抗CEA嵌合抗体在CHO细胞中的高效表达

目的为了在CHO-dhfr 细胞中高效表达有活性的抗人CEA鼠-人嵌合抗体。方法构建抗CEA嵌合抗体的真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过加入 MTX进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Western bolt、ELISA 、体内放射免疫实验等方法鉴定所表达的嵌合抗体的生物学特性。结果获得产量可达60 μg/ml的细胞株。Western blot、 ELISA、体内放射免疫实验证明所表达的嵌合抗体的确含人抗体的恒定区,并特异地与 CEA结合。结论成功地在真核细胞CHO-dh fr-中高效表达了抗CEA嵌合抗体,并具有良好的生物活性。

抗CEA抗体可变区基因的克隆及其嵌合抗体的表达

目的 在真核细胞中表达抗癌胚抗原 (carcinoembryonic antigen,CEA)人 -鼠嵌合抗体。方法 从分泌抗 CEA鼠单抗 C5 0的杂交瘤细胞中扩增、克隆可变区基因。测序鉴定后连入真核表达载体 ,导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢 (dihydrofolate reductase- deficient Chinese ham ster ovary,CHO- dhfr- )细胞进行表达。采用间接和竞争抑制 EL ISA检测表达产物的人源性和抗原结合特异性。结果 序列测定初步确定所克隆的是功能性抗体可变区基因。在转染细胞上清中测到抗 CEA嵌合抗体的表达。EL ISA试验证实该嵌合抗体具有人的恒定区 ,并与原鼠单抗 C5 0有相同的抗原结合特异性。结论 成功地在真核细胞中表达了抗 CEA人 -鼠嵌合抗体。

抗CEA嵌合小分子抗体的构建与表达

目的构建表达抗 CEA小分子抗体 ,以利于放射免疫诊断及导向治疗。方法构建 CEA单链抗体基因 ,克隆入载体 p Kp L - 3a,在大肠杆菌中包涵体表达 ,EL ISA检测活性。将轻重链基因克隆入分泌型表达载体 p SCMH,在大肠杆菌中表达 ,EL ISA检测活性。将 CEA嵌合抗体的轻链和 Fd基因克隆入杆状病毒表达载体 p Ac U W5 1中 ,在 sf9细胞中分泌表达 ,EL ISA检测活性及测定产量 ,竞争抑制 EL ISA测定其识别的抗原表位。结果多种方法复性的包涵体及原核分泌表达的单链抗体未测到活性。昆虫细胞中表达的小分子抗体具抗体活性 ,产量为 1.7μg/m L,竞争抑制实验显示其与亲本鼠单抗 C5 0识别相同的表位。结论该 CEA抗体基因在大肠杆菌中不能表达出有功能的分子 ,而在昆虫细胞中表达了具活性抗体分子 ;某些抗体基因只有在真核细胞中才能表达出有功能的抗体分子。

^(131)I-抗CEA单抗防治大肠癌根治术后肝转移的实验研究

目的 探讨1 3 1 I 抗癌胚抗原 (CEA)单抗防治裸鼠体内人结肠癌细胞肝转移的效果。方法 裸鼠脾内注入人结肠癌细胞后、脾切除后第 4或第 8d腹腔注射1 3 1 I 抗CEA单抗 ,观察术后生存时间 ,并对肝脏进行组织学检查。结果 术后第 4或第 8d注射1 3 1 I 抗CEA单抗均显著延长裸鼠术后生存时间 ;术后第 4d注射可使肝转移率减少 33 3% ,第 8d注射不能使肝转移率减少。结论 术后早期行放射免疫治疗可取得较好的治疗效果 。

^（131）I标记抗CEA单抗膀胱内给药在膀胱癌诊断中的应用

^（１３１）Ｉ标记抗ＣＥＡ单抗膀胱内给药在膀胱癌诊断中的应用潘铁军，袁建民，马洪济，熊旭林，鲁功成，邵明忠，张齐钧，刘慎沛，崔武仁，刘忠北，张永学泌尿系统肿瘤中膀胱癌的发病率占３０％，对其作出准确的定性、定位诊断．对于膀胱癌病人的治疗及预后具有重要意?..

