从人源性噬菌体抗体库分离出1株含有异常序列的抗HBsAg Fab克隆

曾从人源性噬菌体抗体库中筛选出１株抗人乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的Ｆａｂ克隆，为了筛选出新的抗ＨＢｓＡｇＦａｂ段，采用抗原屏蔽法，用已得到的Ｆａｂ段封闭相应的抗原决定基，对该抗体库进行了再次筛选，得到了１株新的人抗ＨＢｓＡｇＦａｂ段克隆，经序列分析发现其轻链可变区基因来源于Ｖκ１亚群和Ｊκ４基因，重链可变区基因来源于ＶＨ１亚群和ＪＨ４基因，但在ＶＨ第７７位和第７８位氨基酸残基之间出现了７个多余的氨基酸残基，经对基因数据库检索未能查到该序列的来源，但显然这段序列未影响抗体的抗原结合活性。

金属螯合亲和层析法对抗HBsAg Fab段的纯化

为了对大肠杆菌表达的Fab段进行简便有效的纯化,我们在Fab段表达载体上插入了一段编码六个组氨酸的DNA片段,使所表达的Fab段在Fd段的羧基端带有六个连续的组氨酸,通过金属螯合亲和层析法对大肠杆菌表达的Fab段进行纯化,利用不同pH梯度缓冲液洗脱,一步即可达到95%以上纯度的纯化.

抗HBS-碱性磷酸酶双功能抗体的分析及试用

采用Western Blot对表达产物进行分析鉴定,重组抗HBsAg-碱性磷酸酶双功能抗体非还原态分子量为200KD左右,显示其为有活性的双聚体;为了评价重组双功能抗体在临床检测中的应用价值,设计两种ELISA方法,测定其敏感度,并对75例临床标本进行检测,结果与现用试剂盒方法一致,说明其在HBsAg的临床检测中具有较好的应用前景.