抗CD40抗体增强宫颈癌肽疫苗的治疗作用

目的探讨抗CD40抗体对宫颈癌肽疫苗治疗作用的影响。方法将乳头状病毒结构性蛋白E7表位肽(E749-57,H-2Db限制性,CD8T细胞表位)与Toll样受体7配体(Gardiquimod)组成疫苗,C57BL/6小鼠给予疫苗及抗CD40抗体免疫后取得外周血及脾组织CD8 T细胞,利用流式细胞仪分析特异性CD8 T细胞数量,Elisa检测CD8 T细胞与TC-1细胞(表达HPV E7蛋白的小鼠宫颈癌细胞)共孵育后干扰素(INF-γ)表达水平。另取15只皮下荷瘤小鼠,监测免疫后肿瘤生长速度。结果与单用疫苗组相比,抗CD40抗体明显增加小鼠外周血肿瘤特异性CD8T细胞数量(16.50±0.8185%vs 9.747±1.834%,P=0.0282),且内源性CD8 T细胞体外与TC-1细胞共孵育可以分泌INF-γ,体内显著抑制皮下肿瘤生长(P<0.001)。结论抗CD40抗体增强肽疫苗诱发的免疫应答,有潜力成为一种良好的佐剂。

CpG-ODN联合抗CD40抗体活化小鼠调节性B细胞抑制CD4＋T细胞增殖

目的分析CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)联合抗CD40抗体刺激后的调节性B细胞(Breg)对其免疫调节功能的影响。方法用流式细胞分选仪分选小鼠脾脏CD5+CD1 dhighBreg与CD5-CD1 dlowB细胞亚群,CpG-ODN联合抗CD40抗体激活24 h,再与纯化的CD4+T细胞共培养,流式细胞术检测活化后的Breg及对照CD5-CD1 dlowB细胞亚群白细胞介素10(IL-10)的表达,以及共培养抗CD3抗体联合抗CD28抗体激活的CD4+T细胞的增殖与γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果 CpG-ODN联合抗CD40抗体激活的CD5+CD1 dhighBreg亚群与CD4+T细胞共培养时能明显抑制活化的CD4+T细胞的增殖,同时IFN-γ的水平降低;而CpG-ODN联合抗CD40抗体刺激后的对照B细胞亚群则不能抑制CD4+T细胞的增殖与IFN-γ分泌。CD5+CD1 dhigh Breg亚群在CpG-ODN联合抗CD40抗体刺激24 h,IL-10的表达水平明显高于CD5-CD1 dlowB细胞亚群。结论体外CpG-ODN联合抗CD40抗体刺激后的CD5+CD1 dhighBreg亚群通过分泌IL-10抑制CD4+T细胞的活化。

抗CD40L单克隆抗体在异种胰岛移植排斥反应中的作用

目的探讨抗CD40L单克隆抗体在异种胰岛移植排斥反应中的作用及其机理。方法建立人-大鼠异种胰岛移植模型,用抗CD40L单克隆抗体进行干预治疗,观察糖尿病大鼠行异种胰岛移植后的血糖变化,糖尿病大鼠和移植物的生存情况及移植物病理形态学改变,采用ELISA法检测糖尿病大鼠细胞因子IL-2和TNF-α水平的变化。结果①全部糖尿病大鼠在胰岛移植后第(2.3±0.2)d血糖降至正常,对照组血糖在移植后第(8.1±0.6)d开始明显升高,治疗组血糖在移植后第(18.5±1.2)d开始明显升高,明显晚于对照组(P<0.01)。②治疗组移植物存活时间(22±8.2)d较对照组(10±2.1)d显著延长(P<0.01)。③糖尿病大鼠生存时间,治疗组(35±6.5)d显著长于对照组(21±5.7)d,P<0.05。④对照组在移植后第(3.2±0.3)dIL-2及TNF-α的水平均急剧上升,至移植后第(7.3±0.5)d达到高峰;治疗组IL-2及TNF-α的水平在移植后第(22.6±1.7)d开始明显上升,至移植后第(28.5±2.2)d达到高峰,明显晚于对照组(P<0.01)。结论抗CD40L单克隆抗体可抑制异种胰岛移植的排斥反应,延长受体大鼠和移植物的存活时间。

