抗CD38单克隆抗体:复发难治性系统性轻链型淀粉样变性患者的福音

系统性轻链(AL)型淀粉样变性是由异常单克隆免疫球蛋白轻链形成淀粉样蛋白,沉积于组织器官,进而造成组织结构损伤、器官功能障碍的系统性疾病[1]。从异常单克隆免疫球蛋白轻链的来源看,大部分都是浆细胞所产生,来源于淋巴细胞的仅占2%[2],故针对异常克隆性浆细胞的治疗是AL型淀粉样变性治疗的主要方式之一。目前,自体外周血干细胞移植(ASCT)和基于硼替佐米的化疗方案是初治AL型淀粉样变性的主要一线选择。联合硼替佐米于移植前诱导及移植后的巩固治疗,可使60%患者获得血液学完全缓解率[3],且取得完全缓解的患者中超过50%总生存期超过15年[4]。对于不适合移植的初治AL型淀粉样变性患者,硼替佐米联合环磷酰胺和地塞米松(CyBorD)的方案也有一定的疗效,在一项纳入915例患者的大型回顾性研究中[5],CyBorD方案的总体血液学反应率为65%,其中完全缓解率(CR)25%;非常好的部分缓解率(VGPR)24%,33%的患者获得心脏反应,15%的患者获得肾脏反应。

抗CD38单克隆抗体治疗系统性轻链型淀粉样变性

近年来轻链型淀粉样变性的治疗手段日益丰富。抗CD38单克隆抗体已成功应用于浆细胞疾病和多发性骨髓瘤的治疗,系列研究报道了其对轻链型淀粉样变性的疗效,本文拟简述该药治疗系统性轻链型淀粉样变性的临床应用进展。

注射抗CD20单克隆抗体后发生荨麻疹性血管炎一例

患者,女,61岁。全身皮肤泛发红斑1天。起病前7天因“红斑型天疱疮”应用抗CD20单克隆抗体治疗。用药后躯干、四肢泛发水肿性红斑。结合组织病理诊断为荨麻疹性血管炎。给予甲泼尼龙、氯雷他定等治疗,4天后患者皮疹逐渐消退,原有红斑部位可见色素沉着斑。随访8个月,皮疹未复发。

抗人CD38单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究

目的 研制抗人CD38抗原分子的单克隆抗体 ,进一步研究其生物学功能。方法 采用高表达CD38抗原的Daudi细胞免疫Balb c小鼠 ;取其脾细胞与SP2 0细胞融合 ;用间接免疫荧光法进行杂交瘤筛选 ;流式细胞术、免疫沉淀法与CD38分子原核表达产物的Western blot分析鉴定单克隆抗体的特异性。以MTT(四甲基偶氮唑盐 )法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能。结果 获得了一株抗人CD38分子的单克隆抗体 1C6 ,流式细胞术显示它具有CD38抗原特异的细胞反应谱 ,其识别的抗原分子质量为 4 5 0 0 0u。与CD38分子原核表达产物的Western blot分析表明 ,其可特异识别CD38分子胞外结构域。MTT法显示其可介导补体杀伤靶细胞。结论 成功制备了抗人CD38分子的单克隆抗体 ,并进行了初步的功能研究。

CD38单克隆抗体对输血相容性检测干扰及其应对方案的专家共识

随着肿瘤免疫靶点的不断发现及抗体研发技术的持续变革,抗体药物在临床上的应用越来越广泛。但有些靶点不仅在肿瘤细胞上表达,而且在红细胞上也有表达,故临床上针对相应靶点抗体的应用可能会对输血相容性检测产生干扰,导致配血困难或输血延迟。本共识总结了目前克服CD38单克隆抗体(简称CD38单抗)干扰输血相容性检测的方法,并经过对不同方法的优缺点分析后,推荐在中国患者人群中使用凝聚胺和巯基还原剂[二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)或2-巯基乙醇(2-mercaptoethanol,2-Me)]处理红细胞,作为解决CD38单抗干扰输血相容性检测的方法,以消除CD38单抗带来的输血问题,为临床医师和输血科技术人员提供相应输血前工作流程的解决方案。

