海南文昌清澜港红树林真菌抗B16肿瘤细胞活性菌株的筛选

从海南文昌清澜港红树林采集78份植物组织和土壤样品。对样品进行真菌分离,共分离得到真菌608株,采用目测法对其体外抗肿瘤细胞活性进行检测,发现81株红树林真菌对小鼠黑色素瘤B16细胞有不同程度的抑制作用,占总分离菌株的13.32%。结果表明,从红树植物杯萼海桑中分离得到真菌菌株的数量最多,而从红树植物银叶树分离得到的抗肿瘤细胞活性菌株数量最多。

海洋动物共附生微生物抗B16肿瘤细胞活性菌株的筛选

目的分离具有小鼠黑色素瘤B16细胞毒活性海洋微生物。方法通过M1培养基、Gause培养基、Martin培养基分离单菌落,利用黄豆粉培养基发酵,目测法测定发酵液活性,利用SAS软件对结果统计分析。结果分离获得634株海洋微生物,筛选到活性菌株56株,活性菌株所占的比率为8.83%。结论从寄居蟹、毛螺、苔藓虫、三角涡虫、水螅、海绵分离筛选到的总菌数明显的高于其他动物,而从海葵、贻贝、文蛤、江瑶、海鞘、管虫、螃蟹分离到的活性菌株数高于其他动物。采样地点与分离到的微生物类别有显著相关性,各地点样品分离到的放线菌、细菌和真菌数占该地区分离到的菌株总数的比率最大的的地点依次是新村渔排、古城岭红树林和南湾港渔排;细菌、放线菌、真菌等不同微生物种类与活性菌株比率有显著相关性,细菌的活性菌株比率最高。

青蒿琥酯纳米胶束制备及其体内药动学、抗肿瘤活性研究

目的制备青蒿琥酯纳米胶束,并考察体内药动学和抗肿瘤活性。方法以聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-聚组氨酸(mPEG-PLA-PHis)为载体制备纳米胶束,单因素试验结合Box-Behnken响应面法优化处方,测定包封率、载药量、沉降率、粒径、Zeta电位、体外释药。12只H_(22)荷瘤小鼠随机分为2组,分别尾静脉注射给予青蒿琥酯注射液和青蒿琥酯纳米胶束(1 mg/kg),于不同时间点采血,HPLC法测定青蒿琥酯血药浓度,计算主要药动学参数。36只H_(22)肝癌荷瘤小鼠随机分为6组,即模型组(生理盐水)、阳性组(20 mg/kg环磷酰胺)、青蒿琥酯注射液组(30 mg/kg)及青蒿琥酯纳米胶束低、中、高剂量组(10、20、30 mg/kg),末次给药3 d后记录体质量和瘤重,计算抑瘤率。结果最佳处方为mPEG-PLA-PHis与青蒿琥酯比例10.18∶1,青蒿琥酯质量浓度0.48 mg/mL,水化时间0.96 h,包封率、载药量、沉降率、粒径、Zeta电位分别为(94.27±1.26)%、(8.26±0.18)%、(4.19±0.20)%、(65.14±4.96)nm、-(17.64±1.06)mV。纳米胶束在弱酸性介质中的累积释放度高于在弱碱性介质中,具有pH敏感性。与注射液比较,纳米胶束t_(1/2)、MRT延长(P<0.01),CL降低(P<0.01),AUC_(0~t)升高(P<0.01);与模型组比较,青蒿琥酯纳米胶束不同剂量组小鼠体质量无明显变化(P>0.05),瘤重下降(P<0.05,P<0.01),以中剂量组更明显,抑瘤率达55.40%。结论青蒿琥酯纳米胶束包封率较高,体内抗肿瘤活性较强。

