抗C3d单抗制备及免疫金层析法的建立

目的 研制抗C3d单抗 ,建立免疫金层析法检测血浆补体片段C3d ,判断补体活化情况。方法 用菊糖 C3b作抗原 ,免疫Balb/c小鼠 ,并制备杂交瘤 ,以羊抗C3包被酶标反应板并结合C3d为检测板 ,筛选分泌抗C3d单抗的杂交瘤。利用proteinG柱亲和层析提取抗C3d单抗IgG和C3d结合物 ,进行SDS PAGE电泳 ,鉴定单抗的特异性。将抗C3d单抗标以胶体金 ,制备免疫金层析测试条。通过在免疫金中加未标金的抗C3d单抗 (游离单抗 )来调整试纸条的灵敏度 ,并测定C3d。结果 SDS PAGE电泳图上 ,出现IgG的重链、轻链、及C3d 3个条带 ;金标记抗C3d单抗的试条 (Ⅰ )测C3d的灵敏度在 6～ 10ng/ml,当加入 0 .1μg/ml游离抗C3d单抗 (Ⅱ )后 ,灵敏度为 10～ 15ng/ml。利用两种试条灵敏度的不同 ,对轻、中重型肝炎检测 ,结果轻型肝炎患者在纸条Ⅰ上阳性率为 83 3% (2 5 / 30 ) ,纸条Ⅱ全为阴性 ,中重型肝炎者在纸条Ⅰ、Ⅱ的阳性率为 10 0 % (30 / 30 )。结论 用本试验建立的免疫金层析法测定肝炎患者血浆C3d水平 ,可判断补体活化程度 ,辅助乙型肝炎轻、重分型。