抗HIV-p24单克隆抗体细胞株的建立及初步应用

拟建立抗HIV-p24蛋白的单克隆抗体细胞株及双抗体夹心法,用于检测艾滋病病人血清中的p24抗原。用纯化的基因工程表达的HIV-p24蛋白免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞和小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,有限稀释法克隆细胞,ELISA筛选特异性抗体。结果克隆筛选出12株细胞,初步建立了检测HIV-p24抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验。本方法为监控艾滋病病毒感染的窗口期和艾滋病病人临床治疗效果提供了检测手段。

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,在PEG1000作用下,与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个月稳定传代,冻存于液氮中,复苏后其分泌抗体的水平未见下降。

抗猪囊虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

目的 :培养、筛选和克隆鼠源杂交瘤细胞株 ,生产相应特异的针对猪囊虫的单抗并用于临床。方法 :用含有弗氏不完全佐剂和 1单位IFN的猪囊虫囊液皮下注射免疫 7周龄小鼠 3次后 ,无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2 / 0 ,在含有5 0 %PEG(分子量 4 0 0 0 )的HAT培养液中进行融合 ,在 37℃ ,含 7%CO2 的培养箱中培养 ,随后在正常培养液中进行筛选和克隆化。染色体分析用常规的中期染色体法 ,单抗类型的滴度测定用ELISA法。结果 :用常规的有限稀释法对杂交瘤进行 3次筛选和克隆化后获得 3株杂交瘤细胞株 2H10、5C2和 5H6 ,分别有 97、98和 10 6条染色体 ,均能稳定地分泌各自特异的单抗。 2株单抗为IgG类 ,另 1株为IgM类 ,滴度分别为 1∶10 0 0、1∶80 0和 1∶16 0 0。结论 :用杂交瘤技术 ,我们获得了 3株杂交瘤细胞株 。

分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体细胞株的建立及其特异性

应用细胞杂交瘤技术建立了分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体1D_1、1C_2和1D_6细胞株,连续传代11个月,稳定地分泌单克隆抗体。用间接免疫荧光方法检测,这三株细胞分泌的单克隆抗体与急性非淋巴细胞白血病M_2型病人的白血病细胞呈阳性反应;与急性非淋巴细胞白血病M_1、M_3、M_4、M_5型病人白血病细胞呈阴性反应;与慢性粒细胞白血病、慢粒急变,急性淋巴细胞白血病病人白血病细胞呈阴性反应;与正常人白细胞也呈阴性反应,说明建立的细胞株分泌的单克隆抗体具有型的特异性。

乙型肝炎病毒核糖核酸酶H(HBV-RNaseH)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗乙型肝炎病毒核糖核酸酶H1及H2(HBVRNaseH1及H2)重组蛋白单克隆抗体(McAb),并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组HBVRNaseH1及H2蛋白为抗原免疫BALB/c/小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经有限稀释克隆3次后制备分泌McAb的杂交瘤细胞株,并用酶免疫(EIA)法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出4株能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株,命名为H1C6、D3;H2E2、F4。这4株McAb与HBVRNaseH1及H2重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的EIA抗体滴度为1∶100～1∶200,其中2株诱生的同系小鼠腹水滴度为1∶800,1∶1000。这4株McAb均为IgG1亚型。结论该McAb的制备,可为HBV感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。

分泌抗Bt Cry1Ac蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

从苏云金芽孢杆菌HD-73中提取Bt Cry1Ac蛋白,电镜观察Bt Cry1Ac蛋白为标准的菱形.用SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞与经该Bt Cry1Ac蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,经3次克隆化,筛出两株稳定分泌Bt Cry1Ac单克隆的杂交瘤细胞株1C3、2F3.两株细胞均具有抗Bt Cry1Ac特异性,与Bt Cry1Ab和Bt Cry2A无明显的交叉反应,经亚型鉴定均为IgG1.腹水滴度均为1∶1024000.

抗PD-1单克隆抗体联合CIK细胞对肺癌细胞株杀伤作用的研究

目的:研究程序性死亡受体1(program cell death-1,PD-1)单克隆抗体联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK cells)对肺癌细胞株的杀伤作用及相关机制,探究该治疗方法在肺癌治疗中的可行性。方法:患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)在体外采用多种细胞因子诱导为CIK,并用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CIK细胞的表型。培养A520及H1975肺癌细胞,利用FCM检测其表面HLA-ABC,HLA-A2,HLA-DR及PD-L1的表达情况。将CIK细胞和抗PD-1单抗Nivolumab单独或者联合作用于A520及H1975肺癌细胞。用ELISPOT法测定不同组γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)的释放,用CCK8法检测CIK细胞对肺癌细胞株的杀伤率。结果:CIK细胞对于肺癌细胞株的杀伤随着效靶比(effect target ratio,E∶T)的增加而加强;对于PD-L1高表达的肺癌细胞,Nivolumab与CIK细胞联合使用对肺癌细胞株的杀伤优于单一的CIK细胞及Nivolumab。结论:对于PD-L1高表达的A520肺癌细胞,PD-1单抗Nivolumab能够提升CIK细胞的杀伤作用,而对于PD-L1表达水平低的H1975细胞,Nivolumab不能提升CIK细胞的杀伤作用。