低HMGB1含量的肿瘤细胞裂解物增强树突状细胞的抗肺癌作用

目的探讨低含量高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的肿瘤细胞裂解物(TCL)对树突状细胞抗肺癌作用的影响。方法反复冻融的方法制备Lewis肺癌细胞TCL。Western blot检测TCL中HMGB1蛋白的表达情况。用30 nmol/L甘草酸(GA)抑制Lewis肺癌细胞中HMGB1的表达,进而制备低含量HMGB1的TCL(LH-TCL)。用未处理的Lewis肺癌细胞制备正常含量HMGB1的TCL(NH-TCL)。分为不同剂量NH-TCL负载DC组、LH-TCL负载DC组及PBS对照组,用流式细胞术检测体外诱导的小鼠树突状细胞(DC)表面CD11b、CD11c、CD86表达或细胞凋亡,用酶联免疫吸附试验检测DC细胞IL-12分泌情况。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,用流式细胞术检测小鼠脾细胞表面CD69的表达情况,酶联免疫吸附试验检测小鼠脾细胞TNF-β的分泌。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,并设5∶1、10∶1、20∶1三个效靶比进行体外杀伤实验,采用CCK8法检测小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞的活性。分为未活化DC组、NH-TCL活化的DC组、LH-TCL活化的DC组及PBS对照组,通过体内抑瘤实验,评估DC过继免疫细胞疗法抑制小鼠皮下移植瘤生长的效果。结果GA作用后的Lewis肺癌细胞制备的TCL中,HMGB1的含量显著降低(P<0.05)。与NH-TCL相比,LH-TCL具有更好的减少DC凋亡的能力(P<0.001),并促进DC表面CD86的表达和IL-12的分泌,而负载LH-TCL的DC也能更好地激活脾淋巴细胞并诱导更强的抗肿瘤免疫作用(P<0.01)。在体外,负载LH-TCL的DC激活脾淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的杀伤活性显著提高(P<0.01);在实验动物体内,免疫负载LH-TCL的DC可明显抑制肿瘤组织生长(P<0.05)。结论用LH-TCL负载DC,可以增强DC诱导的抗肿瘤免疫作用,提高DC过继免疫细胞治疗的疗效,为该免疫治疗方法的改进提供了一个新的途径。

鸡血藤萃取部位的抗肿瘤活性筛选

目的分别萃取鸡血藤的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水溶剂4个萃取部位来研究鸡血藤的抗肿瘤活性。方法对鸡血藤进行提取,得到鸡血藤乙醇提取物后分别经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水溶剂进行萃取、浓缩后得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水溶剂4个部位浸膏,用CCK-8法检测这4个不同极性萃取部位对3种肿瘤细胞株人胃癌(SGC-7901)、人乳腺癌(MCF-7)、人肝癌(BEL-7404)体外生长的抑制作用,然后计算其半数抑制浓度(IC_(50))值。结果4个萃取物(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水溶剂)对3种肿瘤细胞株的体外生长均有抑制作用,其中正丁醇萃取部位对3种肿瘤细胞的抗肿瘤活性最好,得到正丁醇萃取部位对人胃癌(SGC-7901)、人乳腺癌(MCF-7)、人肝癌(BEL-7404)细胞株的IC_(50)值分别为0.08、0.29、0.21 mg/ml。结论鸡血藤乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水溶剂萃取部位均具有一定的抗肿瘤作用,其中正丁醇萃取部位抗肿瘤活性最好,抗肿瘤效果要远远大于石油醚、乙酸乙酯和水溶剂3个部位。

基于薯蓣皂苷元催化合成N-甲基吲哚孕烯醇酮化合物及其抗肿瘤活性

利用N-甲基吲哚对类固醇药物的前驱体16-脱氢孕烯醇酮乙酸酯(16-DPA)的D环C16位进行修饰,采用ZrCl_4-乙酸乙酯廉价催化体系,合成了16个3β-乙酰氧基-16α-3'-吲哚孕烯醇酮化合物和6个3β-羟基-16α-3'-吲哚孕烯醇酮衍生物.该方法具有收率高、立体选择性好和底物适应性强等优点.通过噻唑蓝(MTT)比色法测试了22个化合物对三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的抗肿瘤活性.初步测试结果表明, 3β-乙酰氧基-16α-3'-吲哚孕烯醇酮化合物6h和6i对MDA-MB-231癌细胞有较好的抑制活性,其半数抑制浓度(IC_(50))分别为18.07和23.22μmol/L;而化合物7a~7f均对MDA-MB-231癌细胞有较好的抑制活性,其中化合物7e的抗肿瘤活性最好,其IC_(50)为12.50μmol/L.目标化合物为药物筛选提供了一定的参考.

