黄芩、猫眼草、连翘单味中药体外抗HIV-1病毒活性的研究

目的:构建抗人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)-1假病毒药物筛选平台,在此基础上观察黄芩、猫眼草、连翘单味中药对HIV假病毒感染MAGI-CCR5细胞系的影响,评价其抗病毒作用。方法:选用重组质粒PLAI(含HIV包膜蛋白基因)和重组质粒JRFC(含HIV骨架基因)共转染293T细胞制备假病毒,建立假病毒筛选平台;采用MTT法检测药物对MAGI-CCR5细胞增殖的影响,筛选出对细胞无毒性的最合适浓度。通过药物体外对假病毒感染MAGI-CCR5的抑制实验,观察3种单味中药水煎液体外抗HIV-1病毒的活性。结果:3种单味中药均有体外抗HIV假病毒作用,且抗病毒作用与药物质量分数呈明显的剂量效应关系,2.17 mg/L黄芩、3.45 mg/L猫眼草、2.50 mg/L连翘表现出最高抑制率,依次是41.87%、37.38%、14.12%。结论:单味中药黄芩、猫眼草具有较好的体外抗HIV病毒的作用,连翘的抗HIV病毒作用相对较弱。

四个小檗碱类化合物的体外抗HIV-1活性

目的:研究小檗碱和巴马汀母核上己基的引入对化合物抗HIV-1活性的影响,并比较结构相似的小檗碱和巴马汀抗HIV-1活性的差异。方法:考察4个化合物对重组HIV-1RT活性、HIV-1复制和细胞毒性的影响。结果:小檗碱和巴马汀有较强的体外抑制HIV-1重组逆转录酶活性,EC50分别是63.1和44.52μg.mL-1;己基巴马汀有一定的抗HIV-1活性,合胞体抑制的EC50是0.08μg.mL-1,治疗指数为11.38;巴马汀对各种细胞系的细胞毒性较其他3种化合物小。结论:己基巴马汀有一定的抗HIV-1活性,己基的引入可能改变了其作用机制,提示构效关系的研究将为寻找高效低毒的天然化合物提供实验依据。

乌药茎中鞣质类成分及其抗HIV-1整合酶活性研究

目的 研究樟科药用植物乌药 [Linderaaggregata (Sims)Kosterm .]的抗HIV 1整合酶的活性成分。 方法 采用 6 0 %丙酮冷浸提取 ,通过反复SephadexLH 2 0和MCI gelCHP 2 0P柱色谱从乌药茎中分离缩合鞣质类化合物 ,通过波谱解析和理化常数进行结构鉴定 ,采用MIA法进行抗HIV 1整合酶活性筛选。结果 分离得到 3个寡聚缩合鞣质类化合物 :二倍体 pro cyanidinB1(LA 1) ,三倍体cinnamtaninB1(LA 2 )和四倍体cinnamtanninB2 (LA 3)。活性筛选结果表明 ,寡聚缩合鞣质具有抗HIV 1整合酶的活性。结论 寡聚缩合鞣质是乌药茎抗HIV 1整合酶的主要活性成分 ,四倍体cinnamtanninB2 (3)

点柄乳牛肝菌子实体中抗HIV-1活性成分

目的研究点柄乳牛肝菌的化学成分,并对分离鉴定的化合物进行抗HIV-1的活性研究。方法将野外采集的点柄乳牛肝菌子实体用溶剂提取,采用硅胶柱色谱进行分离,通过波谱技术(NMR,MS,IR等)对结构进行鉴定。结果分离鉴定了9个化合物,分别为:酒渣碱(Ⅰ)、5α,8α-过氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(Ⅱ)、麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇(Ⅲ)、麦角甾-5,7,22-三烯-3β-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)、尿嘧啶(Ⅴ))、硫代乙酸酐(Ⅵ)、硬脂酸(Ⅶ)、3-吡啶甲酸(Ⅷ)和D-阿洛糖醇(Ⅸ)。结论化合物Ⅰ为首次从高等真菌中分离。经生物活性测试,该化合物具有抗HIV-1活性,对C8166细胞的毒性较小,CC50为87.86μg/mL,对HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体抑制的EC50为7.27μg/mL,治疗指数(TI值)为12.09。

新型抗HIV-1蛋白GRFT的构建、表达及活性研究

根据已知的新型抗HIV-1蛋白Griffithsin(GRFT)基因氨基酸序列,推测其DNA编码序列,对密码子优化及修饰后进行全基因化学合成,连接到原核表达载体pET28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,获得目的蛋白.SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,目的蛋白得到良好表达并具有抗原活性.对表达条件进行了优化,在最佳表达条件下,目的蛋白的表达量可占菌体总蛋白的55.84%.利用Ni2+-NTA柱亲和层析法进行目的蛋白的复性和纯化,凝胶成像系统扫描分析表明,其纯度可达94.06%.运用Dot-ELISA法进行复性蛋白的抗原结合活性检测发现,目的蛋白可与HIV-1膜蛋白抗原特异性结合,初步证明所表达的重组蛋白具有良好的体外结合活性.基于制备的能够表达HIV-1 gp120基因的靶细胞模型,运用IFA法开展目的蛋白的细胞结合活性研究,结果发现,目的蛋白能够与靶细胞发生特异性反应,表明成功制备了具有生物活性的新型抗HIV-1蛋白GRFT,为进一步研制新型抗HIV-1基因工程药物及其靶向治疗制剂奠定了基础.

蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性及机制的初步研究

目的研究蒲葵籽提取物的体外抗HIV-1活性,对有活性粗提物进行初步机制研究。方法采用细胞毒性、合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护实验和HIV-1 p24抗原测定等实验对蒲葵籽提取物体外抗HIV-1活性进行筛选和确认;采用重组HIV-1逆转录酶和蛋白酶活性抑制实验,融合阻断实验初步探讨活性粗提物的作用机制。结果蒲葵籽的醋酸乙酯(P3)提取物具有较强的体外抗HIV-1活性,P3抑制HIV-1诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为5.64μg/mL,对C8166细胞的毒性较小,CC50大于200μg/mL,治疗指数(TI)大于35.46;P3抑制HIV-1急性感染中p24抗原表达的EC50为23.04μg/mL,抑制正常C8166细胞与慢性感染细胞H9/HIV-1 B融合的EC50为8.00μg/mL;P3在质量浓度为200μg/mL时,对HIV-1逆转录酶的抑制率为28.86%;P3抑制重组HIV-1蛋白酶活性的EC50为1.77μg/mL。结论蒲葵籽的醋酸乙酯提取物(P3)具有较强的体外抗HIV-1活性,其作用机制可能主要为阻断病毒进入和抑制HIV-1蛋白酶活性。

海藻硫酸多糖及其抗HIV-1活性

自1981年美国发现第一例艾滋病(AIDS)患者,向WHO报告的临床病例现已超过几十万,据Piot1998年统计病患者平均每天以16000人数增加[1].

抗HIV-1 gp41合成多肽C34单抗的制备及生物学活性

目的制备针对C34和C46单抗, 并以此为工具研究gp41表位,进一步 了解HIV-1包膜蛋白的作用机理和病毒的感染机制,为寻找新的治疗靶点提供抗体工具。 方法常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗C34与C46的单克隆抗体,并鉴定其 特异性位点，还用ELISA法、MTT法及荧光分子探针技术对单抗的生物学活性进行研究。结果获得了3株抗C34单克隆抗体、2株抗C46单抗。此5个单抗均与C34结合 , 并抑制N36肽与C34肽复合物的形成；其中效价最高的1G1对H9/HIVⅢB细胞的生长有刺 激作用 ,对H9/HIVⅢB细胞和MT-2细胞的融合无明显影响。结论得到5株 可与C34反应,并可抑制C34与N36多肽结合的单抗, 其中1G1所识别的表位可能为增强性或刺激性表位。

刺头复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-1蛋白酶活性的研究

目的对鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物刺头复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-1蛋白酶活性进行研究。方法用荧光光度法测定蛋白酶的半数抑制浓度(IC50)。结果刺头复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物抑制HIV-1蛋白酶的半数有效浓度IC50分别为0.73,1.17,2.47μg/ml。结论刺头复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物与水提取物具有体外抑制HIV-1蛋白酶活性。

d4T核苷酸类似物抗HIV-1活性的定量构效关系

对 2 0个核苷酸类化合物 (d4T的衍生物 )进行了定量构效关系研究 ,建立QSAR方程。模型指出该类化合物的抗HIV 1活性与nM、lgP、(lgP) 2 及分子连接性指数6χvP 具有良好的相关性 ,其复相关系数R为 0 94。由方程可知 :6χvP 在抗HIV 1过程中比电子参数σ发挥更大的作用。

抗HIV-1活性的大环多胺类化合物与RNA的识别作用及其对细胞凋亡的影响(英文)

研究了具有抗HIV 1活性的大环多胺类化合物与RNA的识别作用 ,以及其对cos 7细胞凋亡的影响 ,以进一步探讨其抗HIV 1的作用机理 .实验采用琼脂糖凝胶电泳方法 ,观察化合物与RNA的识别作用 ;通过流式细胞计数法探讨其对cos 7细胞凋亡的影响 ;运用计算机分子模型 ,从理论上Docking计算化合物与TARRNA结合的可能性 .结果表明 ,大环多胺类化合物MP 1、MP 2和MP 3不仅具有断裂RNA的作用 ,并可抑制Tat RNA的相互作用 ,还可影响cos 7细胞亚二倍体的含量 ;理论化学计算数据与实验结果基本一致 .这一结果提示化合物的抗HIV 1活性可能通过作用于病毒基因组RNA而发挥作用 ,是多靶作用的结果 .

