注射抗CD20单克隆抗体后发生荨麻疹性血管炎一例

患者,女,61岁。全身皮肤泛发红斑1天。起病前7天因“红斑型天疱疮”应用抗CD20单克隆抗体治疗。用药后躯干、四肢泛发水肿性红斑。结合组织病理诊断为荨麻疹性血管炎。给予甲泼尼龙、氯雷他定等治疗,4天后患者皮疹逐渐消退,原有红斑部位可见色素沉着斑。随访8个月,皮疹未复发。

抗CCL20单克隆抗体对血清淀粉样蛋白A相关的结节病中促炎性细胞因子的抑制作用

目的探讨抗CCL20单克隆抗体是否可抑制高水平血清淀粉样蛋白A(SAA)相关的结节病外周血单个核细胞(PBMC)中促炎性细胞因子的表达。方法提取健康人和结节病患者的PBMC,并进行分组。除空白对照组(正常人PBMC)和结节病PBMC对照组(患者PBMC)外,另将结节病组PBMC中分别加入SAA、SAA+抗CCL20单克隆抗体、SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082或地塞米松,经培养48 h后收集各组细胞,分别作为PBMC+SAA刺激组、PBMC+SAA+NF-κB抑制剂BAY11-7082组、PBMC+SAA+抗CCL20单抗组、PBMC+地塞米松干预组,使用ELISA分别测定各组细胞上清液中细胞因子IL-17A、IL-23、IL-6、CCL20和TGF-β1的表达,使用RT-PCR测定各组细胞中CCR6、IL-17、ROR-γt和Foxp3的mRNA表达水平,使用Western blot检测各组细胞中p-NF-κB和NF-κB蛋白的表达水平。结果PBMC+SAA+抗CCL20单抗组与PBMC+SAA组相比,细胞上清液中的IL-17A、IL-23和IL-6的水平显著降低(P<0.01),而TGF-β1的含量显著升高(P<0.01)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组相较于PBMC+SAA组,细胞中CCR6、IL-17A、ROR-γtmRNA水平显著降低(P<0.01),而Foxp3 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC+SAA+抗CCL20单抗组中p-NF-κB蛋白表达水平较PBMC+SAA组明显降低(P<0.01)。结论抗CCL20单克隆抗体可抑制高水平SAA相关的结节病PBMC中促炎性细胞因子的表达。

抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性测定方法的建立

目的建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法。方法以WIL2-S细胞系作为靶细胞,以Jurkat-NF-κB-Luc转基因细胞系作为效应细胞,对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化,构建可用于测定抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性的报告基因法。依据ICHQ2的指导原则对方法进行全面验证,包括专属性、准确性、精密度、线性、稳定性。结果成功建立了具有量效关系的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法的抗体起始浓度为500 ng/mL,稀释倍数为1∶4,共计8个浓度点(500,125,31.25,7.81,1.95,0.49,0.12,0.031 ng/mL),效靶比为4∶1,诱导时间为4 h。本方法具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样品经测定,相对效价分别为59.63%±4.57%,75.54%±4.05%,99.98%±9.63%,123.90%±5.54%和142.51%±12.82%;对应的回收率分别为93.17%±7.15%,94.42%±5.06%,99.98%±9.63%,99.12%±4.43%以及91.21%±8.21%,CV分别为7.67%,5.35%,9.63%,4.47%和9.00%,上述结果的变异系数CV值均<10%;实测效价与理论效价线性回归分析相关系数R^(2)=0.9823,线性良好;本研究建立的方法可以敏感检测出抗体结构变化对生物活性的影响,对双特异性抗体的稳定性检测有一定的指导意义。结论利用转基因细胞法成功建立了抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性。

