自身免疫性溶血性贫血患者类抗-D抗体的鉴定及输血治疗(附1例报告)

目的通过血清学和基因分型对1例自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者类抗-D抗体进行特异性鉴定,指导临床安全用血。方法选择同济大学附属同济医院收治的1例女性AIHA患者为研究对象。采用PCR-SSP法检测鉴定患者ABO、Rh血型,患者血清标本进行吸收放散试验,利用谱细胞对患者血清及放散液中的不规则抗体进行特异性鉴定。回顾性分析患者的病例资料,总结其抗体处理结果和临床诊治经过。结果患者血型为B型DCCee,不规则抗体筛查、直接抗人球蛋白试验结果均阳性,血清及放散液中均检出特异性类抗-D抗体,给予患者相容性去白细胞悬浮红细胞4 U输血后,血红蛋白(Hb)升高至56 g/L,未出现输血反应。采用糖皮质激素治疗后,患者Hb上升至62 g/L,贫血症状缓解。结论血清学检测联合基因分型可鉴定具有同种抗体特异性的自身抗体,类抗-D抗体AIHA患者治疗首选糖皮质激素,危急情况下需要输血治疗时,应选择类抗体相应抗原阴性的红细胞,输血效果较好。

Rh阴性孕妇产前抗-D抗体阳性率分析

目的综合分析不同状况Rh阴性孕妇抗-D抗体的发生率。方法采用微柱凝胶卡方法鉴定Rh(D)血型以及测定孕妇血清抗-D抗体,PCR方法检测RHD1227A等位基因鉴别我国汉族Rh阴性个体中的一种变异体"DEL型"和真实Rh阴性表型。结果共观察196例Rh阴性孕妇,抗-D检出率14.3%(28/196);其中56例病历记录无妊娠史,抗-D阳性率5.4%(3/56);77例有妊娠史(有生育史除外),抗-D阳性率7.8%(6/77);余63例有生育史,抗-D阳性率30.2%(19/63)。所有样本中检出变异体DEL型41例,均未检测到抗-D抗体。排除DEL按真实Rh阴性计算(155例),抗-D阳性率18.1%(28/155);无妊娠史者阳性率6.4%(3/47);有妊娠史者阳性率上升为9.7%(6/62);有生育史者抗-D阳性率则达41.3%(19/46)。结论近半数有生育史的真实Rh阴性孕妇发生D抗原同种免疫反应,DEL型孕妇不因妊娠和生育产生抗-D抗体。

单克隆抗-D细胞株的建立及抗-D抗体Fab段的基因序列分析

目的 :建立分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞株 ,分析编码一株人单克隆抗 -D抗体Fab段的基因序列。方法 :以EB病毒 (EBV)转化分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞 ,建立分泌抗 -D抗体的淋巴细胞株。设计扩增人lgM重链Fd段及κ轻链的引物 ,以聚合酶链反应进行扩增 ,对扩增产物进行分子克隆及测序。结果 :分别用轻链引物和重链引物从一分泌lgM抗 -D的单克隆细胞株扩增出一约 650bp和 70 0bp的特异带。序列分析表明 ,其核苷酸及其所推导的氨基酸 (AA)序列符合人lgFab段的序列特征。结论 :获得了抗 -D抗体Fab段基因 ,为基因工程抗

不同pH值和盐浓度对柱色谱提取抗-D抗体的影响

目的探讨不同pH值和盐浓度对离子交换色谱从低效价血浆中提取抗-D抗体的影响及工艺。方法抗-D效价为1∶128的健康人血浆,经DEAE-SephadexA-50离子交换色谱柱,用不同pH值和浓度的磷酸盐缓冲液(PBS)洗脱,收集未吸附组分,检测相关指标。结果pH7.5组的抗-D效价和IgG回收率较低,但γ-球蛋白纯度较高;而pH5.8、0.05mol/LPBS组的抗-D效价和IgG回收率最高,单体和二聚体含量也高,但γ-球蛋白纯度相对较低。结论用pH5.8、0.05mol/LPBS洗脱,较适合从低效价血浆中提取抗-D抗体。

用血影细胞从低效价血浆中分离抗-D抗体

目的研究从低效价血浆中分离抗-D抗体的方法。方法用遗传表现型CCDee的RhD阳性O型红细胞制备血影细胞,经亲和层析法从抗-D含量为0.814μg/mL的健康人血浆中分离抗-D抗体,检测相关指标。结果经此法成功获得抗-D抗体,抗-D抗体回收率达到84.65%,所得制剂经检测激肽释放酶原激活剂含量、IgG单体加二聚体含量、抗补体活性及γ-球蛋白纯度等指标符合中国生物制品规程的要求。结论血影细胞亲和层析法简化了抗-D抗体提取和纯化步骤,提高了从低效价血浆中提纯抗-D抗体的回收率。

