抗人CA19-9单克隆抗体的制备和鉴定及化学发光检测体系的建立

目的制备抗人糖抗原19-9（CA19-9）单克隆抗体（mAb）,建立双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。方法 CA19-9免疫小鼠后,通过细胞融合技术,获得抗CA19-9的mAb。鉴定其抗体的纯度、效价、特异性和配对,建立双抗体夹心化学发光体系。在包被缓冲液、包被浓度及加样模式上优化化学发光体系,对该体系进行准确度、最低检测限、线性、重复性评估以及血清样本的检测。结果获得4株名称为#1-1、#2-1、#3-1和#4-1的mAb。抗体效价均大于10^-8,与CA125、CA15-3、CA72-4均无交叉反应。其中#3-1 mAb与#2-1-HRP建立的双抗体夹心体系经优化后,其检测范围为0~1 000 U/mL;最低检测限为2.0 U/mL;线性相关系数为0.9999。与罗氏试剂检测结果对比,Kappa系数大于0.75;相关系数大于0.9。结论成功制备了抗人CA19-9 mAb,建立了双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。

用单克隆抗体检测肿瘤标记CA19-9的临床研究

用单克隆抗体(MeAb)技术在医学各个领域的广泛应用，使肿瘤的免疫学诊断和病情监测出现新的飞跃，同时也发现一些新的肿瘤标记。本文综述用McAb检测近年来发现的肿瘤标记CA19-9的临床研究。

抗CEA和CA19-9的单链抗体在HEK293细胞中的融合表达及亲和力鉴定

目的在HEK293细胞中高效表达抗CEA scFv和抗CA19-9 scFv两种单链抗体的Fc融合蛋白(anti-CEA scFv-Fc和anti-CA19-9 scFv-Fc),并测定两种单链抗体亲和力。方法从GenBank中获取两种scFv基因序列;经优化后合成,并与pET32a(+)构成原核表达载体anti-CEA scFv/pET32a(+)和anti-CA19-9 scFv/pET32a(+),在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;两种scFv经PCR扩增技术删除末端终止序列,利用重叠区基因扩增法在anti-CEA scFv上游加入人IL-2信号肽,分别与含人IgG Fc段基因的pTT5载体(Fc/pTT5)构成真核表达载体(anti-CEA scFv(-t)-Fc/pTT5、IL2-antiCEA scFv(-t)-Fc/pTT5和anti-CA19-9 scFv(-t)-Fc/pTT5);使用脂质体转染法,将3个重组质粒转入HEK293细胞中进行表达;产物经rProtein-A FF亲和层析纯化,竞争性细胞ELISA和Western blot检测。结果免疫印迹显示,3个scFv-Fc融合蛋白均在HEK293细胞中表达;竞争结合实验表明,antiCEA scFv-Fc和anti-CA19-9 scFv-Fc的抗体浓度分别为8.2 nmol/L和6.0 nmol/L。结论 anti-CEA scFv和anti-CA19-9scFv能在HEK293细胞内表达;虽然表达量较低,但纯化后表达产物能够识别肿瘤细胞表面抗原CEA和CA19-9。

1例体检者CA19-9水平假性异常升高的处理及分析

糖类抗原(CA)19-9是消化系统肿瘤标志物之一,健康人的消化系统如胰腺、胆管等部位会分泌少量的CA19-9[1]。患胰腺癌、肝癌、胃癌及结直肠癌等各种消化系统恶性肿瘤患者血清中会分泌大量的CA19-9[2]。虽然尚无资料支持CA19-9检测可用于恶性肿瘤的筛查,但是其在消化道肿瘤的诊断、治疗、疾病进展监测、预后判断方面还是有较大应用价值[3]。因此,保证CA19-9检测结果的准确性和一致性非常重要。目前,CA19-9常用的检测方法为电化学发光免疫分析法,该法具有灵敏度高和特异度高的特点,且通量大,适合大样本量的检测。目前,临床上常用的有罗氏、雅培、西门子、贝克曼等全自动化学发光仪,其基本原理还是基于抗原与抗体的反应。在抗体与抗原反应过程中会受到内源性干扰物质的影响,从而导致临床结果出现假性结果,这些干扰物质包括类风湿因子(RF)、人抗动物抗体(HAAA)、异嗜性抗体等,导致临床做出错误的诊断和治疗。本研究以1例查体过程中CA19-9水平异常升高的患者为研究对象,分析CA19-9水平异常升高的原因及采取的处理措施,现将处理过程报道如下。

用于糖链抗原CA19-9实时动态活检的免疫双光子荧光标记试剂盒

采用双光子荧光标记探针LP制备了免疫双光子荧光抗体LP-Ab,以特异性识别肿瘤标志物CA19-9(Ag)形成抗原-抗体复合物(LP-Ab·Ag),基于双光子诱导荧光机制用近红外激光(740 nm)激发LP-Ab·Ag,利用LP-Ab·Ag的双光子荧光实现了CA19-9的高清晰度、高灵敏度及高分辨率的量化检测和实时动态成像,并制成用于糖链抗原CA19-9检测的简单便捷的双光子荧光标记试剂盒.