抗HIV核心蛋白p24单克隆抗体的研制及鉴定

抗ＨＩＶ核心蛋白ｐ２４单克隆抗体的研制及鉴定王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震（解放军农牧大学研究所病毒室，长春１３００６２）人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）是导致人获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的主要病原［１］。对ＨＩＶ１感染的诊断，常...

β_2糖蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,经硫酸铵沉淀及Protein G纯化MAbs。秋水仙素阻抑法鉴定杂交瘤细胞株染色体数目,ELISA测定滴度,Ig亚类试剂盒鉴定Ig亚类,Western blot鉴定特异性。结果:获得1株稳定分泌MAbs的杂交瘤细胞株β2,该杂交瘤细胞株的染色体数为99～108。进一步研究发现,其培养液和腹水滴度为1∶29和1∶215,其MAbs分类为IgG1/κ,Western blot显示纯化的MAbs及标准anti-β2GPⅠ与β2GPⅠ均有反应条带,具有较好的特异性。结论:成功获得并纯化β2GPⅠ单克隆抗体,为进一步研究β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ复合物在抗磷脂综合征中的作用奠定了基础。

脾内一次性免疫莸取抗人体肺癌单克隆抗体

用人体肺腺癌细胞(LAX)脾内一次性免疫BALB/C小鼠后,将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NSO)融合,融合率为80％,对LAX细胞反应阳性率为20％。以酶联免疫吸附试验,免疫荧光试验和免疫组织化学试验,检测其与正常人体细胞,人体肿瘤细胞和人体肺腺癌的反应,发现获得的ALA-05单克隆抗体与正常人体细胞无交叉反应,与多株人体其他肿瘤细胞也无反应,而与人体肺腺癌则呈阳性反应,且为抗膜抗体。免疫扩散法证明其是IgG_(2a)。

一株高滴度广谱抗HFRS病毒单克隆抗体的建立

本文用抗原上有些不同的肾综合征出血热(HFRS)病毒湖北毒株HA1018免疫BALB／c小鼠，与Sp2／0细胞融合，获得分泌抗HFRS单克隆抗体(MCAb)的杂交瘤E5细胞株。McAbE5为IgG1亚类，间接免疫荧光(IFA)测定腹水抗体滴度可达1：100万。

用合成多肽制备抗胰蛋白酶原激活肽单克隆抗体的研究

目的建立以合成的小分子肽胰蛋白酶原激活肽制备单克隆抗体(mAb)的技术路线。方法以合成多肽TAP与载体KLH交联的偶联物为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术建立能稳定分泌抗TAPmAb的杂交瘤细胞株。结果共获得10株能稳定分泌TAPmAb的杂交瘤细胞株,经稳定性试验,对其分泌的mAb进行效价测定、中和抑制试验、特异性鉴定,均表明所制备的杂交瘤细胞株稳定性好,其所分泌的mAb效价高、特异性好。结论利用合成多肽TAP成功制备了抗TAP单克隆抗体。

民主德国研制成功抗艾滋病病毒的人单克隆抗体

在柏林洪堡大学charite医院临床免疫研究所所长Rudiger Von Bachr教授领导下的研究小组首次研制出了抗艾滋病病毒(HIV-virus)的人单克隆抗体。这种抗体是一种抗HIV

抗ssDNA单抗免疫组化法用于检测肿瘤细胞株对化疗药物敏感性的研究

目的 :应用本室制备的抗单链DNA (ssDNA)单克隆抗体(mAb) ,检测多种化疗药物对不同肿瘤细胞株凋亡的诱导作用 ,并根据凋亡率判断肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法 :用血浆峰值浓度 (PPC)的 9种化疗药物 ,分别诱导肿瘤细胞株K5 6 2和Hep 2的凋亡。用抗ssDNAmAb免疫组化染色法 ,检测肿瘤细胞株的凋亡并计算调亡率。结果 :以抗ssDNAmAb建立的检测细胞凋亡的免疫组化法 ,能够区分凋亡细胞和非凋亡细胞。该法检测证明 ,化疗药物可诱导敏感肿瘤细胞株凋亡 ,但不同化疗药物诱导同一肿瘤细胞株或不同肿瘤细胞株凋亡的程度不同。结论 :抗ssDNAmAb免疫组化法 ,可用于检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

