来源于裂壶藻渣的外泌体制备、鉴定及其抗黑色素生成功效初探

[目的]初步探究来源于海洋微藻裂壶藻(Schizochytrium limacinum)的外泌体的医美功能.[方法]从提取藻油后的裂壶藻废渣中提取外泌体,通过透射电子显微镜(TEM)和纳米流式分析仪(NanoFCM)对其进行结构鉴定,采用二喹啉甲酸(BCA)法测定其中的蛋白浓度,并建立黑点青鳉(Oryzias melastigma)模型测试外泌体抗黑色素生成功效.[结果]TEM结果可见裂壶藻源外泌体呈典型的圆形或椭圆形杯状形态,NanoFCM测得外泌体浓度2.96×10^(12)mL^(-1),粒径为(90.8±19.9)nm;黑点青鳉实验证实裂壶藻源外泌体导致黑色素斑数量减少,具有显著的抗黑色素生成功效,且抑制率与浓度呈正相关.[结论]本研究建立了裂壶藻渣源外泌体的制备方法和抗黑色素生成功效测试模型,为其高值化利用及美白功效评价提供了新的方向和策略.

热灭活植物乳杆菌ATCC 8014对UVB暴露皮肤细胞的抗光老化和抗黑色素生成作用研究

【目的】中波紫外(ultraviolet B,UVB)照射是导致皮肤光老化形成和色素沉着的主要环境原因之一。植物乳杆菌是一种广泛研究的益生菌。本研究利用UVB照射皮肤细胞[正常人皮肤成纤维细胞(normal human dermal fibroblast,NHDF)和小鼠B16F10黑色素瘤细胞],探讨热灭活植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,LP)ATCC 8014的抗光老化和抗黑色素生成作用。【方法】以暴露于UVB的NHDF细胞和小鼠B16F10黑色素瘤细胞为研究对象,用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记(terminal-deoxynucleoitidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)染色分析和2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate DCFH-DA)染色分析实验检测2组细胞的细胞活力、DNA损伤及相对活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;利用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测NHDF细胞中的I型胶原蛋白水平;通过NaOH裂解法和多巴氧化法对B16F10细胞黑色素生成和酪氨酸酶活性进行测定;通过qRT-PCR分析和Western blotting分析检测光老化和黑色素生成相关基因和蛋白表达水平变化。【结果】(1)LP抑制UVB诱导的NHDF和B16F10细胞毒性,这与减少ROS介导的细胞DNA损伤有关;(2)LP下调基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-1、MMP-3和MMP-9(而不是MMP-2)mRNA水平[与抑制细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK),p38(而不是JNK)/c-Fos(而不是c-Jun)信号通路有关],增加I型前胶原(procollagen type-1 alpha 1,COL1A1)蛋白水平,从而提高I型胶原蛋白含量;(3)LP作为自噬诱导剂(增加LC3-Ⅱ和Beclin 1蛋白水平以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率)抑制酪氨酸酶、酪氨酸相关蛋白(tyrosinase-related protein,TYRP)-1和TYRP-2活性和/或表达(与压制PKA/CREB/MITF信号通路有关),从而降低黑色素含量。【结论】LP在UVB暴露的皮肤细胞中具有潜在的抗光老化和抗黑色素生成作用。

发酵莲花花瓣美白功效提升及作用机制研究

随着现代生物工程技术快速发展,利用发酵技术提高草药提取物在食品和化妆品添加剂领域的生物活性已成为新趋势。在本研究中,以蘑菇酪氨酸酶活性和黑色素形成为评价指标,对5种益生菌的莲花提取物(LPE)发酵产物进行活性筛选。结果显示植物乳杆菌CGMCC 1.124发酵产物(FLPE)具有酪氨酸酶抑制活力;在A-MSH诱导的小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)美白模型中,经50μg/mL FLPE处理的B16F10黑色素含量为模型对照组的86%±4.6%。为进一步阐明FLPE主要活性成分,利用HPLC,NMR和LC-MS对莲花提取物发酵前后产物中的主要黄酮类化合物进行定性定量分析。结构分析和生物活性评价结果表明,山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(49.8%,94.22 mg/g)和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸(13.6%)生物转化为两个生物活性苷元-槲皮素(14.4%,26.43 mg/g)和山奈酚(60.9%,70.76 mg/g)。在这些单体中,槲皮素通过调节酪氨酸酶活性、黑素发生相关酶(TYR,TRP-1和TRP-2)和小眼畸形相关转录调控因子(MITF)的表达抑制黑素形成。总体而言,利用植物乳杆菌CGMCC 1.124发酵提高了莲花提取物美白功效,转化生成的槲皮素是植物乳杆菌发酵产物抑制黑色素合成的物质基础之一。