抗-PP1P^(k)的血清学特性探究及P血型相关文献分析

目的本研究旨在深入了解抗-PP1P^(k)的血清学特性,探索小p血型孕妇顽固性流产的可能性治疗方法。方法通过使用鸽子蛋清、人血浆中和法;2-巯基乙醇试剂破坏IgM抗体;添加补体成分等方法对抗-PP1P^(k)进行探究。在不同处理条件、不同介质、不同温度下测定抗-PP1P^(k)的效价,研究人血清对抗-PP1P^(k)及其致敏补体能力的中和作用。结果所采用抗-PP1P^(k)在盐水和柱凝集中的效价分别为4和8,低温会使抗-PP1P^(k)效价增高,2-巯基乙醇破坏会明显降低其效价。鸽子蛋清可以部分中和抗-PP1P^(k)。人血浆同样可以降低抗-PP1P^(k)的效价,其中和能力高于鸽子蛋清,且中和能力存在个体差异。结论抗-PP1P^(k)是1种IgM和IgG并存、冷性、可以激活补体的混合抗体。人血浆可以有效降低抗-PP1P^(k)效价以及激活补体的能力,输注中和能力高的血浆有望成为治疗p表型孕妇习惯性流产的新方法。

用p[Tj(a-)]外周血淋巴细胞建立抗-PP1P^(k)杂交瘤细胞株

目的建立分泌抗-PP1P^(k)(又称抗-Tj^(a))的淋巴母细胞样细胞系(lymphoblastoid cell line,LCL)和单克隆杂交瘤细胞株。方法无菌条件下常规方法制备p[Tj(a-)]血型献血者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),用EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)转化单个核细胞中的B淋巴细胞,使其增殖形成B淋巴母细胞样细胞克隆。用菠萝酶处理的正常AB型和O型红细胞以及p[Tj(a-)]红细胞筛选培养上清,通过显微吸引分离技术获得分泌特异性抗-PP1P^(k)的LCL,与SHM-D33骨髓瘤细胞进行融合。异源杂交瘤细胞经次黄嘌呤(H)-氨基蝶呤(A)-胸腺嘧啶(T)-脱氧胞嘧啶核苷(D)-毒毛旋花苷(O)即HOTD培养基选择性培养、抗体筛选以及有限稀释亚克隆,建立分泌特异性抗体的单克隆杂交瘤细胞株。结果从O型p[Tj(a-)]献血者外周血B淋巴细胞EBV转化细胞培养上清中,初筛得到与正常红细胞全部凝集,与p[Tj(a-)]红细胞不凝集的单个淋巴母细胞样克隆5E1-E5,初步鉴定培养上清具有抗-PP1P^(k)特异性。随后利用杂交瘤技术,将5E1-E5细胞与SHM-D33骨髓瘤细胞进行融合,建立了持续稳定分泌IgM抗-PP1P^(k)的单克隆杂交瘤细胞株。结论本研究通过EBV转化和杂交瘤技术建立了分泌抗-PP1P^(k)的人单克隆细胞株,这项工作使大规模筛选稀有p[Tj(a-)]血型成为可能,对我国稀有血型库的建设具有重要意义。

抗-PP_1P^k抗体引起血型鉴定正反定型不符1例

病人，女，23岁，福建某山区人。2014年1月2日来我院生殖医学中心做产前检查。ABO和Rh血型检测（手工法），发现患者ABO血型鉴定正反定型结果不一致，正定性B型，反定型O型，RhD阳性。考虑到患者有两次流产病史，高度怀疑其血清中含有ABO血型系统以外的高效价抗体。

抗P1抗体干扰ABO血型鉴定1例

P1PK血型系统是Landsteiner等在动物试验时意外发现的第3个红细胞血型系统[1],包括P1、PK、NOR这三个抗原[2]。临床上根据与P1抗体是否凝集将红细胞分为P1及P2两型[3]。不同人种P1抗原频率差异很大,白种人约有80%为P1抗原阳性,亚洲人阳性率约为30%。P1抗原在淋巴细胞,粒细胞和单核细胞上都有表达,同时还存在于鸽蛋蛋清、包虫囊液中[4]。在P2型人中通常存在抗P1抗体,人体中的抗P1抗体一般是IgM冷抗体,一般不出现凝集或溶血反应,无明显临床意义[5]。近期笔者在工作中发现1例由抗P1抗体引起患者血型正反定型不符的案例。现报道如下。