幽门螺杆菌抗体与胃癌患者血清CEA、CA19-9联检的临床价值

目的评估血清CEA、CA19-9与幽门螺杆菌抗体联合检测对胃癌诊断的临床意义。方法用电化学发光法(ECL)检测62例胃癌患者和77例胃良性疾病患者血清CEA、CA19-9、幽门螺杆菌抗体,并对其检测指标进行比较。结果胃癌患者血清CEA和CA19-9水平、幽门螺杆菌抗体阳性率均明显高于正常人(P<0.01～0.05);分化较差组、浆膜浸润组及有淋巴转移组均明显高于分化较好组、无浆膜浸润组及无淋巴转移组(P<0.01);且联合检测血清CEA、CA19-9、幽门螺杆菌抗体可以将阳性率提高到93.54%。结论联合检测血清CEA、CA19-9、幽门螺杆菌抗体对胃癌早期诊断有较大的临床意义。

血清IgG4、CA19-9水平对IgG4相关性胆管炎的诊断及鉴别诊断价值

目的:探讨血清IgG4、CA19-9及自身抗体对IgG4相关性胆管炎(IgG4-SC)的诊断及鉴别价值。方法:选取41例IgG4-SC患者、162例非IgG4-SC患者及40例健康对照血清样本,采用免疫比浊法和直接化学发光法检测IgG4和CA19-9水平、采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、抗平滑肌抗体(SMA)和抗线粒体抗体(AMA),并进行结果统计分析。结果:(1)IgG4-SC患者的ANA、ANCA、SMA和AMA阳性率分别为41.46%、7.32%、0和2.44%。其中,ANA阳性率与正常对照组、ANCA阳性率与原发性硬化性胆管炎(PSC)组、SMA和AMA阳性率与非IgG4-SC组均存在差异,且具有非常显著统计学意义(P<0.01)。(2)血清IgG4(n=36/41)和CA19-9(n=21/41)升高情况与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.979和0.646,P<0.05。结论:血清IgG4和CA19-9水平的高表达和自身抗体检测,对于IgG4-SC的鉴别诊断具有准确性和重要临床价值。

纳米金修饰电流型CA19-9免疫传感器的制备及应用

通过固定辣根过氧化酶(HRP)标记CA19-9抗体在纳米金修饰的碳糊电极制备了CA19-9安培免疫传感器.该免疫传感器在含有CA19-9抗原的磷酸盐缓冲溶液中培育后,溶液中CA19-9抗原分子和HRP标记CA19-9抗体分子免疫结合导致了传感器电流的降低.在优化的实验条件下,样品中CA19-9浓度在2～30 U/mL范围内与电流降低成线性关系,方法的检出限为1.4 U/mL.该免疫传感器表现出较好的稳定性、准确性和重现性,为临床免疫分析提供了一种快速便捷方法.

肿瘤标志物CA-50和CA19-9 IRMA在原发性肝癌诊断中的应用

糖类抗原CA-50和CA19-9是较为理想的肝瘤标志物,对于多种癌肿的诊断监测都有临床应用价值。我们自1991年5月～1992年7月对41例原发性肝癌（简称肝癌）患者进行CA-50和CA19-9免疫放射分析（IRMA）,并联合检测其它肿瘤标志物,探讨对肝癌的诊断价值,现报道如下。材料和方法一、肝癌组:符合肝癌诊断标准的住院患者41例（男33例,女8例）,年龄自22～74岁,平均55.71岁。病程自10天～14个月,平均2.46个月。单纯型6例、硬化型35例。Ⅰ期1例,Ⅱ期5例,Ⅲ期35例。本组病例均检测了AFP、CA50、CA19-9、SF和β2-m。部分病例检测了CA125。二、肝硬化组:作为对照组,均为同期住院患者,男13例,女5例。年龄自35岁～72岁,平均56.47岁。检测项目同肝癌组。三、方法:AFP放免药盒由中国原子能科学研究所提供;CA50单克隆抗体IRMA药盒由中国医学科学院肿瘤研究所提供;CA19-9和CA125单克隆抗体IRMA药盒由法国CIS公司提供;SF放免药盒由北方免疫试剂研究所提供;CEA放免药盒由上海生物制品研究所提供;β2-m放免药盒由华清生化技术研究所提供。以上均按说明书由专人进行严格操作。测定仪器为GC-911放射免疫γ计数器。

