抗重组GST单克隆抗体的制备及其在融合蛋白纯化中的应用

目的制备抗重组GST的单克隆抗体(mAb), 并用来纯化重组GST融合蛋白。方法用含重组GST融合蛋白基因的pGEX4T -1质粒转化E.coli BL21，IPTG诱导GST融合蛋白表达，亲和层析和凝胶过滤法分离表达的重组GST融合蛋白。以此蛋白作为抗原，免疫Balb/c小鼠，按传统的杂交瘤技术制备mAb。将抗GST mAb经Protein A纯化后，与Sepharose 4B偶联。结果经3次亚克隆后，获得两株分泌抗GST载体特异性mAb的杂交瘤。采用该mAb对两种不同的GST融合蛋白进行亲和层析纯化后，经SDS-PAGE鉴定达到了商品化Glutathione-Resin的亲和层析纯化效果。结论用抗GST蛋白特异性mAb亲和层析纯化融合蛋白是一种经济、实用的方法，且可用于Glutathione-Resin亲和层析纯化后的二次纯化。