^(188)Re-抗CEA单抗治疗小鼠结肠癌模型的疗效观察

目的 观察188Re抗CEA单抗 (C5 0 )对小鼠结肠癌模型的治疗作用 ,评估不同给药方法对疗效的影响。方法 将BALB/C小鼠结肠癌模型随机分成 5组 ,分别为对照组、化疗组、RIT1组、RIT2组、RIT3组 ,用不同的处理方法治疗 3周后将小鼠处死 ,取出肿瘤 ,测量肿瘤体积与重量 ,分析不同处理方法对肿瘤生长的影响。结果 通过不同治疗 3周后肿瘤体积、重量的比较可以看出 ,RIT各组与对照组之间均存在明显的差异 ,其中肿瘤生长受抑制最明显的是RIT3组 (瘤内注射 18.5MBq/只 ) ,3周后肿瘤平均体积为 10 43.5 4mm3 ,平均重量为 3.2 378g ,瘤内注射组 (RIT3组、RIT2组 )与静脉给药组 (RIT1组 )及RIT局部注射组与化疗组之间也存在明显的差异 (P <0 .0 5 )。结论 188Re -C5 0对小鼠结肠癌模型的治疗有效 ,疗效优于 5 -Fu化疗 ,瘤内注射给药的疗效优于静脉给药 ,为188Re-C5 0应用于临床治疗结肠癌提供了可靠的依据。

^(153)Sm标记DTPA-抗CEA单克隆抗体的研究

目的研究(１５３)Ｓｍ通过二乙三胺五乙酸（ＤＴＰＡ）环酐（ｃＤＴＰＡａ）为双功能络合剂标记抗ＣＥＡ单抗的方法。方法确定ｃＤＴＰＡａ与抗体偶联的最佳条件，并测定偶联物的免疫活性及在体外的稳定性。结果(１５３)Ｓｍ标记抗ＣＥＡ单抗的方法简便、快速，且抗体与ｃＤＴＰＡａ偶联后其免疫活性无明显丧失。在抗体浓度为２０ｍｇ／ｍｌ时，最佳偶联条件为：抗ＣＥＡ单抗与ｃＤＴＰＡａ的摩尔比为１：２０，偶联反应中ｐＨ为７～８。在最佳偶联条件下，用高比活度的(１５３)Ｓｍ（２２．２ＳＧＢｑ／ｍｌ），ＣＥＡＭｃＡｂ－ＤＴＰＡ的标记率可达６０％。结论通过ＤＴＰＡ环酐法将(１５３)Ｓｍ标记到单抗上所制备的放射免疫偶联物可作为一种有希望的放射免疫治疗剂。

用细胞-ELISA法检测抗CEA抗体

目的 以高表达CEA的人结肠癌细胞系LoVo作为抗原 ,建立检测抗CEA抗体的细胞 ELISA法。方法 将1.0× 10 6 mL浓度 2 0 0 μL的LoVo加入培养板培养 2 4h ,用 0 .0 2 5 %戊二醛固定 ,加入经CEA基因疫苗免疫小鼠血清 ,亲和素 生物素复合物 ,酶标仪检测OD值。结果 建立了ABC CELISA检测抗CEA抗体 ,2套基因疫苗诱导抗CEA抗体效价不同。结论 ABC CELISA法简便 ,敏感度高 ,为研究CEA体液免疫提供了方法。

^(131)I标记抗CEA单克隆抗体C50对荷人乳腺癌裸鼠局部放射免疫治疗效果

目的:观察放射免疫导向药物局部用药对荷人乳腺癌裸鼠的治疗效果。方法:将抗CEA单抗C50与131I偶联,制成放射免疫导向药物131I-C50。将已乳腺原位接种人乳腺癌MCF-7细胞且肿瘤直径已达0·5cm的裸鼠16只随机分为实验Ⅰ组、实验Ⅱ组、实验对照组(Ⅲ组)及空白对照组(Ⅳ组),每组4只。对荷人乳腺癌裸鼠进行肿瘤局部注射,Ⅰ组给予131I-C5018·5MBq,Ⅱ组给予131Ⅰ-C503·7MBq,Ⅲ组给予131I-mIgG18·5MBq,Ⅳ组给予C500·75μg,给药当日后6周内每周测定肿瘤大小,计算抑瘤率。结果:Ⅰ组和Ⅱ组与Ⅲ组之间的肿瘤体积、抑瘤率、重量比较差异有显著性(P<0·01),Ⅰ组与Ⅱ组上述指标比较差异亦具有显著性(P<0·05),Ⅲ组与Ⅳ组比较差异无显著性(P>0·05)。结论:放射性核素131I标记抗CEA单抗C50局部治疗可抑制荷人乳腺癌裸鼠肿瘤的生长。131I-C50具有潜在的临床应用价值。