^(131)I标记抗CD20单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的放射免疫显像

目的探讨131I-anti-CD20McAb经瘤内注射后在荷人Burkitt’s淋巴瘤细胞系Raji细胞移植瘤裸鼠体内的放射免疫显像。方法131I标记物的标记采用IODO-GEN碘化标记;注射标记物后第1、3、7、15天将荷瘤裸鼠SPECT显像后活杀,定标器测量并计算瘤、血等12种器官或组织的%ID/g值,根据MIRD委员会推荐的公式计算肿瘤累积吸收剂量。结果131I-anti-CD20McAb瘤内注射组的SPECT显像结果优于腹腔注射组和131I-IgG瘤内注射组,该组肿瘤%ID/g值在给药后第1、3和7天分别为后两组的1.4～17倍和1.7～3.7倍,肿瘤累及吸收剂量在给药后第3、7和15天分别为后两组的1.5～2.5倍和6.0～12.6倍。结论131I-anti-CD20McAb经瘤内途径给药可以使肿瘤获得最高的放射性药物摄取率,为下一步运用该途径进行放射免疫治疗提供了实验依据。

^(131)Ⅰ标记抗CD20单克隆抗体不同给药途径对荷瘤裸鼠的放射免疫治疗实验

目的探讨1^(131)Ⅰ-Rituximab经瘤内注射对荷人Burkitts淋巴瘤细胞系Raji细胞移植瘤裸鼠放射免疫治疗疗效。方法 ^(131)Ⅰ标记物的标记采用IODO-GEN碘化标记;按预定治疗方案分别注入含有131I标记物,开始治疗前及治疗后每天用游标卡尺测量肿瘤长、短径,计算肿瘤体积,依公式计算肿瘤生长抑制率。结果 ^(131)Ⅰ-Rituximab瘤内注射组肿瘤抑制率显著高于腹腔注射组、^(131)Ⅰ-IgG瘤内注射组以及对照细胞组(P<0.05);^(131)Ⅰ-Rituximab不同剂量瘤内注射,小剂量组肿瘤生长抑制率低于大剂量组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ^(131)Ⅰ-Rituximab经瘤内途径给药可以获得更好的放射免疫治疗效果,为下一步临床应用奠定了基础。

^(131)I标记抗CD20单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内动态分布的实验研究

目的:探讨131I-anti-CD20 McAb经瘤内注射后在荷人Burkitts淋巴瘤细胞系Raji细胞移植瘤裸鼠体内的动态分布。方法:131I标记物的标记采用IODO-GEN碘化标记;注射标记物后第1、3、7、15天将荷瘤裸鼠活杀,定标器测量并计算瘤组织、血液等12种器官或组织的瘤/非瘤(T/NT)比值以及%ID/g值(每克组织摄入注入量的百分数)。结果:131I-anti-CD20 McAb瘤内注射组血液及其他组织器官T/NT比值在给药后第1、3和7天均显著高于腹腔注射组和131I-IgG瘤内注射组(P<0.05);该组肿瘤%ID/g值在给药后第1、3和7天分别为后两组的1.4~17倍和1.7~3.7倍;各非瘤组织和器官的%ID/g值低于后两组。结论:131I-anti-CD20 McAb经瘤内途径给药可以使肿瘤获得最高的放射性药物摄取率和最高的瘤/非瘤组织放射性药物摄取比,为下一步运用该途径进行放射免疫治疗提供了实验依据。

抗CD20单克隆抗体治疗难治性自身免疫性溶血性贫血

本研究初步观察抗CD20单克隆抗体利妥昔(rituximab)用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的疗效和安全性。对1例用糖皮质激素、脾切除治疗无效的AIHA患者,采用利妥昔单克隆抗体,375mg/m2,每周1次,共4次,观察溶血症状的改变并监测血红蛋白(Hb)水平及其它检验指标,同时观察有无不良反应发生。结果表明,首次治疗后11天乳酸脱氢酶(LDH)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(IBIL)逐渐下降,第45天降至正常范围;首剂治疗25天后Hb水平比治疗之前升高到95-100g/L以上。治疗后已4月余,患者仍处于缓解状态。治疗过程中未发生明显不良反应。结论:抗CD20单克隆抗体利妥昔用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血是有效而且安全的。

抗CD20单克隆抗体在儿童原发性难治性肾病综合征的应用新进展

原发性难治性肾病综合征(idiopathic refractory nephritic syndrome,IRNS)一直是临床治疗的棘手问题。抗CD20单克隆抗体是一种诱导B细胞溶解和凋亡的新型免疫抑制剂,其出现极大地改善了IRNS患者的预后。近年来,多数病例分析和临床试验对抗CD20单克隆抗体治疗儿童IRNS的有效性进行了报道。本文就抗CD20单克隆抗体的作用机制、在IRNS的临床应用、不良反应及研究中存在的问题进行综述。