白细胞介素-10联合抗CD_(40)L单克隆抗体对大鼠小肠移植早期排斥反应的研究

目的探讨重组大鼠白细胞介素-10(rIL-10)联合抗大鼠CD40L单克隆抗体对抑制大鼠小肠移植早期排斥反应的作用,为小肠移植免疫提供实验依据。方法将30只雄性SD大鼠和Wistar大鼠(各15只),建立(SD→Wister)大鼠小肠移植模型,随机分为A、B、C3组各10只。A组为生理盐水对照组;B组应用rIL-10;C组应用rIL-10联合抗CD40L单克隆抗体。3组均于术后第2天开始注射。术后第5、7天从3组随机各取5只,取小肠移植物,行组织病理学检查;采受体大鼠的外周血检测IL-2、干扰素-γ(INF-γ)表达水平。结果组织病理学检查:与A组相比,B、C组早期排斥反应明显延迟,且C组早期排斥反应较B组轻;外周血血清学检测:B、C组受体大鼠血清IL-2、INF-γ较A组明显降低,且C组较B组均有不同程度的下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 rIL-10联合抗大鼠CD40L单克隆抗体能有效抑制大鼠小肠移植的早期排斥反应。

抗CD40L单克隆抗体对哮喘大鼠血液和淋巴液调节性T细胞的影响

目的:研究抗CD40L单克隆抗体(抗CD40L mAb)对哮喘大鼠外周血和淋巴液中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)数量及其功能的影响。方法:抗CD40L mAb处理血液和淋巴液中的单个核细胞(MNCs),流式细胞仪(FCM)检测MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞的百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:体外培养72 h后,淋巴液来源MNCs中CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例均明显高于血液来源的MNCs,末次激发后各组淋巴液和血液来源MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例随细胞收集时间距末次激发时间延长呈先升高后降低的趋势;哮喘组淋巴液和血液来源MNCs中CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg比例均显著低于正常对照组和抗CD40L mAb组(P<0.05);末次激发后0、12 h收集的血液MNCs培养上清中抗CD40L mAb组TGF-β1的水平显著高于哮喘组和正常对照组(P<0.05);末次激发后24 h收集的淋巴液来源MNCs培养上清中抗CD40L mAb组IL-10的水平显著高于哮喘组和正常对照组(P<0.05)。结论:抗CD40L mAb促进CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞增殖,并在哮喘激发早期(0、12 h)促进血液来源CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞分泌TGF-β1,哮喘激发后期(24 h)促进淋巴液来源CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞分泌IL-10。

CD40-CD40L与急性冠脉综合征的研究进展

本文介绍了CD40与CD40L的生物学特性,包括其分布、来源、信号转导机制。综述了CD40-CD40L与慢性炎症、免疫调节、血栓形成、斑块不稳定的相关性,提示抗CD40L治疗是未来防治急性冠脉综合征的一个方向。

活化CD40-CD40L通路联合Docetaxel对乳腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨活化淋巴细胞活化的共刺激通路CD40-CD40L联合化疗药Docetaxel对乳腺癌细胞增殖的影响。方法:用rhCD40L活化CD40-CD40L共刺激通路,联合Docetaxel,用MTT法测定CD40+的乳腺癌细胞株M231、M435细胞的增殖;采用碘化丙啶(PI)掺入法测定细胞周期。结果:rhCD40L可抑制乳腺癌细胞M231、M435增殖,合用Docetaxel时乳腺癌细胞M231、M435的增殖受到进一步抑制,测定细胞周期G1期细胞数量明显增加(P<0.05),S期细胞数量下降(P<0.05)。结论:活化CD40-CD40L通路能抑制孔腺癌细胞的增殖,这种抑制作用具周期特异性,主要将乳腺癌细胞增殖阻滞在G1期,可提高乳腺癌细胞对Docetaxel的敏感性,两者具有抑制肿瘤细胞的协同效应。