罕见IgG抗PP1P^(K)致新生儿溶血病1例

新生儿溶血病(hemolytic disease of the new born,HDN)主要是指母婴血型不合引起的同种免疫性溶血病。临床上以ABO血型不合引起的HDN最为常见,其次为Rh和MNS两个血型系统[1-2]。抗-PP1P^(K)能引起严重的溶血性输血反应、早期习惯性流产和HDN[3-5],具有十分重要的临床意义。抗-PP1P^(K)属于高频抗原抗体,在中国人群中非常罕见,由此导致的HDN更为罕见。本文报道1例由罕见抗-PP1PKIgG引起的HDN,对产科、儿科医生进一步认识罕见HDN及其诊治具有一定的临床指导意义。

中国拉祜族PP1PK血型频率调查

目的 了解中国拉祜族人群中P1PK血型和GLOB血型表现频率,掌握拉祜族人群遗传现状。掌握该类血型表现型频率可为患者临床输血安全提供数据支撑,为孕妇提供妊娠建议及用血指导。方法 随机抽取中国拉祜族人群无关个体,进行P1PK、P血型血清学鉴定及基因测序分析,分析P1PK血型和GLOB血型表现频率。结果 从300名拉祜族人群中检出6例抗-PP1Pk(原抗-Tja,以下均称抗-PP1Pk)反应阴性血型,鉴定为罕见的P1-PK-P-血型(原称Tja-血型或p血型,以下均称为p血型)。拉祜族人群P1PK、GLOB血型系统中p血型表型频率为2.0%(6/300)。结论 拉祜族人群p血型表型频率明显高于欧州(5.8人/每百万人)和中国香港地区(1人/每百万人),存在显蓍的民族特异性和地域种族差异性。

P1PK血型不合引起胎死宫内的罕见病例研究1例

目的分析1例胎死宫内患者血型血清学及分子生物学特点,明确患者血型及不规则抗体类型。方法采用血清学方法对患者的ABO、P1PK血型及不规则抗体进行鉴定;对编码P1PK抗原形成关键酶的α1,4-半乳糖基转移酶基因(α1,4-galactosyltransferase gene,A4GALT)进行测序,分析DNA序列,确定突变位点。结果血清学实验证实患者为P1PK血型系统的p表型,患者血清中存在抗-PP1PK;测序结果显示,患者的A4GALT编码区出现304-305insG突变。结论患者为P1PK血型系统的p表型,其A4GALT基因突变类型为304-305insG,患者体内的抗-PP1PK可能为其胎死宫内的原因。

P1P^K血型不合引起习惯性流产的血清学及分子生物学研究1例

目的对1例疑为P1PK血型不合引起习惯性流产患者进行血清学及分子生物学研究,明确患者血型及抗体特异性,阐述其分子遗传机制。方法采用血清学方法鉴定患者及3个家系成员ABO、P1PK血型及血清中意外抗体;PCR扩增编码P1P^k的α1,4-半乳糖基转移酶基因(α1,4-galactosyltransferase gene,A4GALT)第3外显子编码区序列,测序分析DNA序列,并做家系调查。结果血清学试验证实患者及其姐姐均为P1PK血型系统的p表型,患者血清中存在抗-PP1PK(抗-Tja)抗体,测序结果显示患者及其姐姐均在第3外显子出现903C>G(CCC>CCG)的等位基因突变。结论患者为罕见的p表型,由P1PK血型不合导致血清中产生的抗-PP1PK抗体引起患者习惯性流产,A4GALT基因第3外显子的903C>G突变可能是患者p表型形成的分子基础。

罕见p血型引起习惯性流产1例

病人，女，23岁，2012年7月首次怀孕，怀孕17周后，经检查出现胎儿死胎；2013年3月第2次怀孕，怀孕15周后，经检查再次出现胎儿死胎；2013年10月第3次怀孕，即本次怀孕，并于2014年1月2日来我院生殖医学中心做产前检查，发现胎儿有出现死胎的可能而入院作进一步检查。