海南近海30株抗B16细胞活性放线菌的16SrDNA多样性分析

从海南近海 ,包括文昌红树林、海口红树林以及洋浦港等地采集样品 ,经苯酚、SDS、加热等预处理 ,稀释涂布麦芽汁_酵母膏琼脂 (YE)、淀粉酪素琼脂 (SC)、葡萄糖天冬氨酸琼脂 (GA) ,或者直接将样品稀释涂布加有重铬酸钾的高氏一号琼脂 (Gause)和麦芽汁_酵母膏琼脂等进行平板分离。共获得 35 4株放线菌 ,其中有 76株具有不同程度的抗B16细胞毒活性。比较发现加热预处理法和重铬酸钾选择培养法对于广泛分离筛选抗肿瘤活性放线菌不失为一种快速、简便、行之有效的方法。YE、Gause培养基无论在分离到的放线菌总数 ,还是细胞毒活性菌株的比例上都显示了良好的效果。对 30株具有较强抗B16细胞活性的链霉菌进行了扩增性 16SrDNA限制性酶切片段多样性分析 (16SARDRA) ,表明这 30株链霉菌之间有较大的基因差异性。 0 5 0 6 4 2、0 6 0 386和 0 6 0 5 2 4等 3株菌序列分析进一步证明这 3株菌属于链霉菌属 ,其中菌株 0 5 0 6 4 2与其亲缘关系最近的Streptomycescattleya的相似性仅为 95 % ,因此可能是一个新种。

构建稳定转化的BmN细胞表达人白介素-28A及表达产物的体外抗肿瘤活性

为建立能表达人白介素-28A(hIL-28A)基因的稳定转化家蚕卵巢细胞(BmN)系,构建了重组表达载体pIZT/V5-His-hIL-28A并转染BmN细胞,采用终浓度为300～400μg/mL的博莱霉素(zeocin)筛选2个月后,获得了稳定转化BmN细胞系。SDS-PAGE和Western blotting检测显示在稳定转化BmN细胞中表达的重组hIL-28A蛋白分子质量约为26kD;用ELISA试剂盒测定hIL-28A的表达水平约为2.035×10-5ng/个细胞。用噻唑蓝法(MTT法)检测hIL-28A的体外抗肿瘤活性,结果显示其对肺癌细胞A549、急性早幼粒细胞白血病细胞HL60、肝癌细胞BEL-7402和乳腺癌细胞M231的半数抑制浓度(IC50)分别为3.21、2.84、6.29和9.32ng/mL。研究结果表明hIL-28A可在稳定转化BmN细胞中表达,表达产物具有体外抗肿瘤活性。

多肿瘤抑制基因p16、RB与喉癌组织细胞增生活性的关系

目的 :研究PCNA免疫染色和AgNOR计数在鉴别喉部良恶性病变和判断喉癌的生物学行为中的意义 ,及其与p16、RB基因表达的关系。方法:采用PCNALI和AgNOR计数判定喉癌细胞增殖活性 ,评价喉癌的生物学行为,利用免疫组化方法分析54例喉癌组织中p16、pRb蛋白的表达在肿瘤恶性进展及转化中的作用,及其相互关系。结果 :随肿瘤恶性程度的增高 ,其组织细胞增殖活性越强。p16的抑癌作用有赖于RB的存在 ,在RB存在的情况下p16可以抑制肿瘤细胞的增殖。结论:与p16、RB、cyclinD1/CDK4、6 及转录因子在内的调节通路与细胞增殖周期有关。p16。

暗褐网柄牛肝菌化学成分及其抗肿瘤细胞毒活性

目的研究暗褐网柄牛肝菌Phlebopus portentosus的化学成分及其抗肿瘤细胞毒活性。方法暗褐网柄牛肝菌95%乙醇提取物采用硅胶、ODS、半制备HPLC行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法测定其对人癌细胞株HepG2、A549、HeLa、MCF-7、MDA-MB-231的细胞毒活性。结果从中分离得到4个化合物,分别鉴定为phlesterol A(1)、过氧化麦角甾醇(2)、(22 E,24R)-7,22-二烯-3β,5α,6β-麦角三醇(3)、麦角甾-7,22 E-二烯-3-酮(4)。化合物1对HeLa、MCF-7细胞的抑制活性较强,IC 50值为6.45~8.38μmol/L,对MDA-MB-231细胞具有一定的细胞毒活性,IC 50值为14.84μmol/L。结论化合物1为新化合物,其对妇科肿瘤细胞有一定的抑制活性。

抗CD3/抗B细胞肿瘤的双功能小抗体的抗肿瘤活性研究

为评价已研制的抗CD3/抗B细胞肿瘤 (CD2 0 + )双功能小抗体的生物学活性 ,采用多种实验方法在体内外对其进行研究。结果表明 :该型双功能小抗体能同时与Ju rkat和Daudi细胞结合 ,并交联两种细胞形成玫瑰花环。它与Jurkat(CD3+ )和Daudi细胞 (CD2 0 + )的结合的亲和常数Ka分别为 3.2× 10 8M- 1和 8.9× 10 8M- 1。在体外该抗体能激活并介导T细胞杀伤Daudi细胞。裸鼠体内分布实验结果表明 :该型抗体可在移植瘤部位富集 ;在人B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型中 ,联合人的PBMC和IL 2 ,该抗体可以杀灭人B淋巴瘤细胞 ,明显延长荷瘤裸鼠的生存时间。

