抗CD38单抗治疗多发性骨髓瘤的抗体鉴定策略

目的分析经抗CD38单抗治疗的多发性骨髓瘤患者的抗体并探索鉴定策略。方法选取2019年11月至2021年6月用抗CD38单抗治疗且配血不合的30例多发性骨髓瘤患者作为研究对象。用0.2 mol/L二硫苏糖醇(DTT)处理的谱细胞对患者血清标本进行抗体特异性鉴定;对有自身抗体的患者用血清倍比稀释法鉴别同种抗体及自身抗体;于第1、7、14、28、35天监测DTT处理后的红细胞在生理盐水和血型分析用稀释液中的游离血红蛋白浓度。结果用DTT处理的谱细胞鉴定发现,24例均为阴性;1例检出抗E同种抗体合并自身抗体;5例检出自身抗体。利用倍比稀释法确认,4例自身抗体没有特异性,1例检出类抗C自身抗体。生理盐水组与血型分析用稀释液组游离血红蛋白浓度随贮存时间延长不断上升,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论经抗CD38单抗治疗的多发性骨髓瘤患者,建议用DTT处理的谱细胞合并血清倍比稀释法快速初步鉴别同种抗体、自身抗体以及CD38单抗干扰;血型分析用稀释液可以用于保存DTT处理的谱细胞。

低浓度二硫苏糖醇处理红细胞消除抗CD38单抗对输血前相容性试验的干扰--附2例多发性骨髓瘤病例检测结果报告

目的采用较低浓度二硫苏糖醇(DTT)处理红细胞,消除抗CD38单抗对输血前相容性试验(包括微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血和不规则抗体筛查与鉴定)的干扰,同时保留其他红细胞系统抗原,确保多发性骨髓瘤(MM)患者输血前相容性试验的安全性和有效性。方法报告如东县人民医院收治的2例MM患者,对使用抗CD38单抗的MM患者进行常规输血前相容性试验,包括ABO血型鉴定、不规则抗体筛查和鉴定、交叉配血、直接抗人球蛋白试验。在发现抗体筛查阳性、交叉配血不合、抗体无法鉴定时,进一步采用木瓜酶二步法进行抗体筛查;采用不同浓度DTT处理不规则抗体筛选红细胞,直至找到可消除抗CD38单抗干扰的最低浓度;使用此浓度DTT处理不规则抗体筛选细胞和献血员红细胞,用处理后的红细胞分别进行抗体筛查试验和交叉配血试验。结果2例患者的血浆与不规则抗体筛选红细胞、献血员红细胞全部呈现阳性反应,说明抗CD38单抗可干扰输血前相容性试验结果。当使用不同浓度DTT对不规则抗体筛选红细胞、献血员红细胞进行处理后,2例患者的血浆与红细胞反应结果均为阴性,采用浓度为0.005 mol/L与0.200 mol/L的DTT处理所得反应结果一致。结论对于曾进行抗CD38单抗治疗而导致配血困难的MM患者,采用0.005 mol/L DTT既能消除抗CD38单抗的干扰,又能有效保留其他红细胞系统抗原,保证了输血前相容性试验的安全性和有效性。

重组抗CD38单克隆抗体的质量研究

目的:针对抗白细胞分化抗原38(cluster of differentiation 38,CD38)单抗的关键质量属性建立质控方法。方法:采用肽图法进行鉴别;采用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和尺寸排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)进行纯度控制;采用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)测定电荷异质性;采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定结合活性;采用补体依赖的细胞毒作用(complement dependent cytotoxicity,CDC)和抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)的方法测定生物学活性。其他各项指标均应符合2015年版《中华人民共和国药典》以及其他相关要求。结果:肽图检测具有特征图谱,起到很好的鉴别作用。还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和百分比为(97.87±0.72)%,非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(97.70±0.35)%;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(99.15±0.01)%,高分子量物质的峰面积百分比为(0.47±0.002)%,低分子量物质的峰面积百分比为(0.37±0.01)%。iCIEF分析的主要亚型的峰面积百分比为(63.54±0.37)%,酸性亚型的峰面积百分比为(23.07±0.50)%,碱性亚型的峰面积百分比为(13.38±0.12)%。结合活性的半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50))值为(7.35±0.06)ng·mL^(-1)。CDC活性EC_(50)值为(270.67±12.42)ng·mL^(-1),ADCC活性EC_(50)值为(8.71±1.04)ng·mL^(-1)。结论:针对抗CD38单抗的质量属性,研究建立质控方法并进行质量研究,确保产品的安全、有效和质量可控,对抗CD38单抗的质量控制具有借鉴意义。

利用实验设计优化和建立抗CD38单克隆抗体ADCP生物学活性测定方法

利用实验设计(design of experiment,DoE)方法建立抗CD38单抗(monoclonal antibody,mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,Daudi细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGlo^(TM)Lucifer‐ase Assay system)检测抗CD38单抗的ADCP生物学活性,并运用DoE方法进行实验参数优化。结果显示,抗CD38单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法经统计学实验设计对多个实验参数进行筛选和优化,确定抗体工作浓度为800~20.81 ng·mL^(-1),靶细胞和效应细胞的接种量分别为每孔7.5×10^(4)和2.5×10^(4)个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性;5个不同组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(59.97±4.74)%、(82.44±5.15)%、(110.69±11.71)%、(129.23±5.22)%和(162.15±3.66)%;回收率在103%~120%,RSD均小于11%,线性检测范围为50%~150%。本研究利用DoE设计成功筛选、优化和建立基于报告基因的抗CD38单抗ADCP生物学活性测定方法,该方法具有良好的专属性、重复性和准确性,可作为抗CD38单抗ADCP生物学活性的评价方法。