抗-CD38单克隆抗体对输血前检测试验的干扰及其处理措施

目的探讨抗-CD38单克隆抗体对输血前检测实验的干扰及其处理措施。方法收集2名接受抗-CD38单克隆抗体治疗的多发性骨髓瘤患者血样,分别进行ABO和Rh血型抗原定型、直接抗人球蛋白实验、不规则抗体筛选和鉴定、交叉配血实验;将不规则抗体筛选用试剂红细胞、抗体鉴定谱细胞、交叉配血用的献血者红细胞、平行对照用的O型K(+)E(+)红细胞与0.2 mol/L的DTT按照红细胞:DTT为1∶4的比例进行混合后,放入37℃水浴箱水浴30 min;再用上述DTT处理后的红细胞分别对患者血浆进行不规则抗体筛选实验、抗体鉴定实验和交叉配血实验。结果2名患者的ABO和Rh血型均为O,CCDee;直接抗人球蛋白实验分别为阴性和阳性;未经DTT处理的抗体筛选红细胞、抗体鉴定细胞和献血者红细胞与患者血浆反应均呈阳性;DTT处理后的抗体筛选红细胞、抗体鉴定细胞和献血者红细胞与患者血浆反应均呈阴性;平行对照用的O型K(+)E(+)红细胞经DTT处理后转变为O型K(-)E(+)。结论抗-CD38单克隆抗体治疗多发性骨髓瘤,可干扰患者的血型血清学实验,用0.2 mol/L的DTT灭活红细胞表面的CD38抗原后,可以较好的去除这种干扰。

利用实验设计优化和建立抗CD38单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法

利用实验设计(design of experiment,DoE)方法建立抗CD38单抗(monoclonal antibody,mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,Daudi细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGlo^(TM)Lucifer‐ase Assay system)检测抗CD38单抗的ADCP生物学活性,并运用DoE方法进行实验参数优化。结果显示,抗CD38单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法经统计学实验设计对多个实验参数进行筛选和优化,确定抗体工作浓度为800~20.81 ng·mL^(-1),靶细胞和效应细胞的接种量分别为每孔7.5×10^(4)和2.5×10^(4)个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性;5个不同组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(59.97±4.74)%、(82.44±5.15)%、(110.69±11.71)%、(129.23±5.22)%和(162.15±3.66)%;回收率在103%~120%,RSD均小于11%,线性检测范围为50%~150%。本研究利用DoE设计成功筛选、优化和建立基于报告基因的抗CD38单抗ADCP生物学活性测定方法,该方法具有良好的专属性、重复性和准确性,可作为抗CD38单抗ADCP生物学活性的评价方法。

二巯基乙醇解决CD38单克隆抗体对输血前检测的干扰及疗效分析

多发性骨髓瘤是一种浆细胞异常增殖的恶性疾病,在很多国家是血液系统第2位常见恶性肿瘤,仅次于淋巴瘤[1]。随着新药出现及检测手段的提高,多发性骨髓瘤的诊断和治疗不断改进和完善。2019年7月,中国国家药品监督管理局批准达雷妥尤单抗(DARA)上市,该药是人源化抗CD38IgG1κ单克隆抗体,可以通过多种免疫介导的作用机制诱导肿瘤细胞的快速死亡。

抗CD38单克隆抗体对多发性骨髓瘤患者交叉配血干扰及输血疗效的影响

目的多发性骨髓瘤(MM)患者应用抗CD38单克隆抗体治疗,影响红细胞(RBC)交叉配血结果,评估经二硫苏糖醇(DTT)处理RBC后交叉配血的结果及输血疗效。方法对40例使用抗-CD38单克隆抗体治疗的MM患者血浆与经DTT处理后的供者RBC、抗筛细胞及自身细胞进行交叉配血,并对其输血前后实验室指标进行统计分析。结果40例患者输注RBC后血红蛋白、血细胞比容和RBC[(75.60±11.80)g/L,(22.39±3.53)%,(2.46±0.42)×10^(12)/L]比输血前[(66.60±10.47)g/L,(19.81±3.10)%,(2.15±0.38)×10^(12)/L]明显提高,差异有统计学意义(P<0.01);患者总胆红素、直接胆红素、间接胆红素及乳酸脱氢酶输注前后差异无统计学意义(P>0.05)。患者输血有效率为62.5%,部分有效率为20.0%,无效率为17.5%。结论DTT处理RBC对使用抗CD38单克隆治疗的MM患者配血不相合有效,经这种配血方法选择RBC为患者输注,其实验室指标表明输血疗效较为明显。

抗CD38 单克隆抗体治疗多发性骨髓瘤的作用机制及研究进展

多发性骨髓瘤(MM)的发病率约占所有恶性血液系统疾病的10%,其骨髓检查主要以浆细胞克隆性增生为主,目前仍然很难治愈,且复发性/难治性MM预后效果很差,因此,针对治疗MM的新型药物的研究和开发尤为重要。CD38是MM免疫治疗的重要靶点,抗CD38单克隆抗体药物在MM靶向治疗中已经发挥重要作用,通过了解其免疫效应机制可以更好地预测患者对于治疗的敏感性并对治疗措施进行优化。本文对抗CD38单克隆抗体治疗MM的作用机制及其研究进展进行综述。