人源性噬菌体抗体库中抗CEA单抗的筛选与初步鉴定

目的 探讨利用噬菌体抗体库技术制备抗CEA的人源性单抗的可行性。方法 以纯化的CEA为抗原 ,应用噬菌体表面呈现技术 ,通过 3轮亲和富集及 2轮淋巴细胞吸附实验 ,从已构建好的人源性噬菌体抗体库中筛选出抗CEA的人源性单抗 ,随机挑出 10株单克隆在大肠杆菌中进行表达 ,并采用ELISA、SDS PAGE及基因测序进行初步鉴定。结果 ELISA显示有 9株单抗具有与CEA特异性结合的能力 ,挑选其中 2株具有较高亲和力的单克隆 ,经 12 %SDS PAGE蛋白电泳 ,在分子量约为 2 5kd处可见一新增蛋白带 ,与基因编码蛋白的理论计算值相符合 ,基因测序结果与GeneBank等相比对具有较高的序列同源性。结论 噬菌体抗体库技术是研制人源性单抗的有效途径。

经门静脉注射^(131)I标记抗CEA单抗后对荷瘤鼠CEA水平影响的实验研究

目的 研究经门静脉途径 (脾脏 )注射131I标记抗CEA单抗后对荷瘤鼠血清、腹水和瘤组织中CEA水平的影响。方法在接种结肠癌细胞悬液后 1 0min内 ,分别经脾脏和经尾静脉注射131I标记抗CEA单抗 ,对照组注射131I标记正常小鼠IgG。结果 经脾RAIT组荷瘤鼠血清、腹水和瘤组织中的CEA水平分别为 ( 2 3.8± 4 .3)、( 4 0 .1± 5.2 )、( 4 5.7± 7.0 ) μg/L ,对照组则为 ( 4 4.1±4 .7) ,( 52 .3± 7.0 ) ,( 6 7.0± 9.2 ) μg/L ,差异均有非常显著性 (P <0 .0 1 ) ;经脾RAIT组荷瘤鼠血清CEA水平也低于经尾静脉RAIT组 ( 2 9.7± 4 .8μg/L) ,两组之间具有显著性差异 (P <0 .0 5)。 结论 经门静脉途径注射131I标记抗CEA单抗较经尾静脉注射能更有效地降低荷瘤鼠血清中的CEA水平。

^(153)Sm标记DTPA-抗CEA单抗的放射化学纯度的分析

目的 :应用纸层析法 ,建立153Sm通过DTPA环酐 (cDTPAa)标记抗CEA单抗的放射化学纯度分析方法。方法 :在多种纸层析系统中 ,经实验确定最佳纸层析分离条件 ,并将测定结果与SephadexG - 5 0凝胶柱层析法进行比较。结果 :最佳分离条件为 :展开剂组分比为磷酸三丁酯∶丁酮∶乙酸乙酯 =4∶10∶3,支持物为30 %硝酸铵处理的新华Ⅰ号滤纸。其标记率测定结果与柱层析法结果一致。结论 :结果表明该法设备简单 。

^(188)Re-抗CEA单抗对结肠癌细胞凋亡的诱导作用

目的 观察188Re 抗CEA单抗C5 0放射免疫治疗 (RIT)对结肠癌细胞的凋亡诱导作用 ,探讨RIT的抗肿瘤作用机制。方法 BALB/c小鼠结肠癌模型瘤内注射 18 5Mbp188Re C5 0 ,6h后以新鲜肿瘤组织块制备肿瘤单细胞悬液并采用流式细胞仪 (FCM )行倍体与S期细胞比例检测 ;取肿瘤组织固定后行透射电镜观察与原位末端标记法 (TUNEL)检测。结果 RIT治疗后 6hC2 6结肠癌细胞在用PI染色的FCM直方图上出现典型的凋亡峰 ,C2 6细胞凋亡百分比为 16 6 4 % ,而对照组未见凋亡峰。肿瘤S期细胞比例为 10 4 1% ,对照组则为 33 14 %。肿瘤G0 G1期细胞比例为6 8 6 % ,对照组为 35 12 % ,治疗后G1期细胞呈现明显的阻滞现象 ;TUNEL检测肿瘤细胞出现凋亡改变 ,凋亡指数 (AI)为 2 6 4 % ,而对照组则无凋亡改变发生 ;电镜下癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变。结论 诱导结肠癌细胞凋亡是188Re C5 0抗肿瘤效应的重要作用机制。