激活脐血单个核细胞体外抗白血病细胞株活性研究

目的 探讨植物血凝素 (PHA)、白细胞介素 2 (IL 2 )、抗CD3单克隆抗体 (αCD3Ab)激活的脐血单个核细胞 (CBMC)体外对K562的杀伤活性 ,以及外源性刺激因子对CBMC的可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)含量的影响。方法 采集CBMC分别与不同刺激因子体外短期培养 ,台盼蓝拒染法测效应细胞的增殖能力 ,ELISA法检测上清液中sIL 2R的含量 ,3 H TdR释放法测定效应细胞体外对K562靶细胞的杀伤活性。结果 脐血PHA CD3AK细胞在体外培养 3d后增殖倍数、活化后上清液中sIL 2R的含量显著高于PHA LAK ,CD3AK和LAK细胞 (P <0 .0 5)。PHA CD3AK细胞体外对白血病细胞株K562细胞的细胞毒活性明显高于PHA LAK ,CD3AK和LAK细胞 (P <0 .0 5)。结论 脐血单个核细胞经PHA ,IL 2和αCD3Ab激活后 ,可有效形成PHA CD3AK效应细胞 ,其增殖活性、细胞毒性均高于PHA LAK 。

抗视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb_(50)单克隆抗体相应抗原的提取

目的 从 SO- Rb50 细胞中提取出抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体相应的抗原。 方法 用离子交换层析法从 SO- Rb50 细胞中初步分离抗原 ,并利用抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体以 dot blotting鉴定抗原 ,然后以十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化出抗原目的蛋白条带 ,用 Westein blotting检测其相对分子质量。 结果 从 SO- Rb50 细胞裂解液的总蛋白中分离出一条抗原目的蛋白条带 ,其相对分子质量约为 83× 10 3。 结论 从 SO- Rb50 细胞裂解液中能够提取出抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体对应的抗原。

人膀胱癌T24细胞及其SCID小鼠移植瘤组织中KDR的表达

目的 检测KDR在人膀胱癌T2 4细胞及其SCID小鼠移植瘤组织中的表达。方法 常规培养T2 4细胞 ,建立荷人膀胱癌移植瘤SCID小鼠动物模型 ,使用抗KDR单克隆抗体 ,通过免疫荧光、免疫组化检测KDR在T2 4细胞及瘤体组织上的表达 ;结果 KDR在T2 4细胞及瘤体组织上均呈阳性表达。结论 本研究结果为进一步研究抗KDR单抗在荷T2

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备SARS冠状病毒 (SARS CoV)N蛋白特异性单克隆抗体 (McAb) ,为SARS的快速诊断及致病机制的研究提供实验材料。方法 用纯化的重组SARS CoVN蛋白免疫BALB c小鼠 ,经细胞融合和亚克隆后获得分泌针对N蛋白的杂交瘤细胞株 ,用Westernblot和间接免疫荧光法检测这些细胞株分泌的单克隆抗体特异性 ,并将N蛋白分 3段表达初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。结果 通过细胞融合和 3轮克隆化 ,筛选出分泌抗N蛋白的 6个杂交瘤细胞株。Westernblot及免疫荧光显示 ,获得的McAb可与SARS CoVN蛋白及SARS CoV发生特异性反应 ,有 4个细胞株分泌的抗体的识别位点位于N蛋白N端 ,2个位于C端。结论 获得了SARS CoV特异性单克隆抗体并进行了初步定位 。

天然属性的抗角蛋白单克隆IgM抗体的制备

目的制备天然属性的抗角蛋白单克隆IgM抗体。方法取饲养在无特殊病原体条件下BALB/c小鼠的脾细胞,直接与SP2/0细胞融合。以提取的角蛋白抗原对阳性杂交瘤细胞生长孔进行ELISA筛选。采用免疫组化、免疫印迹技术对获得的抗体进行鉴定。结果不经任何免疫,细胞融合率为60%;14%的杂交瘤细胞生长孔上清液与角蛋白抗原结合;获得3株稳定分泌IgM型天然抗角蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。免疫组化结果初步显示天然抗角蛋白IgM可以和表皮、皮脂腺、毛囊、肌肉组织结合。结论正常小鼠脾脏内存在自发分泌天然抗角蛋白IgM的B淋巴细胞。