胃粘膜癌前病变患者胃液中CEA、CA19-9、CA72-4检测的临床意义

目的:通过对胃粘膜癌前病变患者胃液CEA、CA19-9、CA72-4的单检及联合检测,探讨其临床意义。方法:采用双抗体夹心法对胃液中CEA、CA19-9、CA72-4进行检测,并对胃粘膜癌前病变患者进行分组,包括萎缩性胃炎伴非典型增生共90例:分轻(B)、中(C)、重度(D)三组,分别各30例,萎缩性胃炎伴肠上皮化生30例(E组),萎缩性胃炎伴肠上皮化生及非典型增生30例(F组),与对照组(A组):慢性浅表性胃炎或正常胃粘膜30例进行对比分析,结果进行统计学处理。结果:萎缩性胃炎伴非典型增生,萎缩性胃炎伴肠上皮化生,萎缩性胃炎伴肠上皮化生及非典型增生各组与浅表性胃炎或正常胃粘膜对照组比较有显著性差异。CEA、CA19-9、CA72-4三种肿瘤标志物单检及联合检测的灵敏度、特异度分别为:CEA:56.32%,61.28%,CA19-9:63.28%,63.20%,CA72-4:69.27%70.32%,CEA+CA19-9:69.90%,70.92%,CEA+CA72-4:72.56%,73.36%,CA19-9+CA72-4:72.98%,73.32%,CEA+CA19-9+CA72-4:75.26%,76.38%。结论:胃液中CEA、CA19-9、CA72-4单检或联合检测均能反映出胃粘膜癌前病变的程度,提示对胃的癌前疾病进行追踪随诊,对早期发现胃癌有重要的临床意义。

糖抗原CA19-9 RIA及150例临床分析

CA19-9是一种肿瘤相关蛋白,含有定名为鼠IgG型单克隆抗体所识别的抗原,抗原决定因子是一组含涎五糖类以单涎神经节苷脂的一部分存在于胃肠和胰腺癌患者的组织内,并被这些患者循环中高分子量粘液所表达。故CA-19-9对消化道肿瘤有较高的敏感性。

用单克隆抗体115 D_8和DF_3检测胸腔渗出液中CA15-3的诊断价值

胸腔渗掖的常见病是肿瘤和结核，常用CGA、CA19-9和ADA进行鉴别。胸腔渗液中CA 15-3的水平尚无报道，为了帮助鉴别胸腔渗蔽是肿瘤性或结核性，作者测定了胸腔渗液中CA 15-3的水平。

低剂量螺旋CT联合肺癌自身抗体、肿瘤标志物CA12-5、CA19-9在肺癌诊断中的临床应用价值

目的:探讨低剂量螺旋CT联合肺癌自身抗体、肿瘤标志物糖类抗原(CA)12-5、CA19-9在肺癌诊断中的临床应用价值。方法:选择2019年1月至2021年12月在我院经低剂量螺旋CT检查发现肺部病灶的患者86例,以病理诊断结果分为肺癌组49例、肺部良性病变组37例,另选取同期健康体检志愿者30例作为对照组。观察肺癌的低剂量螺旋CT影像学特征,检测比较各组血清肺癌自身抗体[p53、SOX区域Y相关HMG蛋白家族成员2 (SOX2)、G抗原7 (GAGE7)、RNA解旋酶自身抗体4-5(GBU4-5)]及CA12-5、CA19-9水平,并对比阳性表达情况,分析低剂量螺旋CT联合肺癌自身抗体、CA12-5、CA19-9对肺癌的诊断价值。结果:49例肺癌患者经低剂量螺旋CT检查共发现51个病灶,其中实性结节或部分实性结节30个,非实性结节21个;病灶平均直径(10.92±1.17)mm,<5 mm者9个,5~10 mm者17个,≥10 mm者25个;11个病灶伴有钙化,16个病灶有毛刺征,20个病灶有分叶征;有6例表现为空洞,空洞通常壁薄厚不均匀,呈中心性或偏心性。肺癌组血清p53、SOX2、GAGE7、GBU4-5及CA12-5、CA19-9水平均明显高于肺部良性病变组和对照组,肺部良性病变组上述指标水平均明显高于对照组(P<0.05)。肺癌组CA12-5、CA19-9、4项肺癌自身抗体单独及联合的阳性率均明显高于肺部良性病变组和对照组(P<0.05),肺部良性病变组CA12-5、CA19-9及4项肺癌自身抗体联合的阳性率高于对照组(P<0.05)。低剂量螺旋CT联合4项肺癌自身抗体、CA12-5、CA19-9对肺癌诊断的灵敏度为91.84%,特异度为97.30%,准确度为94.19%。结论:低剂量螺旋CT联合肺癌自身抗体、肿瘤标志物CA12-5、CA19-9在肺癌诊断中有较好的临床应用价值。

