抗CD71抗体抑制移植物抗宿主反应的组织病理学研究

探讨抗CD71抗体在动物体内抗移植排斥反应的作用。采用D2C5 6细胞株表达并提纯抗CD71人 鼠嵌合抗体 ;将人外周血单个核细胞 (PBMC)注射到裸鼠体内建立移植排斥反应动物模型 ;将造模裸鼠分成 3组 :抗CD71抗体组、抗CD4抗体组和Hanks液模型组 ,分别注射抗体及Hanks液 ;2 0天后处死 ,取裸鼠肝、肺、脾组织 ,常规组织病理学处理并进行图像分析。实验发现 :Hanks液模型组动物的肝、肺组织有大量的淋巴细胞浸润、肝细胞坏死及脾脏巨噬细胞活化 ;抗CD71抗体组和抗CD4抗体组的炎症性病变轻于模型组 ,差异具有极显著的统计学意义 (P <0 0 1)。提示

抗CD71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞的效应

目的 通过体外实验探讨抗CD71人 鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞效应的影响 ,并与其鼠源性单克隆抗体进行比较。方法 以丝裂原诱导的人外周血单个核细胞 (PBMC)为靶细胞 ,测定嵌合抗体和鼠源性单抗对其增殖抑制率 ;在新鲜补体存在下 ,测定补体依赖性嵌合抗体介导的细胞毒效应(CDC)。以EBV转化的B细胞为刺激细胞 ,测定两种抗体对其诱导的同种异体PBMC的增殖抑制率 ;以同种异体的PBMC为刺激细胞 ,测定两种抗体在单向、双向混合淋巴细胞培养 (MLC)中的增殖抑制率。结果 嵌合抗体和鼠源性单抗均可明显抑制丝裂原诱导的PBMC的增殖反应 ,且二者抑制率差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,其抑制作用随抗体浓度增加而增强 ,PBMC和丝裂原共同孵育 12h后加入抗体的增殖抑制效应最明显 ;在新鲜补体存在下 ,嵌合抗体对丝裂原诱导增殖的PBMC具有CDC作用 ,而鼠源性单抗CDC作用较弱 ;两种抗体对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用 ,且嵌合抗体组抑制率明显高于鼠源性单抗组 (P <0 .0 5 )。结论 抗CD71人 鼠嵌合抗体在体外实验中可抑制淋巴细胞的活化及其效应 ,其作用明显强于抗CD71鼠源性单克隆抗体。

抗CD71人-鼠嵌合抗体诱导K562细胞凋亡及其机制探讨

目的 研究抗CD71人 鼠嵌合抗体诱导K5 6 2细胞凋亡的效应及其机制。方法 台盼蓝拒染法观察抗CD71人 鼠嵌合抗体对K5 6 2细胞生存的影响 ;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K5 6 2细胞的作用 ;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K5 6 2细胞凋亡 ,以AnnexinⅤ检测其凋亡率及进行细胞周期分析 ;并检测胞浆中细胞色素C和活化的caspase 8的相对含量。结果 抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K5 6 2细胞的增殖作用 ,且二者抑制作用差异无显著性(P >0 .0 5 )。经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K5 6 2细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变 ,细胞周期分析可见其将细胞周期阻止在G1 期 ,胞浆中细胞色素C含量增加而活化的caspase 8的含量不增加。结论 抗CD71人 鼠嵌合抗体可通过线粒体死亡途径诱导K5 6 2人红白血病细胞凋亡 ,其诱导凋亡可能与其干扰细胞铁离子转运有关。

转铁蛋白受体介导的肝癌靶向性HSV-tk/GCV系统的构建及体外效应研究

目的 :构建肝癌靶向性 HSV- tk/ GCV基因转移系统 ,并研究其在体外对肝癌细胞的杀伤效应。方法 :体外培养通过基因重组技术构建和表达抗转铁蛋白受体 ( Tf R)人 -鼠嵌合抗体的转染瘤细胞 D2 C5 .6,诱导裸鼠( Balb/ c,nu/ nu)产生腹水并纯化 ;以蛋白质连接因子 -水溶性碳二亚胺 ( EDC)介导 Tf R的抗体与多聚左旋赖氨酸的连接 ( Ab- PL L ) ,与 p EBAF/ tk按比例混匀 ,得到 Ab- PL L - p ETAF/ tk基因转移系统 ;分别转染不同的细胞株进行体外效应研究 :人肝癌细胞株 Hep G2、SMMC772 1,人肺癌细胞株 5 49,观察给予不同浓度的更昔洛韦 ( GCV)随时间延长的细胞改变情况 ,用 MTT法检测 GCV对不同细胞的杀伤作用。结果 :分析型酸性尿素凝胶电泳证实抗 Tf R的抗体与 PL L成功连接 ;体外杀伤实验显示 :经 Ab- PL L - p ETAF/ tk基因转移系统处理的 3种细胞对 GCV表现出不同的敏感性。 Hep G2细胞 ( CD71 ,AFP )对 GCV很敏感 ,低浓度的 GCV( 1mg/ L )处理 3 d,即可使细胞生长抑制率达到 74.8% ,SMMC772 1细胞 ( CD71 ,AFP+ )对 GCV低度敏感 ,A5 49( CD71- ,AFP- )对 GCV不敏感。结论 :Tf R介导的肝癌靶向性 HSV- tk/ GCV基因转移系统构建成功 ;