灵芝水煎剂对肝癌腹水瘤细胞系Hca－F25／CL－16A3的抗肿瘤作用的实验研究1．灵芝水煎剂对带瘤鼠血清和瘤组织中GST及γ－GT活性的影响

本文研究了灵芝水煎剂对肝癌腹水瘤细胞系Ｈｃａ－Ｆ２５／ＣＬ－１６Ａ３的抗肿瘤作用。结果表明，经灵芝水煎剂灌胃２０天的小鼠，实体瘤重量比对照组为轻；癌组织及血清中肿瘤标志酶谷胱甘肽－Ｓ－转移酶活性及γ－谷氨酰转肽酶活性均较对照组显著降低。

海洋来源真菌Eutypella sp. F0219细胞松弛素类代谢产物及其抗肿瘤活性

综合运用正、反相硅胶柱层析、薄层层析以及半制备HPLC等多种色谱方法对海洋真菌Eutypella sp.F0219的乙酸乙酯提取物进行系统分离纯化,获得8个细胞松弛素类化合物(1~8)。经一维核磁共振波谱数据、质谱以及X-射线单晶衍射方法等确定这些化合物分别为phenochalasin A (1),scoparasin D (2),phenochalasin B (3),cytochalasin Z26(4),cytochalasin Z24(5),[12]-cytochalasin (6),cytochalasin Z25(7)和cytochalasin Z27(8)。通过CCK-8实验评价上述化合物在非小细胞肺癌NCI-H1299细胞的增殖影响,筛选结果表明化合物2表现出中等的抗肿瘤活性,IC50值为(5.1±0.25)μmol/L。本研究首次报道了化合物phenochalasin A (1)的X-射线单晶结构。

西达苯胺联合R-DHAP方案治疗复发/难治性弥漫大B细胞淋巴瘤的临床疗效

【目的】探讨西达苯胺联合R-DHAP方案治疗复发/难治性弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的临床疗效。【方法】78例复发/难治性DLBCL患者,随机分为观察组和对照组。对照组采用R-DHAP方案治疗,观察组采用西达苯胺联合R-DHAP方案治疗。比较两组肿瘤患者体力状况(ECOG)评分,临床疗效,血清血管内皮生长因子(VEGF)、β2-微球蛋白(β2-MG)水平,药物不良反应以及无进展生存时间。【结果】治疗3个疗程后,两组ECOG评分较治疗前均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);观察组的客观缓解率高于对照组(P<0.05);两组血清VEGF、β2-MG水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组和对照组患者中位无进展生存时间分别为20.60个月和15.18个月,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】西达苯胺联合R-DHAP方案治疗复发/难治性DLBCL患者能够改善临床症状,疗效确切,同时可以降低血清VEGF、β2-MG水平,延长患者生存时间,且安全可靠。

黑木耳多糖对B16黑色瘤细胞抗肿瘤作用研究

目的探讨黑木耳多糖对B16黑色瘤细胞抗肿瘤作用及相关可能的机制。方法以B16细胞为研究对象,检测不同浓度的黑木耳多糖对B16细胞的增殖、伤痕愈合率的影响;建立黑色素瘤模型,检测黑木耳多糖对荷瘤小鼠体质量、肿瘤大小的影响,利用RT-PCR技术检测其对肿瘤组织Bax、P53、Caspase-3mRNA表达的影响。结果黑木耳多糖在体外抑制细胞伤口愈合,对B16细胞的抑制率呈剂量依赖性增长,24 h、48 h、72 h的半数抑制浓度分别是80.99、43.18、70.82μg/mL。在体内,与模型组比较,灌胃黑木耳多糖能明显抑制肿瘤生长,且与环磷酰胺联合治疗,其抑制作用增加;黑木耳多糖可促进肿瘤组织中Bax、P53、Caspase-3 mRNA的表达。结论黑木耳多糖在体内、外都具有明显的抗肿瘤作用,这可能与其能促进肿瘤细胞凋亡有关。

红树林放线菌的分离及其抗菌和抗肿瘤细胞活性

从福建漳州红树林保护区采集土壤样品中分离到163株放线菌,用5种指示菌(Bacillus subtilis,Staphylococ-cus aureus,Escherichia coli,Candida albicans and Rhizoctonia solani)测定了它们的抗菌活性,结果表明,其中42·3%的放线菌发酵液具有单一或多种抗菌活性.同时测定了它们的发酵液对肝癌细胞BEL7402、肺癌细胞A549和白血病细胞HL60三种肿瘤细胞的毒性,其中37·4%的放线菌发酵液具有单一或多种抗肿瘤细胞毒活性.对这163株放线菌的16SrDNA序列分析表明,它们分属于链霉菌属(89%)、小单孢菌属(6·1%)、糖单孢菌属(0·6%)、马杜拉放线菌属(3·7%)和拟诺卡氏菌属(0·6%).其中,3株链霉菌与其亲缘关系最近的菌种的16SrDNA相似性低于97%,可能是3个新种.