^(153)Sm标记抗CEA单克隆抗体在荷人结肠癌裸鼠体内的放射性分布

目的以153Sm标记的抗CEA单克隆抗体对荷人结肠癌移植瘤裸鼠进行肿瘤定位显像的研究。为结肠癌早期诊断提供一种新方法,并为其临床应用提供实验依据。方法每只荷瘤裸鼠从尾静脉注射7.4 MBq/0.1 ml于注射后2、4、82、4 h行全身SPECT显像。于4、82、4 h分批处死裸鼠并测定分别在肿瘤、血液、心脏、肺等重要脏器单位重量的放射性比值(%ID/g).结果153Sm-CEA能够选择性地积聚于肿瘤组织,其摄取率高于153Sm-IgG,(P<0.05)。结论153Sm-AFP在荷人结肠癌裸鼠体内,对过度表达CEA的结肠癌具有集合力。为临床上结肠癌的诊断提供实验依据。

亲和素放大促排在抗CEA单抗二步法预定位放免显像中的实验研究

目的提高抗ＣＥＡ单抗二步法预定位放免显像的诊断效果。方法 荷人结肠癌裸鼠经尾静脉注射生物素化抗 ＣＥＡ单抗 １００μｇ，４８ ｈ后腹腔注射亲和素 ８０μｇ，０．５ ｈ再经腹腔注射１５３Ｓｍ标记的 ＳＡ ３．７ ＭＢｑ／１５μｇ（放大促排组）。以 二步法（生物素化ＣＥＡ单抗－１５３Ｓｍ标记链霉亲和素）和１５３Ｓｍ标记的ＣＥＡ单抗作为对照组。在注射放射性标记物后４ 和 ２４ ｈ进行体外 γ ＣＴ显像和体内标记物分布测定。结果亲和素放大促排组 ４ ｈ即见肿瘤部位浓聚放射性，而对照组 无明显显影。亲和素放大促排组瘤／血放射性比值在注药后 ４ ｈ和 ２４ ｈ分别为 １．５５±０．０５８和 ４．６２±１．０７６，高于对照组 （二步法组和直接标记法组分别为１．００４±０．２２１和２．０２８±０．３６７及０．２６０±０．０８４和０．８４７±０．３６８）。结论亲和素放大促排 能迅速降低血本底，提高靶／非靶（Ｔ／ＮＴ）放射性比值，缩短显像时间，改善显像质量。

胃肠道癌患者血清中抗癌胚抗原(CEA)抗体的检测及意义

目的：探讨循环中抗癌胚抗原（ＣＥＡ）特异性抗体的情况，评价ＣＥＡ及抗体的联合检测在胃肠道癌诊断中的作用。方法：用放免法检测血清中 ＣＥＡ含量，用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体，用竞争抑制法检测抗体的特异性。结果：胃肠道癌患者血清 ＣＥＡ含量升高者（≥１５ ｎｇ／ｍｌ）为 ３０．９％（２１／６８），抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为３５．３％（２４／６８），ＣＦＡ及抗 ＣＥＡ抗体的联合检测可使阳性率提高到５４．３％（３７／６８）；胃肠道良性疾病患者（多发性息肉、溃疡、胰腺炎等）血清ＣＥＡ升高者为３．３％（１／３０），抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为 ３．３％（１／３０）；健康对照组血清 ＣＥＡ升高者为 ０，抗 ＣＥＡ ＩｇＧ抗体阳性者为 ２．５％（１／４０）。结论：胃肠道癌患者血清中抗癌胚抗原（ＣＥＡ）抗体的检出率较高，这些抗体可作为胃肠道癌的一种肿瘤标志物。

人结直肠癌粘膜下注射^(125)I标记抗CEA单抗CL58放射免疫导向手术的研究

目的 探讨12 5I标记的抗CEA单抗 (monoclonalantibody ,McAb)CL5 8在结直肠癌放射免疫导向手术 (radioimmunoguidedsurgery,RIGS)中的应用价值。方法 将12 5I标记单抗CL5 8在纤维结肠镜直视下注射于 2 9例结直肠癌患者癌周粘膜下 ;给药后 3～ 14d行根治手术 ,术中使用手持式γ探测仪 (gamma detectingprobe ,GDP)对肿瘤、区域淋巴结、手术切缘等靶部位 (target,T)进行放射性检测 ,以正常肠壁为对照本底 (normaltissue,NT) ,以T/NT≥ 3为判别大肠癌、肠壁浸润及淋巴结转移的标准 ;全部标本行病理学检验 ;病理学阴性的淋巴结标本进行免疫组化染色寻找微转移灶。结果GDP探测判别肿瘤的灵敏度为 93 1% ,判别切缘的特异度为 95 5 %。RIGS判别淋巴结的灵敏度及特异度分别为 92 0 %、87 8% ,与临床判别相比差异有显著性意义 (χ2 =5 84,P <0 0 5 )。免疫组化证实RIGS能够检出部分病例中常规病理检验未发现的淋巴结微转移灶。结论 应用12 5I标记的抗CEA单抗CL5 8进行结直肠癌RIGS 。

