抗CEA嵌合小分子抗体的构建与表达

目的构建表达抗 CEA小分子抗体 ,以利于放射免疫诊断及导向治疗。方法构建 CEA单链抗体基因 ,克隆入载体 p Kp L - 3a,在大肠杆菌中包涵体表达 ,EL ISA检测活性。将轻重链基因克隆入分泌型表达载体 p SCMH,在大肠杆菌中表达 ,EL ISA检测活性。将 CEA嵌合抗体的轻链和 Fd基因克隆入杆状病毒表达载体 p Ac U W5 1中 ,在 sf9细胞中分泌表达 ,EL ISA检测活性及测定产量 ,竞争抑制 EL ISA测定其识别的抗原表位。结果多种方法复性的包涵体及原核分泌表达的单链抗体未测到活性。昆虫细胞中表达的小分子抗体具抗体活性 ,产量为 1.7μg/m L,竞争抑制实验显示其与亲本鼠单抗 C5 0识别相同的表位。结论该 CEA抗体基因在大肠杆菌中不能表达出有功能的分子 ,而在昆虫细胞中表达了具活性抗体分子 ;某些抗体基因只有在真核细胞中才能表达出有功能的抗体分子。

抗CEA嵌合抗体在CHO细胞中的高效表达

目的为了在CHO-dhfr 细胞中高效表达有活性的抗人CEA鼠-人嵌合抗体。方法构建抗CEA嵌合抗体的真核高效表达载体,转染CHO-dhfr-细胞,通过加入 MTX进行基因扩增表达,获得高产细胞株。采用Western bolt、ELISA 、体内放射免疫实验等方法鉴定所表达的嵌合抗体的生物学特性。结果获得产量可达60 μg/ml的细胞株。Western blot、 ELISA、体内放射免疫实验证明所表达的嵌合抗体的确含人抗体的恒定区,并特异地与 CEA结合。结论成功地在真核细胞CHO-dh fr-中高效表达了抗CEA嵌合抗体,并具有良好的生物活性。

小鼠尾静脉注射^(125)I标记的抗CEA人鼠嵌合抗体rch24的药代动力学研究

目的探讨125I-rch24在小鼠体内的药代动力学过程。方法7只BABL/c小鼠,溴代琥珀酰亚胺(NBS)法标记的抗体125I-rch24尾静脉注射,于注射后不同时间尾根部取血,测定放射性计数,绘制血清除曲线,计算药代动力学参数。结果①125I与CEA人鼠嵌合抗体rch24结合,采用纸层析法测定的标记率为95.5%±02%;②标记抗体的放射化学纯度至14天后为92.6%,35天后为89.3%;③经计算机模拟,为双指数曲线,标记抗体的血液分布、清除符合二房室模型。结论正常小鼠尾静脉注射标记抗体125I-rch24后的药代动力学过程符合二房室模型,静脉注射适宜用于结肠癌放射免疫导向手术。