阻断CD40-CD40L信号通路对小鼠肺移植术后闭塞性细支气管炎的影响

目的本研究使用抗CD40L抗体(克隆号:MR1)阻断CD40-CD40L信号通路,利用小鼠原位左肺移植模型,对比其与传统免疫抑制剂环孢素/甲泼尼龙对小鼠术后移植物闭塞性细支气管炎(obliterative bronchiolitis,OB)的治疗效果,并进一步评估其对移植物术后损伤的影响及相应机制,为临床肺移植术后治疗方法提供新思路。方法构建小鼠原位左肺移植模型,以野生型Balb/c小鼠作为供体小鼠,野生型C57BL/6小鼠作为受体小鼠。移植术后10 d,牺牲小鼠,采用苏木精/伊红(hematoxylineosin,HE)染色、Masson染色以及中性粒细胞特异性染色(抗髓过氧化物酶),观察各组移植左肺的组织病理学改变,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测移植物中白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)mRNA的表达水平的变化。结果术后10 d,注射了环孢素/甲泼尼龙和抗CD40L抗体治疗的小鼠,移植左肺外观体积增大;病理结果显示抗CD40L抗体治疗组较环孢素/甲泼尼龙治疗组炎性细胞浸润和OB现象得到有效缓解(P<0.05),中性粒细胞浸润显著减少(P<0.01);抗CD40L抗体治疗组移植物中IL-17A mRNA表达水平,较环孢素/甲泼尼龙治疗组显著降低(P<0.01)。结论利用抗CD40L抗体阻断CD40-CD40L信号通路能够有效保护移植物细支气管上皮,缓解小鼠肺移植术后急性排斥和OB反应以及小气道损伤,且效果优于传统抑制剂环孢素/甲泼尼龙。

CD40-CD40L信号通路在移植免疫中的应用与进展

CD40-CD40L信号通路在特异性免疫中是一条重要的细胞信号传导通路,它参与体液免疫和细胞免疫的调节。动物实验表明抗CD40L单克隆抗体(m Ab)阻断CD40与CD40L的结合,从而阻断CD40-CD40L信号的传导,具有抑制器官移植排斥反应的作用。近年来抗CD40Lm Ab在临床试验中出现的血栓并发症导致其应用受到了质疑。随着人们对CD40-CD40L信号通路的认识不断深入,尤其是新的抗CD40m Ab的应用,使得克服与之相关的血栓并发症成为可能,加之其在动物器官移植模型中表现出良好的应用前景,相信这将会进一步推动器官移植免疫耐受及免疫抑制剂方案的发展。本文就CD40-CD40L信号通路在器官移植方面取得的进展进行综述。

CTLA4-Ig和抗CD40L单克隆抗体抑制大鼠胰腺移植急性排斥反应的机制

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)和抗CD40L单克隆抗体对异基因大鼠胰腺移植后急性排斥反应的作用及其相关机制。方法建立大鼠的胰十二指肠移植模型,供者为F344大鼠,受者为经链尿佐菌素诱导为糖尿病模型的Lewis大鼠,受者移植后分为4组,每组12只。A组:为应用生理盐水对照组;B组:应用CTLA4-Ig 200μg;C组:应用抗CD40L单克隆抗体200μg;D组:联合应用CTLA4-Ig和抗CD40L单克隆抗体各200μg。各组分别于术后第2 d腹腔注射相应的药物。术后1、4、7、10d分别取各组的移植胰腺,进行常规病理检测;采用逆转录聚合酶链(RT-PCR)法检测移植物白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)的表达;术后第1、4、7、10d取受者外周血,采用流式细胞术计数T细胞亚群CD3^+、CD4^+和CD8^+;术后第4 d取移植胰计数CD4^+CD25^+T细胞。结果病理检测显示:与A组相比,B、C组排斥反应明显减弱,D组几乎未发生排斥反应;B、C、D组IL-2的表达高峰延迟,且表达水平较A组有不同程度的降低,D组又较B、C组表达水平下降,差异有统计学意义;B、C、D组IFN-γ的表达水平较A组有不同程度的降低,但D组与B、C组的差异不显著;B、C组IL-4的表达水平较A组有不同程度的升高,D组较A、B、C组表达水平下降,差异有统计学意义;B、C组IL-10的表达水平较A组有不同程度的升高,D组与A组差异不显著;B、C、D组CD3^+、CD4^+和CD8^+T细胞数均相对减少,CD4^+CD25^+T细胞数有不同程度升高,与A组比较,D组的差异最为显著。结论联合应用CTLA4-Ig和抗CD40L单克隆抗体能更有效地抑制大鼠胰腺移植后排斥反应,其机制可能与Th1/Th2型细胞因子偏移及CD4^+CD25^+调节性T细胞增多等有关。