罕见p表型的血清学鉴定及家系调查--附1例彝族孕妇p表型的报告

目的对罕见p表型彝族孕妇标本进行血清学鉴定及家系调查分析。方法采用血清学方法对34例家系成员标本进行p表型鉴定。结果先证者血清与抗筛细胞和谱细胞反应均呈阳性、反应强度一致,且直抗和自身对照均呈阴性;先证者为P1PK血型系统中的罕见p表型,血清中含有IgM和IgG性质的抗-PP1PK抗体;家系调查发现先证者哥哥也是p表型,其他家系成员均为正常P1或P2表型。结论在1个彝族家系中发现罕见p表型2例,血清中均含有抗-PP1PK高频抗原抗体。

血清学和分子生物学鉴定罕见p表型——附1例报告

目的鉴定并分析P1P^k血型系统p表型的血清学特征和血型基因变异机制。方法对1例献血者血液样本作血清学及DNA序列分析:采用盐水介质试管法完成ABO、RhD、P1P^k血型鉴定、直接抗球蛋白试验;采用盐水介质试管法、间接抗球蛋白法及微柱凝胶法完成不规则抗体筛查、抗体鉴定及抗体效价测定试验;采用聚合酶链式反应直接测序法(PCR-SBT)进一步对先证者基因组DNA作P1P^k血型相关的A4GALT基因PCR扩增和DNA序列分析。结果先证者血清学检测:O型、RhD阳性;血清中检出抗-PP1P^k(抗-Tj^a),IgM室温效价及IgG效价为64和128;血清学鉴定试验:确认为罕见的p表型。DNA测序:先证者A4GALT基因编码区存在c.559G>C及c.903C>G纯合突变。结论先证者体内存在IgM和IgG混合性质的高效价抗-PP1P^k,A4GALT基因c.559G>C突变(p.Gly187Arg变异)可能是其形成p表型及产生抗-PP1P^k抗体的分子基础。

一例p表型的血清学分析

目的分析患者血型血清学特点,明确患者血型及血型抗体特异性,为患者寻找配合型血液。方法采用血型血清学方法进行红细胞ABO、p血型鉴定;采用盐水法、微柱凝胶法、Liss-IAT法进行不规则抗体筛查和抗体特异性鉴定。结果患者血型为B型,p表型,血清中检出抗-PP1PK。结论患者为罕见p表型,血清中含有抗-PP1PK。

中国彝族人群p表型家系分析及新A4GALT等位基因鉴定

目的研究一个彝族家系P1Pk血型系统中罕见p表型的分子遗传机制。方法对34例家系成员样本进行血型血清学鉴定;红细胞稀有血型基因分型采用荧光定量PCR法;同时采用Sanger测序法分析α1,4-半乳糖基转移酶(α-1,4-galactosyltransferase,A4GALT)基因和β1,3-N乙酰半乳糖胺转移酶(β-1,3-N-acetylgalactosyltransferase,B3GALNT1)基因的多态性。结果先证者及其哥哥均为罕见的p表型,血清中均含有能与所有非p表型红细胞凝集并致其溶血的抗-PP1P~K抗体,其他家系成员为正常的P1或P2表型。基因测序发现,34例彝族家系成员中有2例A4GALT基因编码区存在456-457insACACCCC(Bank IT:MG812384)纯合突变,6例456-457insACACCCC杂合突变,7例109A>G和987G>A杂合突变,3例IVS+228C>T杂合突变;所有家系成员B3GALNT1序列均与参考序列一致。456-457insACACCCC突变导致开放阅读框移码,并提前形成终止密码子,产生无效等位基因。结论在一个彝族家系中发现2例p表型,并首次鉴定A4GALT新等位基因456-457insACACCCC,是p表型的分子遗传基础。

p血型引起交叉配血不合一例分析

细胞的抗体，该试验是输血前相容性试验中防止发生错误的最后一道“安全线”，严格的交叉配血需能够检出ABO不相容及 ABO系统之外的有临床意义的抗体，主要为 IgG类抗体。

