生物工程人源抗-HBsFab的抗原特异亲合力简易测定

目的 建立一种简易的抗体亲合力测定技术 ,对生物工程抗 HBsFab进行抗原特异亲合力测定。方法 应用异种抗体竞争抑制法 ,在硝酸纤维素膜上进行不同抗原浓度、不同抗体抑制浓度的抗原、抗体反应。酶标记抗Fab抗体 (Fabspecific)与相应底物显色 ,通过抑制效果估测靶抗体的亲合力。结果 ①抗 HBsFab组对不同浓度的抗原皆为阳性且能显示浓度差。②鼠腹水单克隆抗 HBs在 1 0倍于人源抗 HBsFab范围内无抑制作用 ;多克隆羊抗 HBsAg在 1 0倍于人源抗 HBsFab时显示抑制效应 ,而在同倍和 1 / 1 0浓度时无抑制作用。结论 本研究建立的是一种简易、实用的方法 ,能够达到直观。

工程化人源性抗-HBs Fab抗体的制备、纯化和鉴定

用获得的表达人源性抗ＨＢｓＦａｂ片段的大肠杆菌，发酵表达该抗体的可溶Ｆａｂ片段。以羊抗人Ｆａｂ抗体偶联ＨｉＴｒａｐ柱，用Ａｃｔｉｓｅｐｅｌｕｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍ作为洗脱液，在ＦＰＬＣ上纯化。用ＳＤＳＰＡＧＥ及蛋白印迹法分析、鉴定，用固相放兔法检测其活性单位。蛋白印迹及ＥＬＩＳＡ显示转化菌株有抗ＨＢｓＦａｂ片段的表达。经ＦＰＬＣ纯化的抗体Ｆａｂ片段呈单一峰，与抗ＨＢｓ阳性血清相似。纯化后的抗体Ｆａｂ片段达到电泳纯，具有较高的活性。

工程化人源性抗-HBs Fab片段抗原结合位点的研究

取自己制备的纯化人源性抗HBs Fab 片段。用表达的PreS, PreS1, PreS2 蛋白及合成的PreS1 (2147aa)27 肽检测其抗原结合位点。结果显示该Fab 片段在非还原状态下分子量约为54kD, 在还原状态下分解为大小两个片段, 大片段为Fab的Fd 链, 分子量约为28kD; 小片段为Fab 的κ链, 分子量约为26kD。该Fab 片段与PreS及PreS1 蛋白呈现结合反应, 说明其抗原结合位点位于HBsAg 的PreS1