抗CD40L单克隆抗体对卵清蛋白诱导的哮喘小鼠Th2炎症反应的影响

目的:观察抗CD40L单克隆抗体对OVA诱导的哮喘小鼠Th2炎症反应的影响。方法:18只野生型BALB/c小鼠随机分为PBS干预哮喘组、抗CD40L单克隆抗体干预哮喘组和正常对照组,每组6只;抗CD40L单克隆抗体干预哮喘组小鼠于第一次激发前尾静脉注射抗CD40L单克隆抗体500μg,并用等量PBS对照。分别采用HE和PAS染色观察肺组织炎症和气道杯状细胞增生;姬姆萨染色检测肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和分类计数;ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5和IL-13水平;小鼠肺功能仪测定小鼠气道高反应性。结果:抗CD40L单克隆抗体干预哮喘组病理检查肺组织炎症明显减少,抗CD40L单克隆抗体可以减少哮喘小鼠气管基底膜PAS+细胞(杯状细胞)数量(P<0.05),减少BALF中细胞总数、巨噬细胞和嗜酸粒细胞数量(P<0.05),降低BALF中IL-4、IL-5和IL-13水平(P<0.05),抑制哮喘小鼠气道高反应性(P<0.05或P<0.01)。结论:尾静脉注射抗CD40L mAb可以抑制OVA诱导的哮喘小鼠Th2炎症反应。

β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体对树突状细胞免疫功能影响的体外研究

目的探讨β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体(5C11)对树突状细胞(DCs)的作用及分子机制。方法采用密度梯度离心法从健康人新鲜的浓缩白细胞中分离出单个核细胞,使用GM-CSF和IL-4细胞因子法诱导培养未成熟DCs,经不同刺激方式(5C11、β-葡聚糖、5C11+β-葡聚糖)激发后,流式细胞术检测不同组DCs表面共刺激分子CD40、CD80、CD83、CD86和MHCⅡ类分子HLA-DR的表达,ELISA法检测IL-12、IL-6、TNF-α、IL-10等相关细胞因子的表达,Western blot检测MAPK信号通路中相关蛋白质的磷酸化水平。结果β-葡聚糖能够显著诱导CD40在DCs表面的表达(P<0.05),联合5C11后,其他表面分子CD80、CD83、CD86的表达进一步显著上调,尤其对DCs成熟的重要标志分子CD83的上调表现出强烈的协同效应(P<0.01);ELISA检测结果显示β-葡聚糖联合5C11可以诱导DCs大量分泌IL-12、IL-6、TNF-α等促炎因子,对发挥DCs功能的关键因子IL-12的分泌表现出协同效应(P<0.01);Western blot结果显示p38 MAPK、p44/42 MAPK的磷酸化水平显著上升,且磷酸化时间提前,维持时间也延长(P<0.01)。结论β-葡聚糖联合5C11可协同促进DCs的成熟并提高DCs的免疫功能,为肿瘤DCs疫苗的制备方案提供了新思路。

人类抗人CD40单克隆抗体免疫激活活性依赖于其Fc与FcγRⅡB相互作用

激动型抗CD40单抗能够激活APC表面CD40免疫共刺激信号,促进其成熟和交叉提呈抗原并激活抗原特异性CTL以杀伤肿瘤,多年来一直是肿瘤免疫治疗的研究热点。以鼠源抗体为基础的研究表明,激动型抗鼠CD40单抗的活性受到抑制性Fcγ受体(FcγRⅡB)的驱动,但尚不清楚这一调控机制是否影响人类抗人CD40(hCD40) IgG单抗。为此,作者研究了Fcγ受体(Fcγreceptor, FcγR)结合能力对人类抗hCD40单抗活性的影响,发现抗体恒定区(Fc)失去FcγR结合能力会严重削弱人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;同时,FcγRⅡB特异性阻断抗体可以显著抑制人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;此外,增强抗体Fc的FcγRⅡB结合能力能够提高抗体的激动活性。而且,多个抗原结合表位不同的人类抗hCD40单抗在实验中表现一致,说明抗CD40单抗的激动活性普遍依赖于FcγRⅡB。上述研究有助于探索激动型抗CD40单抗的活性调控规律,为设计更好的激动型抗hCD40抗体提供思路。

阻断糖尿病小鼠共刺激分子延长异种胰岛移植细胞功能

目的阻断多种共刺激分子而诱导免疫耐受,以延长移植到糖尿病小鼠体内的猪胰岛细胞的功能。方法将猪胰岛细胞移植于链脲佐菌素诱导的雄性C57BL/6糖尿病小鼠左肾被膜下,应用CTLA-4Ig融合蛋白、抗LFA-1抗体和抗CD40L抗体阻断多种共刺激分子,观察移植效果及移植物存活时间。结果猪胰岛细胞移植后可降低糖尿病小鼠血糖;与对照组相比,实验组胰岛细胞存活时间明显延长。结论应用CTLA-4Ig融合蛋白、抗LFA-1抗体和抗CD40L抗体可延长异种移植胰岛细胞存活时间。