抗人CD38分子单克隆抗体生物学功能研究

目的研究抗人CD38单克隆抗体(1C6)的生物学功能。观察1C6对多种肿瘤细胞系生长增殖的影响,利用不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应,观察抗人CD38单克隆抗体(1C6)在人外周血淋巴细胞增殖反应中的作用。方法以MTT法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能。利用抗人CD3单克隆抗体刺激人外周血淋巴细胞增殖、同种异型抗原诱导混合淋巴细胞反应,在加入或未加入抗人CD38单克隆抗体(1C6)的情况下,观察细胞形态并检测3H-TdR掺入量。结果加入不同浓度的1C6的实验组与对照组相比,多种细胞系的生长受到不同程度的抑制。不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应中,加入1C6的实验组细胞克隆明显减少,3H-TdR掺入量明显下降,细胞增殖受抑。结论1C6可抑制多种肿瘤细胞的生长,可介导补体杀伤多种靶细胞。1C6对抗CD3刺激的外周血淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养均具有明显的抑制效应。

抗人CD38单克隆抗体抗原识别表位的初步研究

目的:确定抗人CD38分子单克隆抗体(mAb)1C6识别的抗原表位所在区域。方法:分别构建缺失人CD38不同表位的重组质粒,用IPTG诱导表达融合蛋白。对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Westernblot分析。结果:1C6不能识别缺失第220～241位氨基酸的D4片段,而对其他的缺失突变体均可识别。结论:mAb1C6抗体识别的抗原表位位于CD38分子胞外段第220～241位氨基酸。

单克隆抗-CD38抗体对红细胞血型血清学检测的干扰及解决方法现状

CD38分子高表达于多发性骨髓瘤(MM)细胞表面,但在红细胞、正常淋巴细胞和骨髓细胞上仅少量表达,因此CD38可作为 MM治疗的新靶点。单克隆抗-CD38抗体(中文名:达雷妥尤,Daratumumab)因为其高效性和良好的安全性被广泛应用于治疗复发难治性MM。但是,达雷妥尤会对红细胞血型血清学检测产生干扰。随着单克隆抗体治疗的日益普及,输血实验室收到此类患者血液标本的可能性也随之增加,为输血服务带来重大挑战。本文将结合已发表的临床文献资料,综述国内外解决这一问题的各种方法,最后提出优化输血管理的建议。

抗独特型抗体在CD47单抗治疗患者抗体筛查和配血中的应用

目的 对接受CD47单克隆抗体治疗的受试组患者使用CD47抗独特型抗体(CD47 anti-idiotypic antibody, CD47 AID)中和法(方法1)与缺乏抗IgG4抗人球蛋白法(方法2)进行输血前抗体筛查和主侧配血,比较经此两种方法配血后的输注效果,以评估CD47 AID中和法的可行性。方法 对本院接受CD47单克隆抗体治疗的18位临床受试者用药物后标本,使用方法1与方法2进行抗体筛查和主侧配血,比较输血后血红蛋白差值ΔHb(输血后Hb-输血前Hb)是否有差异;比较使用方法1进行配血的受试组患者与对照组患者(使用普通微柱凝胶法配血且未使用CD47单抗)输血后ΔHb是否有差异。结果 使用方法1与使用方法2进行配血的患者输血后ΔHb比较,两者之间无统计学差异(8.40±0.71 vs 7.36±0.94,P>0.05);使用方法1进行配血的受试组患者与未使用CD47单抗的对照组患者输血后ΔHb比较,两者之间无统计学差异(8.40±0.71 vs 6.59±0.77,P>0.05)。结论 受试组患者采用方法1配血具有与方法2配血相同的输注效果,且具有操作简单、结果客观准确的特点,推荐使用方法1对使用CD47单抗的患者进行输血前抗体筛查及主侧配血。

抗CD38单抗治疗多发性骨髓瘤的抗体鉴定策略

目的分析经抗CD38单抗治疗的多发性骨髓瘤患者的抗体并探索鉴定策略。方法选取2019年11月至2021年6月用抗CD38单抗治疗且配血不合的30例多发性骨髓瘤患者作为研究对象。用0.2 mol/L二硫苏糖醇(DTT)处理的谱细胞对患者血清标本进行抗体特异性鉴定;对有自身抗体的患者用血清倍比稀释法鉴别同种抗体及自身抗体;于第1、7、14、28、35天监测DTT处理后的红细胞在生理盐水和血型分析用稀释液中的游离血红蛋白浓度。结果用DTT处理的谱细胞鉴定发现,24例均为阴性;1例检出抗E同种抗体合并自身抗体;5例检出自身抗体。利用倍比稀释法确认,4例自身抗体没有特异性,1例检出类抗C自身抗体。生理盐水组与血型分析用稀释液组游离血红蛋白浓度随贮存时间延长不断上升,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论经抗CD38单抗治疗的多发性骨髓瘤患者,建议用DTT处理的谱细胞合并血清倍比稀释法快速初步鉴别同种抗体、自身抗体以及CD38单抗干扰;血型分析用稀释液可以用于保存DTT处理的谱细胞。