中国拉祜族p血型个体血清学和分子生物学研究及其家系分析

目的了解拉祜族p血型个体及其家系成员的血清学及分子生物学遗传特性。方法采集之前已发现拉祜族6例p血型的家系成员血液样本,用试管法进行ABO、Rh、P1PK血型系统血型血清学鉴定、PCR测序分析A 4GALT基因编码区序列。结果6例p血型来自5个家庭中共计39例家系成员中检出12例p血型个体(含6例先证者),其中B型7例、O型2例、A型1例、AB型1例、1例未检ABO血型。11例p血型个体血浆中均检出抗-PP1Pk抗体,而1例仅采集指血,未检测意外抗体。对其中23例采集静脉血的家系成员进行A4GALT基因编码区序列测序,11例测序结果显示A4GALT第3外显子c.559G>C纯合突变(含6例已发现先证者),为p血型,5例为c.559G/C突变杂合子,7例测序与参考系列一致。结论A 4GALT基因c.559G>C突变可能是拉祜族人群形成p血型的分子基础。

p表型个体的血清学特点和分子机制研究1例

目的分析1例p表型个体的血清学特征和分子机制。方法选取2021年5月在嘉兴市中心血站进行血型鉴定的1例p表型个体为研究对象。用血型血清学方法鉴定其ABO、RhD、P1PK血型和意外抗体。采用PCR-直接测序法(PCR-SBT)对编码P1和PK抗原的α1,4-半乳糖基转移酶基因(A4GALT)的编码区进行测序分析。结果该个体的血型为A型、RhD阳性、P1PK系统为罕见的p表型,血清中存在抗-PP1Pk。测序结果显示其A4GALT基因编码区存在c.343A>T纯合变异。结论A4GALT基因c.343A>T纯合变异很可能导致了p表型个体。

同期胰肾联合移植12例报告——德国埃森大学的经验

目的总结同期胰肾联合移植(SPK)术的治疗效果和经验.方法自2002年1月至2003年9月,以SPK术治疗胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)合并终末期肾病(ESRD)患者12例.每例受者接受来自同一供者的胰腺和肾脏,移植肾以经典方法植入左侧盆腔,胰腺植于右下腹.1例移植胰腺静脉与受者门静脉系统吻合,11例与体静脉系统吻合.胰腺外分泌引流方法为:3例移植物十二指肠段与受者十二指肠吻合,9例与空肠上段吻合.术前应用甲泼尼龙及抗胸腺细胞球蛋白作为免疫诱导,术后以他克莫司、霉酚酸酯和泼尼松三联抗排斥药物维持.结果术后平均随访时间23个月,受者、移植胰腺和移植肾的存活率分别为100%、91.7%和91.7%.1例再次行SPK术的受者,术后出现了超急性排斥反应,且未能逆转,于术后13 d切除移植物;其余11例首次行SPK术的受者中,3例(28.3%)出现急性排斥,均获成功纠治.2例受者术后移植肾功能延迟恢复,行过渡性透析.11例首次行SPK术的移植胰腺术后立即发挥了功能,分别于术后1～5 d内停用胰岛素.结论同期胰肾联合移植是胰岛素依赖型糖尿病合并终末期肾病患者的一种安全而有效的治疗方法.

新等位基因A4GALT纯合变异致罕见p血型

先证者女,33岁,孕妇(孕4产1),前3次均为孕3月左右自然流产,无输血和移植史,第4次孕期临床诊断先兆流产,于2023年6月28日在东莞市中医院妇产科拟行剖宫产,术前备血,进行交叉配血试验时发现该先证者血浆中有无法确定特异性的意外抗体,无法找到合适的供者红细胞。血样本遂送至东莞市中心血站输血研究室,本实验室对该先证者采用血型血清学鉴定其红细胞血型表型证实为罕见的p血型,意外抗体特异性鉴定为抗-PP1Pk,先证者基因测序发现为新等位基因A4GALT*(c.100G>A+c.418428delins)纯合子,推测其引起多肽链p.Val34Ile和p.Gln140Trpfs*73改变,并导致α1,4-半乳糖基转移酶失活。同时在家系成员中发现另一个新等位基因A4GALT*c.100G>A,经预测该变异引起的单独p.Val34Ile改变并不影响蛋白功能和酶活性。