抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1细胞毒活性检测方法的建立及其检测效果评价

目的:建立抗体偶联药物(antibody-drug-conjugate,ADC)抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)人源化单抗-MCC-DM1的细胞毒活性检测方法,并评价该药抗体偶联前后药物细胞毒活性的变化。方法:供试品为抗HER2-MCC-DM1原液及成品各3批,以抗HER2人源化单抗和抗HER2单抗-MCC-DM1标准品为参考品,利用CCK-8法、双荧光染色实验分别检测供试品和参考品对人乳腺癌BT-474细胞增殖的抑制作用,计算供试品相对百分效价,并比较抗体偶联前后该药细胞毒活性的改变;光学显微镜和荧光显微镜观察抗体偶联前后对BT-474细胞生存的影响。结果:抗HER2-MCC-DM1供试品及参考品在肿瘤细胞增殖抑制实验中均存在量效关系。3批原液和3批成品各经3次测定,对B7-474细胞增殖抑制活性的相对百分效价平均值在(92.50±8.80)%^(115.14±6.09)%,变异系数均小于15%。与抗HER2单抗原液相比,对应批次的抗HER2-MCC-DM1原液和成品各经3次测定,细胞增殖抑制活性平均值分别为偶联修饰前抗体活性的(326.72±21.58)%和(315.76±34.90)%。与偶联前抗体组相比,抗体偶联药物组细胞固缩和死亡明显增多。结论:所建立的体外细胞增殖抑制法可用于抗体偶联药物抗HER2-MCC-DM1的细胞毒活性检测,其重复性好、准确性高,可应用于ADC药物的质量控制及有效性评价。

T-DM1治疗HER-2阳性乳腺癌的研究进展

世界卫生组织2020年全球癌症统计结果显示〔1〕:乳腺癌(BC)发病率(11.8%)已赶超肺癌而居恶性肿瘤疾病发病率首位,且其死亡率(15.5%)亦居女性恶性肿瘤疾病死亡率首位。BC的发病风险随着年龄的增长而增加,老年BC患者发病率呈现逐年增长趋势〔2〕。BC的治疗及预后因分子分型的不同而存在较大差异,其中人表皮生长因子受体(HER)-2基因是BC重要的治疗靶点,也是公认的预后及疗效预测因子〔3〕,HER-2阳性BC占所有BC的15%~20%〔4〕,具有更高的淋巴结转移率及疾病复发率,通常预后较差〔5〕。故而,抗HER-2治疗对于HER-2阳性BC至关重要。目前,抗HER-2治疗靶向药物主要包括:小分子酪氨酸激酶抑制剂、大分子单克隆抗体及抗体药物耦联物(ADC)。恩美曲妥珠单抗(T-DM1)为ADC,已进行大量临床研究,并取得诸多优异的高质量循证医学证据,本文就T-DM1治疗HER-2阳性BC研究进展进行综述。

联合免疫治疗对肝移植大鼠移植肝组织学和外周血Th1/Th2细胞因子的影响

目的用抗CD-40L单抗加小剂量CsA联合免疫治疗肝移植大鼠受体,观察其生存时间?移植肝组织学和Th1/Th2细胞因子谱的变化。方法建立大鼠肝移植模型后,将动物随机分为4组。A组为同基因移植组,SD→SD;B组为同种异体移植组,SD→Wistar,不用任何免疫抑制治疗措施;C组,SD→Wistar,采用CsA处理;D组,SD→Wistar,采用CsA加抗CD-40L(CD-154)单抗处理。观察各组肝移植受体生存期和移植肝病理变化;用ELISA法检测外周血细胞因子水平。结果A,D组均可长期存活,B,C组生存时间分别为(13.8±2.4)d,(29.8±4.1)d;B,C组病理组织切片见中/重度急性排斥反应,D组移植肝组织损伤程度显著减轻,A组基本无排斥反应。B组血清IL-2和IFN-γ高于其余各组(P<0.05),C,D组IL-4,IL-10水平较B组有所升高(但P>0.05),尤其D组IL-10表达水平显著高于B组(P<0.05)。结论联合免疫治疗可有效抑制其急性排斥反应,延长大鼠肝移植受体的生存时间。Th2类细胞因子IL-4和IL-10的高水平表达与诱导移植耐受、抑制排斥反应有重要关系,它有助于大鼠肝移植受体和移植肝的长期存活。