僧帽牡蛎天然活性多肽BPO-1抗人胃腺癌BGC-823细胞活性研究

运用细胞生物学、生物化学等手段 ,观察鉴定分离提取的牡蛎天然活性肽BPO 1对人胃腺癌细胞的生物学效应 .实验结果表明 ,BPO 1能有效抑制人胃腺癌BGC 82 3细胞增殖活动 ,细胞生长受到抑制 ,分裂指数下降 .细胞周期检测出现凋亡峰 .光镜观察显示经BPO 1处理后的BGC 82 3细胞失去原有的恶性表型 ,表现出明显不同于对照组细胞 .

多羟基甾醇的合成及其结构与抗肿瘤细胞活性关系研究

报道了 6个具有类似结构的多羟基甾醇的合成和它们的抗肿瘤细胞活性 .发现此类化合物的细胞毒性与其分子中双键存在与否有着密切关系 .当甾核或支链中双键被饱和时 ,其细胞毒性均明显降低 .甾醇(5 )和 (8)对胃癌 (MGC)、宫颈癌 (HEL A)细胞的生长具有一定的抑制作用 .

转染人核糖核酸酶抑制因子基因对B16黑色瘤细胞及肿瘤转移的影响(英文)

人核糖核酸酶抑制因子 (humanribonucleaseinhibitor ,RI)是一种细胞质中分子质量为 5 0ku的酸性糖蛋白 .RI能抑制核糖核酸酶A (RNaseA)的活性 ,RNaseA与血管生成因子 (angiogenin ,Ang)的氨基酸有着高度保守的同源序列 .Ang是RNaseA超家族的一员 ,RI通过与RNaseA和Ang的紧密结合而抑制其活性 .血管生成及新血管的形成 ,是肿瘤发生和转移的必要条件 .所以抗血管生成将是一种很有希望的对抑制肿瘤生长和转移的有效方法 .实验显示RI能有效地抑制肿瘤诱导血管的生成 .RI由含有许多亮氨酸重复序列的多肽组成 .含有这样重复序列的 10 0多种蛋白质显示了广泛的功能 ,包括细胞周期调节 ,DNA修复 ,对细胞外基质相互作用以及抑制酶活性等 .RI被认为是胚胎发育 ,创伤愈合及肿瘤发生中新血管形成的一种调节因子 .RI定位于染色体的 11p15 5 ,与ras基因邻近 ,在肿瘤病人中经常存在染色体 11p15 5部位的变异和异常 .RI可能与细胞的生长和分化有关 ,因此 ,RI可能还具有尚未知的生物学作用 .为了进一步了解RI的潜在功能以及探讨RI与肿瘤侵润、转移的关系 ,将人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通过逆转录包装细胞PA317,并转染到B16小鼠黑色瘤细胞中 ,用转染空载体和未转染的B16细胞作为对照 .通过PCR ,RT PCR 。

紫甘薯汁抗肿瘤活性及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究

目的:研究紫甘薯汁的抗肿瘤活性及其诱导肝癌细胞HepG2凋亡机制。方法:采用Alamar Blue、倒置显微镜、荧光显微镜、扫描电镜、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR和Western blotting法检测不同体积分数的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞的增殖抑制作用及诱导人肝癌细胞HepG2凋亡机制研究。结果:与对照组相比,体积分数5%和10%的紫甘薯汁对SGC-7901、HO-8910和HepG2细胞具有抑制作用,呈体积分数依赖性;作用HepG2细胞48h后,能观察到细胞皱缩和凋亡小体以及凋亡细胞典型的梯状DNA条带。RT-PCR和Western blotting法检测结果显示,紫甘薯汁可以诱导HepG2细胞中Fas、FADD、Caspase-3、Caspase-8和p53 mRNA表达水平上调和蛋白表达量增加,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性裂解片段明显增高且Caspase-3酶活性显著提高。结论:紫甘薯汁体外对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过细胞表面死亡受体途径诱导HepG2细胞凋亡,同时p53在此凋亡过程中也起着重要的作用。