抗人CD154单克隆抗体抑制免疫应答的实验研究

目的 :探讨抗人CD1 54单克隆抗体对免疫应答的抑制作用。方法 :①在体外进行混合淋巴细胞反应 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体对淋巴细胞增殖反应的影响 ;②在严重免疫联合缺陷 (SCID)鼠体内重建人的免疫功能后 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体在SCID小鼠体内对T细胞增殖的影响和对B细胞功能的影响。结果 :①双向混合淋巴细胞反应结果显示 ,抗体的 5个剂量组的 [3H] -TdR的掺入率均显著低于对照组 (均P <0 .0 1 ) ;②在输注人外周血单个核细胞第 6d、第 1 2d、第 2 1d ,实验组SCID鼠体内人T细胞占SCID鼠淋巴细胞的百分率均明显低于对照组(均P <0 .0 5) ;在输注人外周血单个核细胞后的第 1 2d、第 2 1d、第 31d ,实验组SCID鼠体内人IgG的含量明显低于对照组 (均P <0 .0 5)。结论 :抗人CD1 54单克隆抗体能够在体外抑制淋巴细胞的增殖 。

抗CD20单克隆抗体治疗难治性自身免疫性溶血性贫血

本研究初步观察抗CD20单克隆抗体利妥昔(rituximab)用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的疗效和安全性。对1例用糖皮质激素、脾切除治疗无效的AIHA患者,采用利妥昔单克隆抗体,375mg/m2,每周1次,共4次,观察溶血症状的改变并监测血红蛋白(Hb)水平及其它检验指标,同时观察有无不良反应发生。结果表明,首次治疗后11天乳酸脱氢酶(LDH)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(IBIL)逐渐下降,第45天降至正常范围;首剂治疗25天后Hb水平比治疗之前升高到95-100g/L以上。治疗后已4月余,患者仍处于缓解状态。治疗过程中未发生明显不良反应。结论:抗CD20单克隆抗体利妥昔用于治疗难治性自身免疫性溶血性贫血是有效而且安全的。

抗CD25单克隆抗体治疗耐激素的急性移植物抗宿主病疗效分析

本研究探讨抗CD25单克隆抗体在单倍体相合骨髓移植术(hiBMT)后耐激素的急性移植物抗宿主病(aGVHD)治疗中的作用。对15例单倍体相合BMT后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者给予巴利昔单克隆抗体20 mg,第1、4天静脉点滴,未达到疗效的病人间隔1周后重复本治疗。结果显示:完全有效8例(53.33%),其中4例无病生存,2例生存伴局限性cGVHD,2例死于肺部感染;3例部分有效(20%),其中1例无病生存,1例死于aGVHD及感染,1例死于肺部感染;4例无效(26.67%)死亡,死亡原因有GVHD、肺部感染、心力衰竭。总有效率73.33%,总生存率46.67%。该药应用安全,未发现输注相关的毒副作用。结论:抗CD25单克隆抗体对单倍体相合BMT后耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD具有较好的疗效,但总的生存率仍然较低,感染仍然是导致该类患者死亡的主要原因,因此加强环境保护,预防感染极为重要。

抗CD20单克隆抗体在儿童原发性难治性肾病综合征的应用新进展

原发性难治性肾病综合征(idiopathic refractory nephritic syndrome,IRNS)一直是临床治疗的棘手问题。抗CD20单克隆抗体是一种诱导B细胞溶解和凋亡的新型免疫抑制剂,其出现极大地改善了IRNS患者的预后。近年来,多数病例分析和临床试验对抗CD20单克隆抗体治疗儿童IRNS的有效性进行了报道。本文就抗CD20单克隆抗体的作用机制、在IRNS的临床应用、不良反应及研究中存在的问题进行综述。

RACE策略克隆抗人CD16单克隆抗体轻链可变区基因

鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克隆过程中将不可避免地改变抗体可变区两侧(FR1、FR4)的氨基酸序列, 这些改变可能导致基因工程抗体亲和力降低[3].我们对传统方法进行了改进, 采用5′-RACE(rapid amplification of cDNA end, RACE)克隆的策略, 获得了抗人CD16 mAb轻链可变区(VL)基因的真实序列.