胃癌病人中血清CA72-4和CA19-9值的比较以及与复发的相关性

癌胚抗原(CEA)检测胃癌的特异性不高,CA19-9的敏感性变异很大,可在15%～72%之间,联合测定CEA和CA19-9也不提高其敏感性.近期发现一种新的肿瘤相关糖蛋白抗原TAG-72,可在胃肠道腺癌病人的血清中检出,现用的药盒用CA72-4分析,应用单克隆抗体B72.3和CC49的双重决定因子免疫分析法.初步报告CA72-4是胃癌的可靠肿瘤标记物,并可补充CA19-9测定的效果.取32例经内镜和病理证实的胃良性病变和52例经手术切除的胃腺癌病人进行测定,两组病人的中位值年龄分别为36岁和61岁.胃癌病人中,属TNMⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期分别占7、5、11和29例.结果凡CA72-4和CA19-9的血清值分别超过6.7kU/L和22kU/L者列为阳性结果.在32例良性胃病变中,CA72-4和CA19-9的阳性率分别为0和28%;而在52例胃癌病人中,则分别为42%和46%,这两种肿瘤标记物具有相似的敏感性,但CA19-9的特异性较低.进一步分析示良性病变者的CA19-9血清值变异较CA72-4为大.在Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期胃癌中,CA72-4的阳性率分别达25%和48%,CA19-9的阳性率分别为17%和55%,

肝脏结节性淋巴组织增生一例

患者女,64岁.自觉乏力两天到我院就诊.B超提示右肝内低回声占位,以“右肝肿瘤”收住入院.实验室检查：甲胎蛋白（AFP）、CA-125、CA19-9、CA72-4、CEA、铁蛋白指标正常,乙肝核心抗体（Hbc-Ab）、E抗体（HBE-Ab）、E抗原（H-BE-Ag）、表面抗原（HBS-Ag）阴性,乙肝表面抗体（HBS-Ab）阳性.丙肝抗体、戊肝抗体、HIV抗体、梅毒螺旋体抗体、血清抗弓形虫及各类病毒抗体均阴性.肝肾功能正常.

肺组织胞浆菌病影像表现一例

患者 男,67岁,因间断发热1个半月,咳嗽1个月余于2013年2月20日入院.病史：1个半月前于墨西哥山洞被蚊虫叮咬后出现畏寒、恶心、呕吐,3d后出现发热（最高体温38℃）.实验室检查：全血细胞分析白细胞、红细胞、血小板计数及中性粒细胞百分比均无异常,单核细胞百分比0.15（参考值0.03～ 0.13）,C反应蛋白13.9 mg/L（参考值＜7.9 mg/L）,甲胎蛋白、癌胚抗原、CA125、CA19-9、CA 15-3阴性,真菌-D-葡聚糖：97 ng/L（参考值＜80 ng/L）,曲霉菌半乳甘露聚糖0.19（参考值＜0.50）,自身抗体谱：抗内皮细胞抗体（＋）,抗核抗体、抗ENA抗体、抗线粒体抗体阴性.

肝脏未分化肉瘤一例报告

患者女,59岁.因反复右上腹隐痛1个月入院.体检：腹软,无压痛、反跳痛,Murphy征阴性.实验室检查：血常规、ALT、AST、AFP、CEA、CA19-9、癌抗原（CA）125无异常.乙肝两对半：HBsAg（-）,HBeAg（-）,抗-HBs（＋）,抗-HBe（＋）,抗-HBc（＋）.上腹部CT检查示：肝右叶囊实性占位,考虑胆管细胞囊腺瘤与其他占位病变鉴别,恶变待排（图1）.临床初步诊断：肝囊腺瘤.

自身免疫性胰腺炎合并原发性胆汁性肝硬化一例

患者男,65岁,因皮肤黄染伴尿色加深12d于2012年6月26日入院.体格检查：皮肤巩膜重度黄染,右上腹轻压痛,无反跳痛,肝脾肋下未触及.实验室检查：ALT 79 U/L,AST 51 U/L,碱性磷酸酶540 U/L,GGT 197 U/L,TBil393 μ mol/L,DBil 283.7 μ mol/L,免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）A 1 820 mg/L,IgG 31 800 mg/L,IgM 3 440 mg/L,IgG44.36 g/L,抗核抗体1∶320（核膜型十细胞质颗粒型）,抗线粒体抗体（＋）,抗线粒体M2抗体（＋）;肝炎病毒及血清CA19-9、CA125、AFP、CEA无异常.胰腺MRI示自身免疫性胰腺炎,胆总管下段狭窄（图1）.