青果氯仿提取组分抗HIV-1活性及其作用机制的研究

目的：用高速逆流色谱法从青果氯仿萃取液中分离出不同组分，考察其抗HIV-1的活性及初步探讨其作用机制。方法：青果的氯仿萃取液用高速逆流色谱法分离出各组分；利用HIV-1假病毒检测各组分抑制HIV-1感染的活性；XTT比色法检测各组分对细胞的毒性；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）研究各组分体外抗病毒活性的机理。结果：青果氯仿萃取液能抑制HIV-1JRFL假。结论：病毒感染活性；用高速逆流色谱法从青果氯仿萃取液中分离。

TIBO类衍生物抗HIV-1活性的QSAR研究

在分子图邻接矩阵的基础上,定义并计算了TIBO类衍生物原子的点价值iδ,利用图论方法建构了新的分子连接性指数mE,基于多元回归技术发展了对TIBO类衍生物药物的活性参数作出精确估算的定量结构-活性相关关系,得到的多元回归方程为:P=-274.563 80E-1+65.530 61E-1-149.681 6Jx-'1+26.084 7计算结果表明,抗H IV-1活性参数的计算值和实验值的一致性令人满意。

毛细管区带电泳法测定4种抗HIV-1活性的化合物与牛血清白蛋白的结合常数

采用毛细管区带电泳紫外检测方法,在pH8 0、浓度50mmol/L的磷酸盐缓冲溶液及运行电压15kV的条件下,测定了4种新合成的具有抗HIV 1活性的化合物(IG3,iso C3,C3,MC3)与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的结合常数。在缓冲溶液中加入不同浓度的BSA,通过测定化合物迁移时间的变化,计算得到了上述4种化合物与BSA的结合常数分别为1 07×104,1 34×104,8 51×103和9 45×103L/mol。该方法简单、快捷,可用于研究结合比为1∶1的小分子与生物大分子的相互作用。

扶芳藤提取物抗HIV-1活性初步实验研究

目的观察扶芳藤15%乙醇提取部位的抗HIV-1作用,为寻找新的有效治疗艾滋病药物提供依据方法以TZM-bl-HIV-1ⅢB系统和MT2-HIV-1ⅢB系统为实验模型,使用荧光素酶活性检测试剂检测病毒复制水平,ATP法检测不同浓度扶芳藤提取物作用下细胞的相对活力;通过酶标仪检测化学发光信号,计算相对病毒水平和相对细胞活力结果扶芳藤提取物在TZM-bl-HIV-1ⅢB系统和MT2-HIV-1ⅢB系统中,可在较大浓度范围对病毒感染产生抑制作用,而不对细胞造成较大毒性,因此该提取物为扶芳藤抗HIV-1中药有效部位结论扶芳藤15%乙醇提取部位,抗HIV-1效果明显,为今后深入研究其药用价值和临床意义提供了更为有力的理论基础.

云南松松塔提取物体外抗HIV-1活性初步研究

目的研究云南松松塔提取物(C:醇提水沉后经碱提酸沉法得到的沉淀;D:滤液1倍醇沉得到的沉淀;F:滤液2倍醇沉过滤后再5倍醇沉得到的沉淀;H:醇提水沉后水溶液五倍醇沉得到的沉淀)体外抗HIV-1活性,明确云南松松塔提取物活性组段。方法采用细胞毒性实验、合胞体形成抑制实验、HIV-1感染细胞保护实验筛选云南松松塔提取物体外抗HIV-1活性组段。结果云南松松塔提取物对C8166细胞毒性小,其CC50均大于5000μg·ml-1;云南松松塔提取物C、D、F、H抑制C8166细胞合胞体形成的EC50分别为232.59,56.46,47.44,1687.72μg·ml-1。云南松松塔四个提取物对MT4细胞毒性小,均大于1000μg·ml-1,在1000μg·ml-1时,云南松松塔提取物对HIV-1感染的MT4细胞的保护率分别为(42.39±0.36)%、(15.94±6.15)%、(29.86±3.41)%、(14.98±10.75)%。结论云南松松塔提取物C、D、F均有体外抗HIV-1活性;云南松松塔提取物H无体外抗HIV-1活性;云南松松塔四个提取物对HIV-1感染MT-4细胞保护作用弱。

