毒汤各剂量组和阳性组均能显著地降低大鼠的血压。与空白组比较,模型组动物血清中AngII与SOD水平显著升高(P<0.01),NO与CaM水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,阳性组和黄连解毒汤各组中的AngII与SOD水平降低(P<0.01或P<0.05),NO与CaM水平提高(P<0.01或P<0.05)。黄连解毒汤能够降低高血压大鼠胸主动脉RhoA、MYPT1的表达(P<0.05),并能提高高血压大鼠胸主动脉cGK的表达(P<0.05)。结论:黄连解毒汤能降低高血压大鼠的血压,调节血管内皮舒缩因子的分泌,并可影响cGK,RhoA,MYPT1等因子的表达,而这些因子的表达与NO的活性密切相关。