抗CEA单抗-天花粉蛋白偶联物的研制及活性鉴定

应用SPDP化学偶联法,将天花粉蛋白通过二硫键交联与抗CEA单抗制备成免疫毒素,经Sepbadex G-150凝胶过滤和Blue Sepharose-4B离子梯度交换层析纯化,电泳鉴定显示这一免疫毒素纯度高,偶联蛋白克分子比合理。应用间接免疫荧光染色技术和ELISA法测定结果证明,其与CEA人结肠癌细胞(LoVo)具有特异结合反应,仍保留大部份原抗体活性。具有较好的导向性。体外毒性试验结果表明,免疫毒素对靶细胞(LoVo)有选择性的杀伤作用,50％细胞毒剂量(I.C50)为10^(-9)范围,比单用天花粉蛋白和天花粉蛋白与正常小鼠IgG-偶联物对靶细胞杀伤能力分别增强约150倍和2000倍,而对实验对照细胞(Hela)杀伤无增强作用。

^(131)I-抗CEA单抗在结肠癌模型及结肠癌患者体内的生物学分布

目的 观察１３１Ｉ抗ＣＥＡ单抗（Ｃ５０） 在结肠癌生物体内的生物学分布，评估１３１ＩＣ５０ 在机体内的导向作用及其稳定性。方法 采用改良氯胺Ｔ 法以１３１ＩＣ５０ 进行荷人结肠癌裸鼠及结肠癌患者体内生物学分布及肿瘤放免显像研究。每鼠腹腔内注射１３１ＩＣ５０ １００ μＬ（３ ７００ ｋＢｑ）。１，２ ，３ ，４ 和６ 天后显像并测定各脏器的放射性分布；每例结肠癌患者静脉注射１３１ＩＣ５０ １ ｍｇ （１６０ ＭＢｑ） ，４８ ～７２ 小时后采用单光子发射型计算机辅助断层仪（ＳＰＥＣＴ） 进行扫描显像，２ ～３ 天后于术中采集肿瘤及正常组织并检测其放射性分布。结果 荷人结肠癌裸鼠注射标记抗体后４８ 小时肿瘤区即有放射性浓聚，随着时间的推延，影像渐趋清晰，本底逐渐下降。第６ 天结束时，瘤／肠和瘤／血放射性计数比值（Ｔ／ＮＴ） 分别为１０－４０ ±０－６９ 和０－７０ ±０－０８ ，均达最大值。１３１ＩＣ５０ 在结肠癌患者体内不同组织的生物学分布则显示：１３１ＩＣ５０ 在瘤区明显集聚，Ｔ／ＮＴ 多数达５ 以上。显像结果清晰，血本底很低。结论 １３１ＩＣ５０ 在生物体内能与肿瘤抗原发生特异性结合，具有很好的导向性，且在内环境下稳定性?

CEA多表位融合蛋白在胃肠道肿瘤血清学诊断中的研究价值

目的以CEA多表位融合蛋白为抗原,即ozlf-86/87融合蛋白,检测胃肠道肿瘤患者血清中抗CEA抗体,鉴定融合蛋白的抗原性,为融合蛋白作为诊断抗原提供依据,为下一步动物免疫反应实验奠定基础。方法以CEA多表位融合蛋白作为诊断抗原,采用间接ELISA法,分别对收集的39例胃癌患者血清、25例结肠癌患者血清、30例慢性胃炎患者血清和30例健康对照者的血清中的抗CEA抗体进行检测,用方差检验分析胃结肠癌患者实验组和慢性胃炎、健康患者对照组血清抗体效价之间差异性。结果胃癌和结肠癌实验组与对照组血清抗体效价之间差异均有统计学意义(P<0.01)。对胃癌患者和结肠癌患者血清抗体的诊断敏感度分别为35.9%和44.0%,结论本实验通过工程菌表达纯化的CEA多表位融合蛋白具有很好的抗原性,对用于血清学诊断的研究有一定的可行性,对制备ELISA血清检测试剂盒提供了理论基础,为下一步免疫反应及抗CEA抗体的制备奠定基础。