抗CD25单克隆抗体对CD^4+CD25^(high)调节性T细胞的影响

目的评价抗CD25单克隆抗体对活体肾移植受者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的影响。方法观察14例活体肾移植受者外周血CD4+CD25highT细胞百分比和FoxP3mRNA表达水平的变化,应用流式细胞仪FACSCalibur和CellQuest软件行双色流式细胞计数和结果分析,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对肾移植受者外周血单个核细胞(MNC)的FoxP3基因水平进行检测。结果在移植术后3d、13d,CD4+CD25highT细胞占CD4+比例显著升高;在移植后1个月内,CD4+CD25highT细胞比例升高约至原来的3倍。移植术后13d、17d、27d时外周血FoxP3mRNA表达明显高于移植术后3d。在肾移植术后的不同时间抗CD25单克隆抗体使用组受者的CD25+T细胞百分比明显低于对照组(未使用抗CD25单克隆抗体)。抗CD25单克隆抗体使用组与对照组两组间比较,术后3d、13d,抗CD25单克隆抗体组CD4+CD25highT细胞占CD4+的比例明显降低,术后3d对照组、抗CD25单克隆抗体使用组分别为1.24%±0.15%、2.25%±0.24%,P=0.00;术后13d为3.75%±0.38%、7.28%±0.51%,P=0.00。然而,术后17d、27d后,抗CD25单克隆抗体使用组的CD4+CD25highT恢复到对照组水平,两组间CD4+CD25highT细胞占CD4+的比例无统计学差异,即第17d为3.72%、0.26%、4.43%、0.44%,P=0.17,27d为9.00%±0.30%、8.31%±0.33%,P=0.16。在肾移植术后不同时间,受者外周血FoxP3mRNA表达水平在两组之间相似,无统计学差异,说明FoxP3mRNA表达水平并没有受到体内注射抗CD25单克隆抗体影响。结论抗CD25单克隆抗体的使用对活体肾移植受者外周血CD4+CD25high调节性T细胞在一定时间具有暂时性的影响,而FoxP3mRNA表达水平没有受到影响。

抗CD20单克隆抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的实验观察

目的:以人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型为基础,研究抗CD20单克隆抗体体内、体外活性,评价该抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的有效性。方法:体内实验:建立人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型。52只荷瘤鼠随机分为5组进行实验。用TUNEL法检测肿瘤凋亡,并绘制肿瘤体积曲线和裸鼠体质量曲线。体外实验:用CellTiter96 AQueous非同位素细胞增殖试验试剂盒检测抗CD20单克隆抗体、化疗和联合化疗对Raji细胞体外杀伤作用,并绘制剂量反应曲线。结果:体内实验:鼠抗人CD20单抗组及嵌合CD20抗体组均出现大量肿瘤细胞凋亡。联合治疗组疗效最佳,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。化疗组及联合治疗组体质量下降明显,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。体外实验:发现鼠抗人CD20单克隆抗体及嵌合型CD20抗体均可增加Raji细胞对化疗药物的细胞毒敏感性。结论:CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤具有明显的抑制作用,可以诱发大面积肿瘤细胞凋亡,能提高肿瘤对化疗药物的细胞毒敏感性,且较常规化疗毒副反应小。

抗人CD20单克隆抗体诱导Daudi细胞凋亡的功能研究

目的 观察由基因重组抗原制备的抗人CD2 0单克隆抗体 (CD2 0 McAb) 1- 2 8对B淋巴瘤细胞的促凋亡作用 ,并探讨其作用机理。方法 利用流式细胞术测定所获 1- 2 8单抗对标准CD2 0 FITC单抗的竞争抑制作用及对胞内游离钙的影响 ;通过电镜观察其诱导Daudi细胞凋亡后形态上的改变 ,免疫印迹实验显示Daudi细胞凋亡后功能上的变化。结果 1- 2 8能明显竞争标准CD2 0 FITC单抗与Daudi细胞表面CD2 0分子的结合。电镜结果证实了 1- 2 8能够促进Daudi细胞发生凋亡的结论 ;实验结果显示Daudi细胞与 1- 2 8作用后胞内游离钙浓度明显升高 (P <0 .0 5 ) ,细胞内Bcl 2蛋白和caspase酶原的表达量下降 ,而Bax蛋白和caspase酶原降解的活性产物表达增加。结论 1- 2 8能竞争结合Daudi细胞表面的CD2