携带RhD-CE(2-9)-D基因并检出高效价同种抗-D抗体1例报告

RhD-CE（2-9）-D基因型是中国汉族人群Rh血型中部分D（RhD弱表现型的一种,为D抗原的变异体[1]）的主要等位基因。因其抗原表达极弱,用血清学方法无法检出,常被鉴定为Rh阴性。本研究从1例Rh阴性不全流产妇女血清中检测出高效价的抗-D抗体,并进一步检测其基因型,证实为RhD-CE（2-9）-D基因型,报告如下。

完整人抗-D抗体分子表达载体的构建

目的构建含完整人抗-D抗体重、轻链基因的表达载体,为体外表达完整的抗-D抗体分子打下基础。方法从1株分泌IgM抗-D的细胞株提取总RNA,以随机引物逆转录成cDNA,用所设计的抗体前导区引物进行扩增,克隆、测序后将抗-D抗体重、轻链可变区基因分别和带有人IgG1恒定区和к轻链恒定区的表达载体连接,转化大肠杆菌后提取质粒DNA,用PCR和酶切进行鉴定。结果序列分析发现所扩增的基因符合人Ig的特征,除引导序列外,其余序列和我们以前所发表的Fab段序列一致,PCR和酶切鉴定抗体重、轻可变区基因克隆成功。结论成功地扩增了带引导序列的抗-D抗体可变区基因,并构建了完整人抗-D抗体分子表达载体。

AB型RhD阴性患者检出抗-D抗体和抗-Di^(a)抗体1例研究分析

对于抗体筛选试验阳性和交叉配血不相合的患者,采用间接抗人球蛋白方法进行抗体鉴定试验,可确定不规则抗体的种类和性质,了解不规则抗体产生的途径和过程,为患者选择相合的血液进行输血,对患者的输血安全有着重要意义。

抗-D抗体引起新生儿溶血一例

新生儿溶血病通常是指由于母婴血型不合，母亲血清中抗体进入新生儿的血液循环，进而破坏新生儿的红细胞，导致其发生溶血性贫血的一类疾病。通常以ABO新生儿溶血病最为常见，其次是Rh血型系统的新生儿溶血病，其他系统相对罕见。本病例为Rh血型系统抗-D抗体引起的新生儿溶血。

母儿Rh血型不合新生儿围产期抗-D抗体效价、血红蛋白、胆红素检测及临床意义

目的检测母儿Rh血型不合新生儿围产期抗-D抗体效价、血红蛋白(Hb)、胆红素水平,并探讨其临床意义。方法回顾性分析2015年6月至2020年6月宝鸡市中心医院收治的65例母儿Rh血型不合新生儿的诊疗资料。根据新生儿出生后Rh血型不合溶血病的发生情况,将其分为溶血病组37例和未发生溶血病组28例。检测并比较两组新生儿围产期抗-D抗体效价、Hb及胆红素水平,并采用多因素Logistic回归模型分析影响新生儿发生溶血病的危险因素。结果溶血病组新生儿抗-D抗体效价、直接胆红素、间接胆红素分别为1∶(788.55±80.22)、(40.24±4.03)μmol/L、(126.90±13.54)μmol/L,明显高于未发生溶血病组的1∶(13.62±1.23)、(12.13±1.32)μmol/L、(63.93±6.56)μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05);溶血病组新生儿Hb水平为(122.44±12.06)g/L,明显低于未发生溶血病组的(162.05±16.42)g/L,差异有统计学意义(P<0.05);单因素分析结果显示,出生时间、体质量指数(BMI)、抗-D抗体效价、Hb、直接胆红素及间接胆红素与新生儿发生溶血病密切相关(P<0.05);多因素Logistic分析结果显示,抗-D抗体效价、Hb、直接胆红素及间接胆红素是影响新生儿发生溶血病的独立危险因素(P<0.05)。结论抗-D抗体效价、Hb、直接胆红素及间接胆红素是影响母儿Rh血型不合新生儿发生溶血病的独立危险因素,临床检测新生儿围产期抗-D抗体效价、Hb、胆红素水平对诊断、评估其溶血病的发生有重要意义。

抗-D抗体及其应用

Rh血型是仅次于ABO血型系统的人类红细胞抗原系统,至今已发现40多种抗原,但与临床密切相关的是D、C、c、E、e等5种抗原,其中最主要的是D抗原。相应的抗-D抗体无论是在临床输血检测,还是在Rh(D)新生儿溶血病、溶血性输血反应等的防治方面均具有非常重要的意义。传统的抗-D抗体的制备需用人的血清,来源受限。各种抗-D人源性单克隆抗体和基因工程抗体已经成为发展方向。

