抗CD47单克隆抗体制备及其促巨噬细胞吞噬作用鉴定

目的:制备可识别肿瘤细胞表达CD47蛋白的抗CD47单克隆抗体,并鉴定其抗肿瘤作用。方法:利用BL21(DE3)原核表达系统表达CD47胞外段蛋白,利用Ni-NTA层析纯化表达蛋白。免疫BALB/c小鼠,制备并筛选分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用正辛酸-硫酸铵沉淀方法纯化抗CD47单抗。利用流式细胞术检测纯化抗体的活性。利用巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验,检测抗CD47单抗的抗肿瘤作用。结果:表达并纯化了CD47胞外段蛋白,筛选到了分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株-7D4,流式细胞术检测结果显示,抗体具有结合肿瘤细胞的活性,但是对不同肿瘤类型细胞的结合效率存在差异。巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验发现,利用抗体封闭肿瘤细胞CD47信号后,可以增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。结论:抗CD47单抗-7D4可以促进巨噬细胞的吞噬作用,具有潜在应用价值。

CD47-SIRPα阻断剂在实体癌和血液癌中的研究现状

CD47属于免疫球蛋白家族成员之一,广泛存在于细胞膜表面,特别是在肿瘤细胞中高表达。肿瘤细胞表面的CD47可与巨噬细胞表面的抑制性免疫受体--信号调节蛋白α(SIRPα)相结合,形成CD47-SIRPα信号复合体,该复合体能抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬,使肿瘤细胞逃避免疫监视,从而促进肿瘤的发展。目前免疫治疗主要是通过抗CD47抗体抑制CD47-SIRPα信号通路,激活先天性免疫反应和适应性免疫反应,提高巨噬细胞靶向杀伤肿瘤细胞的能力。CD47-SIRPα正逐渐成为肿瘤免疫治疗的新型有效免疫治疗靶标,论文对CD47-SIRPα阻断剂在实体癌和血液癌的研究现进行以综述,以期为实体癌和血液癌的研究提供参考。

鼠源抗CD47单克隆抗体的筛选及活性评价

通过杂交瘤技术筛选得到了一株鼠源抗白细胞分化抗原47(CD47)单克隆抗体。采用聚乙二醇融合法,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选抗CD47的杂交瘤细胞,通过Protein G亲和柱纯化抗体,利用十二烷基磺酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法检测目的蛋白的相对分子质量,通过生物分子相互作用分析仪检测目的抗体的亲和力,并通过ELISA法测定抗CD47抗体的信号调节蛋白α(SIRPα)的阻断效力。用藻红蛋白(PE)标记的Raji细胞与不同浓度的抗CD47单抗共同孵育,检测抗CD47抗体促进巨噬细胞吞噬的作用。采用血凝试验对抗CD47单抗导致红细胞凝集的能力进行了分析,并进一步通过小鼠实体瘤模型,考察抗CD47单抗的抑制肿瘤生长作用。结果显示,筛选得到的一株杂交瘤细胞,即抗CD47单克隆抗体3D8,其亲和力常数值为1.29×10^(-11)mol/L,ELISA法测得其半数有效浓度(EC_(50))值为0.17 nmol/L,可有效阻断CD47与SIRPα的相互作用,增强巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的能力,吞噬率达85%。该抗体在亲和力、阻断力、吞噬率等方面均优于在售抗体,同时不会导致红细胞凝集。在小鼠实体瘤模型中,肿瘤生长抑制率为95.44%,可明显抑制肿瘤生长。本研究为后期抗CD47抗体的人源化和抗CD47抗体的临床前研究提供了参考。