抗CD3和抗CD28单抗对淋巴细胞产生RANTES的影响

目的 探讨CD28共刺激通路活化对淋巴细胞产生RANTES的影响与意义,以及免疫抑制剂CsA对RANTES产生的抑制作用。方法 分离健康人外周静脉血中的淋巴细胞。实验分为4组:抗CD3mAb刺激组,抗CD28mAb刺激组,抗CD3mAb+抗CD28mAb共刺激组(CD28共刺激组),未加任何刺激作为对照组。PDTC和CsA以不同终浓度干预CD28共刺激组。采用ELISA方法测定培养上清中RANTES含量,流式细胞术检测淋巴细胞CD25和CCR5表达率。结果 培养48h后,CD28共刺激组RANTES产生显著增加(P<0.05);不同剂量PDTC和CsA对CD28共刺激后淋巴细胞产生RANTES均具有抑制作用;CD28共刺激后淋巴细胞CD25表达率显著增高(P<0.05),而CCR5表达率显著降低(P<0.05)。结论 CD28通路共刺激后淋巴细胞产生RNATES显著增加,这一效应受到NF-κB信号通路的调控。淋巴细胞产生RANTES及其对RANTES的反应均受到CD28共刺激信号调控。抑制淋巴细胞产生RANTES可能是CsA发挥作用的重要分子免疫学机制。

抗CD28单抗和IL-15对CIK增殖和杀肿瘤作用的研究

CIK是肿瘤过继性细胞免疫治疗中的免疫效应细胞。为使CIK在实验室里能被更有效地诱导增殖并赋予其更强的杀肿瘤效应,我们在CIK常规培养环境中加入抗CD28单抗和IL-15,探讨抗CD28单抗和IL-15对CIK增殖和杀肿瘤效应。取人外周血单个核细胞(PBMC),预先以常规方法诱导CIK,然后加入抗CD28单抗和IL-15与CIK共培养。用全自动五分类血液分析仪计数CIK增殖率;用流式细胞术测定CIK中粒酶B、穿孔素和CD107a等分子的表达率;用ELISA方法检测CIK分泌IL-10、IL-12、INF-γ和TNF-α水平;用乳酸脱氢酶释放法测定CIK对人肺癌细胞株(A549)、乳腺腺癌细胞株(MFC-7)和人黑素瘤细胞株(HME1)的杀伤活性。PBMC经常规CIK诱导培养以后再加入抗CD28单抗和IL-15与对照组比较,前者细胞增殖率明显增强(P<0.05);在CIK培养体系中加入抗CD28单抗和IL-15可促进颗粒酶B、穿孔素和CD107a等分子的表达率进一步增强(P<0.05);加入抗CD28单抗和IL-15,培养8d后CIK对A549、MFC-7和HME1细胞杀伤活性分别为82.2%、59.3%和70.6%,与对照组(分别为60.9%、49.6%和48.4%)相比差异有统计学意义(P<0.05);在培养体系中加入抗CD28单抗和IL-15,培养8d后其细胞因子IFN-γ、TNF-α分泌水平显著高于对照组(P<0.05),组间IL-10和IL-12的分泌量未见显著差异(P>0.05)。实验说明在CIK培养体系中加入抗CD28单抗和IL-15可增加CIK增殖率并提高其抗肿瘤效应。

抗CD28+B7.1单抗共刺激PBLs诱导肝癌细胞凋亡的蛋白激酶信号转导

目的研究 T淋巴细胞活化、增殖、介导肝癌细胞凋亡过程中其蛋白激酶 C(PKC)和酪氨酸蛋白激酶 (TPK)的活性变化。方法用抗 CD2 8+ B7.1(CD80 )单克隆抗体共刺激正常人外周血淋巴细胞 (PBL s)后作用于肝癌细胞 (BEL -740 2 )。结果激活的 T细胞中 PKC、TPK活性明显增强 ,并与肝癌细胞凋亡程度呈正相关。结论 PKC、TPK在 T细胞活化。