全人源化靶向抗CD20单克隆抗体ofatumumab

通过查阅最新国际相关文献并加以对比分析,论述美国食品药品管理局(FDA)最新审批的新药全人源化靶向抗CD20单克隆抗体ofatumumab的临床研究、作用机制、药动学、不良反应及药物相互作用等。ofatumumab可用于氟达拉滨和阿仑珠单抗治疗无效的顽固性慢性淋巴细胞白血病,且特异性地杀灭B淋巴瘤细胞,而对其他正常组织无不良影响。应用过程中不良反应少且轻,对肾功损伤的患者不必调整剂量。ofatumumab具有广阔的临床应用前景。

两种重组抗CD20人源化单克隆抗体定量分析方法的比较及其在药代动力学研究中的应用

采用酶联免疫吸附分析（ELISA）与基于Wil2-S细胞的流式细胞术（FCA）两种方法对生物基质中的重组抗CD20人源化单克隆抗体（rh-anti-CD20zumab）进行定量分析,并对两种方法进行系统比较.方法学验证结果表明,两种方法均具有良好的特异性、精密度和准确度,但定量范围存在明显差异.ELISA法批内和批间精密度均小于19.5％,准确度为-18.2％～17.6％;FCA法批内和批间精密度均小于19.0％,准确度为-18.9％～ 18.4％.二者定量范围分别为0.04～5.0 mg/L和3.1～200 mg/L,ELISA法的灵敏度显著高于FCA法.利用两种方法测定猕猴静脉滴注rh-anti-CD20zumab后的血药浓度-时间变化并进行药代动力学（PK）分析.结果表明,在给定剂量下,通过两种方法获得的PK结果具有良好的一致性.FCA法是一种细胞表面抗原靶向性抗体类药物PK研究及药效动力学（PD）研究的快捷、理想的方法.

新型抗CD20单克隆抗体奥妥珠单抗治疗非霍奇金淋巴瘤的护理实践

总结28例CD20(+)非霍奇金淋巴瘤患者行新型抗CD20单克隆抗体单药或联合化疗后的护理经验。护理要点为做好用药前准备,控制输注速度,加强输注过程中的护理;密切观察用药不良反应,尽早发现、正确处理。28例患者病情稳定,目前按照疗程规范治疗中。

抗人CD20单克隆抗体治疗B细胞淋巴瘤研究进展

近年来 ,对B细胞淋巴瘤的抗原靶向性治疗已取得了巨大进展 ,出现了一种新的非常有发展前景的治疗方法 ,即以B细胞分化抗原CD2 0为靶抗原的单克隆抗体 (McAb)疗法。CD2 0是非糖基化的跨膜磷酸蛋白 ,分子质量为 35kD ,表达在大多数成熟B细胞表面 ,分化为浆细胞后 ,CD2 0表达消失。CD2 0可能参与B细胞成熟与分化的调节 ,作为钙离子通道发挥某些生物学作用。更为重要的是 ,95 %以上的B细胞淋巴瘤表达CD2 0 ,且无显著内化及脱落。这些特点使其成为单克隆抗体疗法的理想靶抗原。临床试验结果表明 ,抗CD2 0单克隆抗体既可单独应用 ,亦可作为放射性同位素或细胞毒制剂的载体 ,其疗效显著 ,且使用安全 ,副反应小。许多研究报道已阐明了抗CD2 0单克隆抗体治疗B细胞淋巴瘤的几种可能的效应机制。目前 ,人们正致力于探索一些新的治疗策略以期提高这种疗法的特异性 ,减少其非特异性的毒副作用。

抗CD20单克隆抗体美罗华治疗B细胞淋巴瘤的研究进展

美罗华(Rituximab)是一种抗CD20嵌合型单克隆抗体。它可特异性地与B淋巴细胞表面CD20抗原结合,通过多种机制清除体内的B淋巴细胞。临床资料显示,美罗华治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤有效率高,毒副反应小,病人耐受良好,是一种有前途的抗肿瘤新药。