芒果叶提取物体外抗HIV-1活性研究

目的探讨芒果叶提取物的体外抗人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)活性,为研究与开发传统中医药资源治疗获得性免疫缺陷综合征(AIDS)提供参考。方法通过三磷酸腺苷(ATP)法评估干预药物对TZM-bl细胞和MT-2细胞活性的影响。构建TZM-bl-HIV-1_(ⅢB)、MT-2-HIV-1_(ⅢB)两种细胞-病毒感染模型,通过荧光素酶活性检测试剂检测病毒活性,评估干预药物的抗HIV-1活性。观察MT-2-HIV-1_(ⅢB)细胞系统中芒果叶提取物对细胞病变效应(CPE)的抑制情况。计算芒果叶提取物的半数毒性浓度(CC_(50))、半数抑制浓度(IC_(50))和选择指数(SI)。结果在TZM-bl-HIV-1_(ⅢB)和MT-2-HIV-1_(ⅢB)两种细胞-病毒感染模型中,芒果叶提取物均显示出抗HIV-1活性,且呈现剂量依赖性。在TZM-bl-HIV-1_(ⅢB)模型中,芒果叶提取物的CC_(50)为(320.00±29.44)μg/ml,IC_(50)为(8.86±0.26)μg/ml,SI为36.14。在MT-2-HIV-1_(ⅢB)模型中,芒果叶提取物CC_(50)为(174.13±22.36)μg/ml,IC_(50)为(15.23±9.99)μg/ml,SI为11.44。结论芒果叶提取物的体外细胞毒性小,抗HIV-1活性显著,具有潜在的开发利用价值。

匹伐他汀联合用药体外抗HIV-1活性研究

目的研究他汀类药物体外抗人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)活性并评价匹伐他汀与其它抗HIV药物联合使用时的抗病毒活性。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定他汀类药物对C8166细胞的毒性作用;合胞体计数检测他汀类药物对实验株HIV-1_(IIIB)诱导C8166细胞病变的抑制作用;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定HIV-1 p24抗原检测他汀类药物对实验株HIV-1_(IIIB)急性感染C8166细胞中病毒复制的抑制作用以及匹伐他汀与其它抗HIV药物联合用药的联合效应。结果他汀类药物中匹伐他汀具有显著体外抗HIV-1活性,匹伐他汀与核苷类逆转录酶抑制剂(替诺福韦、恩曲他滨、拉米夫定、齐多夫定)和蛋白酶抑制剂(茚地那韦和达芦那韦)联合用药时,药物间呈现协同作用;与非核苷类逆转录酶抑制剂(依曲韦林)联合用药时,药物间呈现拮抗作用;与整合酶链转移抑制剂(雷特格韦和度鲁特韦)联合用药时,药物间呈现相加作用。结论匹伐他汀除与依曲韦林联合时药物间呈现拮抗作用外,与其它抗HIV药物联用均呈现相加或协同作用。

苦豆碱的体外细胞毒性以及抗HIV-1活性实验研究

目的探讨单体化合物苦豆碱的体外细胞毒性以及抗HIV-1活性作用,为寻找新的艾滋病治疗药物提供依据。方法以TZM-bl-HIV-1_(IIIB)系统和MT-2-HIV-1_(IIIB)系统为实验模型,用不同稀释度的苦豆碱溶液分别与TZM-bl细胞、MT-2细胞共同培养。采用ATP细胞活力检测试剂检测细胞的相对活力,观察苦豆碱对TZM-bl细胞、MT-2细胞的毒性作用;用HIV-1_(IIIB)感染TZM-bl细胞和MT-2细胞,利用基于TZM-bl细胞的荧光素酶检测试剂,检测HIV病毒相对水平,观察苦豆碱抑制HIV-1活性的作用。结果在TZM-bl-HIV-1_(IIIB)系统中,苦豆碱对TZM-bl细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50))> 215. 183μM,苦豆碱对HIV-1_(IIIB)的半数抑制浓度(IC50)为3. 403μM,治疗指数(TI)> 63. 2。在MT-2-HIV-1_(IIIB)系统中,苦豆碱对MT-2细胞的CC_(50)为802. 000μM,对HIV-1_(IIIB)的IC_(50)为47. 190μM,TI为> 16. 9。结论苦豆碱毒性小,抗HIV-1活性明显,具有潜在的开发利用价值。

抗HIV-1活性化合物作用靶点的快速判断方法

目前，艾滋病的防治工作主要依靠抗HIV-1药物，临床使用的抗HIV药物主要是逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂和整合酶抑制剂。逆转录酶抑制剂包括核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI），如Zidovudine（AZT）、Lamivudine（3TC）、Emtricitabine（FrC）等，非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI），如Efavirenz（EFV）、Nevirapine（NVP）、Delavirdine（DLV）等。蛋白酶抑制剂主要有Ritanovir（RTV）、Saquinavir（SQV）、Indinavir（IDV）等。