抗CD28+B7.1单抗共刺激T细胞诱导肝癌细胞凋亡的第二信使系统研究

目的 :探讨T淋巴细胞活化、增殖、诱导肝癌细胞凋亡过程中第二信使系统的调控机制。方法 :用CD2 8+B7 1(CD80 )单克隆抗体共刺激T淋巴细胞诱导肝癌细胞 (BLE 740 2 )凋亡 ,测定不同诱导时间T细胞内cAMP、cGMP和Ca2 + 的浓度改变及肝癌细胞凋亡情况。结果 :活化的T淋巴细胞中 ,cAMP浓度在初期短暂升高 ,继而快速下降 ,作用于肝癌细胞后逐步回升至 1～ 2倍 ,而细胞内cGMP的浓度急剧升高 6～ 7倍 ,Ca2 + 浓度也显著增加 2～ 3倍 ,且均在第 4天达最高值 ,与癌细胞的凋亡呈正相关。结论 :T淋巴细胞内第二信使系统cAMP、cGMP和Ca2 + 的水平与细胞的活化增殖、杀伤效应密切相关。

不同刺激物对细胞因子诱导的杀伤细胞分泌细胞因子的影响

目的:探讨抗CD3单抗联合不同浓度的抗CD28单抗对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞细胞因子分泌的影响。方法:取6例肿瘤患者的外周血,分离、诱导培养,获取CIK细胞。CIK细胞成熟后用1.0 mg/L抗CD3单抗分别联合0.5、1.0、2.5 mg/L抗CD28单抗进行活化,使用ELISA方法检测细胞因子IFN-γ、IL-10、IL-2、TNF-α的分泌水平,并用胞内细胞染色法检测CD3+CD8+T细胞中IFN-γ、穿孔素的表达水平。以50μg/L佛波酯联合750μg/L离子霉素共刺激的CIK细胞作对照。结果:抗CD3单抗联合不同浓度抗CD28单抗组CIK细胞IFN-γ、IL-10、IL-2、TNF-α分泌水平和胞内穿孔素表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:抗CD3单抗联合不同浓度抗CD28单抗共刺激对CIK细胞细胞因子的分泌无影响,临床上可选择1.0 mg/L抗CD3单抗联合0.5 mg/L抗CD28单抗活化淋巴细胞。

小鼠CTL体外非特异性扩增对其杀瘤活性的影响

目的 在体外用抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和白细胞介素 2 (IL 2 )扩增肿瘤特异性CTL ,为肿瘤过继治疗提供足够数量的、具有高度杀瘤活性的效应细胞。方法 采用两种方案培养肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞。 (1)抗CD3单抗刺激 48h后 ,加入抗CD3单抗和 2 0U mlrIL 2 (抗 CD3+IL 2组 ) ;(2 )抗CD3单抗和抗CD2 8单抗同时刺激 48h后 ,加入抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和 2 0U mlrIL 2 (抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组 )。分别检测 2组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果 抗 CD3+IL 2组细胞的3H TdR掺入量在第 6天、12天、2 0天分别为 2 2 12 6、5 42 6、2 0 72 ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组细胞的3H TdR掺入量在第 6天、12天、2 0天分别为 32 16 8、12 92 2、32 6 5 ,后者明显高于前者。在培养 12d时 ,抗 CD3+IL 2组细胞对FBL 3的最大杀伤活性为 6 6 .4% ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组细胞对FBL 3的最大杀伤活性为 77.8%。细胞表型FACS分析结果表明 ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组培养 12d后的细胞 90 %以上为Thy1.2 + 细胞 ,且CD2 5 + 细胞在抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组、抗 CD3+IL 2组分别为 2 3.0 0 %、8.15 %。结论 抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和低剂量IL 2同时非特异性刺激 ,可获得大量扩增的、具有高度杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。