抗体偶联药物抗HER2单抗-MCC-DM1质控方法的建立

目的:建立抗体偶联药物(ADC)抗人表皮生长因子受体-2(HER2)单抗-马来酰亚胺基-环己烷-1-羧化物(MCC)-美登素衍生物(DM1)(trastuzumab-DM1,T-DM1)的质控方法。方法:利用人乳腺癌BT-474细胞增殖抑制实验测定T-DM1的生物学活性;利用生物分子间相互作用分析核心技术(biomolecular interaction analysis core-technology,BIAcore)测定其结合常数(KD);利用HER2抗原和抗DM1抗体双夹心酶联免疫法(ELISA)对T-DM1进行鉴别;利用液质联用法和紫外分光光度法测定药物抗体偶联比(DAR);利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定游离药物DM1的含量;利用十二烷基磺酸钠-毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和分子排阻色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SE-HPLC)分析纯度;利用成像毛细管等点聚焦电泳(i CIEF)分析电荷异质性,其他各项指标均符合现行版中国药典的要求及其他相关要求。结果:T-DM1生物学活性相对效价为(94.04±2.60)%,KD为(1.03±0.02)E-9 mol·L-1,RSD均小于5%;ELISA鉴别为阳性;液质联用法和紫外分光光度法测得的DAR分别为3.21及3.25;RP-HPLC法测定游离药物DM1的含量为(0.822 2±0.050 5)%,RSD小于10%;非还原CE-SDS主峰面积为(96.63±0.07)%,RSD为0.07%;SE-HPLC主峰面积为(97.65±0.005 8)%,RSD为0.005 8%;i CIEF分析可以将每个偶联数的抗体药物分开,达到很好的鉴别。结论:建立ADC中T-DM1质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为我国ADC的质量检测提供了参考依据。

抗CD-40L单抗加小剂量、短程CsA对肝移植大鼠生存期和Th1／Th2平衡偏移的影响

目的采用抗CD-40L单抗加小剂量CsA的联合免疫治疗，观察其对大鼠肝移植受体生存时间和Th1／Th2细胞因子谱变化的影响。方法在建立稳定大鼠肝移植模型的基础上，将整个实验分为4组。A组（同基因对照组）：SD→SD；B组（同种异体基因免疫排斥组）：SD→Wistar，不用任何治疗措施；C组：SD→Wistar，CsA应用d1～d5；D组：SD→Wistar，CsA应用d1～d5加抗CD-40L（CD-154）单抗应用d0、d2。观察各组大鼠肝移植受体生存时间，移植后第7天用ELISA法检测外周血细胞因子水平。结果A组、D组受体大鼠均可长期存活，B组生存时间仅为（13．8±2．4）d。IL-2、IFN-γ在B组的血清水平显著高于其余各组（P〈0.05），TNF-α在B组的表达水平高于不同免疫抑制组，但差异无显著统计学意义。IL-4、IL10较A组均有所增加，尤其D组的IL-10表达水平较B组显著增高（P〈0.05）。结论抗CD-40L单抗加小剂量CsA（伴或不伴DSBT）联合免疫治疗，可有效延长大鼠肝移植受体的生存时间，Th2类细胞因子的高水平表达与诱导移植耐受、抑制排斥反应有重要关联，有助于大鼠肝移植受体和移植肝的长期存活。

抗体-药物偶联药物的研究进展

抗体-药物偶联物(ADC)也称为免疫偶联物,属于靶向抗肿瘤药物,由药物、抗体以及偶联抗体和药物的连接物所组成。当抗体和肿瘤细胞表面的抗原特异性结合时,抗体-药物偶联物可将药物成功释放到肿瘤细胞特定部位。本文主要概述抗体-药物偶联物的作用机理、分类以及相关药物的临床进展并重点介绍最新上市的药物曲妥珠单抗-美登木素I(T-DM1,Kadcyla)。