同种抗-E抗体和自身类抗-D抗体引起交叉配血困难1例报告

患者男,63岁,患有MDS,有多次输血史。入我院后,Hb43g/L,做输血前检查,患者血型为B Rh（D）＋,抗体筛选（3细胞）和自身对照均阳性,与B Rh（D）＋献血员交叉配血均不相合,

抗-D抗体致新生儿溶血病的输血策略及其预后疗效评估分析

目的探讨由抗-D抗体致新生儿溶血病患者的输血策略及其预后疗效评估。方法纳入2015年1月~2019年12月我院收治的抗-D抗体新生儿溶血病患者10例作为研究对象,均进行配合型输血治疗,观察治疗前后患者血常规指标变化、血液生化指标变化。结果患者治疗前Hb、RBC、Hct值分别为(104.70±3.72)g/L、(3.01±0.14)×10^12/L、0.33±0.01,治疗后分别为(136.60±2.40)g/L、(4.09±0.17)×10^12/L、0.40±0.01,治疗后明显优于治疗前(P<0.05);患者治疗前TBL、DBL、IBL、LDH值分别为(294.09±26.91)μmol/L、(25.68±3.84)μmol/L、(268.41±24.16)μmol/L,(591.60±59.69)IU/L,治疗后分别为(164.86±25.4)μmol/L、(16.03±1.86)μmol/L、(143.41±24.3)μmol/L,(347.20±33.82)IU/L,治疗后明显优于治疗前(P<0.05)。结论抗-D抗体新生儿溶血病患者输血首选ABO血型同患者血型一致的RhD阴性血液,其输血后临床效果显著,预后良好。

血液抗-D抗体检测在RhD阴性患者输注RhD阳性同型红细胞中的效果分析

目的研究RhD阴性患者输注与其血型相同的RhD阳性红细胞血液后,患者抗-D抗体的水平。方法收集该院2010年1月至2016年1月输注RhD阳性同型红细胞的20例RhD阴性患者的临床资料,分析其在输血前及输血后10、20、30、60、90d的抗-D抗体水平及RhD阳性患者的效价。结果输注RhD阳性同型红细胞血液的20例RhD阴性患者,在输血后90d内有6例患者表现为RhD阳性,其中男性RhD阳性率为25.0%(3/12)、女性RhD阳性率为37.5%(3/8)。3例RhD阳性的女性患者抗-D抗体效价分别为35、278、508。结论 RhD阴性患者输注RhD阳性同型红细胞血液,可刺激机体免疫机制,产生红细胞表面抗-D抗体,且部分RhD阴性患者的红细胞表型会发生改变。

自身免疫性溶血性贫血患者抗-LW抗体和自身抗-D抗体鉴定及输血策略

目的:对自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者的不规则抗体进行鉴定分析,为其制定输血策略,指导临床科学合理用血。方法:在河北省血液中心进行疑难交叉配血的AIHA患者2例,分别采用试管法和微柱凝胶法对其进行ABO血型和Rh血型鉴定、直接抗球蛋白试验(DAT)、抗体筛查试验及交叉配血试验,采用二硫苏糖醇(DTT)处理和未经处理的谱细胞鉴定患者血浆抗体特异性。结果:2例患者均为RhD抗原阳性,DAT及抗体筛查试验阳性,其中1号患者血浆与DTT未处理谱细胞反应呈抗-D特异性,与DTT处理后谱细胞反应结果呈全阴性;2号标本血浆与DTT处理及未处理谱细胞反应均呈阴性。2例患者与同型RhD阴性红细胞均呈交叉配血相合状态。结论:1号患者体内的不规则抗体为抗-LW抗体,2号患者抗体为自身抗-D抗体,此类AIHA患者均可输注同型RhD阴性悬浮红细胞。

人源性抗-D基因工程抗体在真核细胞CHO中的表达

目的于真核细胞系CHO细胞中表达人源性抗-D基因工程抗体,为人源性抗-D基因工程抗体在临床上的应用打下坚实的基础。方法脂质体法将真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL共转染体外培养的CHO细胞,经霉酚酸及组氨醇筛选阳性克隆细胞。通过ELISA法检测培养上清中人IgG的表达量。应用化学发光WesternBlotting法对真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL在CHO细胞中的表达进行鉴定。结果pAH4604/VH和pAG4622/VL共转染体外培养的CHO细胞,经霉酚酸及组氨醇筛选12～14d后有阳性克隆长出,未转染细胞则全部死亡。筛选出的各阳性细胞克隆经扩大培养及ELISA定量检测其上清人IgG含量最高为4.05ng/ml。WesternBlotting显示上清和细胞内均有人IgG重链和轻链的表达。结论所构建的真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL在CHO真核细胞系表达成功,可产生人源化的IgG重链和轻链。