抗KDR3单克隆抗体的制备和生物活性的鉴定

目的:制备抗KDR3单克隆抗体,研究其阻断VEGF受体的作用。方法:将抗KDR3单克隆抗体腹水,采用ELISA酶免疫分析方法,测定其效价,提取ECV304细胞膜蛋白用Westernblot方法进行识别抗原的鉴定,并测定抗KDR3单克隆抗体的活性。结果:获得一株稳定分泌抗KDR3的杂交瘤细胞株,所产生抗体可阻断VEGF对人脐静脉内皮细胞系ECV304的刺激增生作用。结论:抗KDR中和抗体IMC-ICI和抗KDR3单克隆抗体同样对ECV304细胞都表现出对外源性VEGF有明显抑制作用,而且对内源性VEGF也有明显抑制作用。抗KDR3单克隆抗体在肿瘤治疗的过程中将起一定的作用。

抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体对IL-6信号分子调控浅析

目的:分析鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体[anti-IL-6Rβ(gp130)mAb]的生物学特性及对IL-6信号分子的调节作用。方法:利用Western blot、竞争性ELISA实验、功能表位结合实验,检测anti-IL-6Rβ(gp130)mAb的亲和力、效价及与gp130抗原表位结合特异性。进而探讨anti-IL-6Rβ(gp130)mAb对U266细胞、RA患者外周血单个核细胞(PBMC)及滑膜液单个核细胞(SFMC)增殖和分化中的IL-6信号分子的调控机制。结果:Anti-IL-6Rβ(gp130)mAb对gp130具有高亲和性(如10A1细胞株的亲和力常数可达为2.62E-10),所获得的多株单抗还具有针对不同抗原结合表位的特性,可用于分析和研究IL-6信号通路及下游STAT3的磷酸化。结论:获得针对不同抗原结合表位的anti-IL-6Rβ(gp130)mAb,初步的实验结果表明此类单抗不仅具有调控IL-6信号分子和下游STAT3磷酸化的生物学功能,并为解析临床RA的发病与IL-6信号分子的关联性提供了初步的实验结果。

抗CD44单克隆抗体A3D8对人白血病细胞系HL-60细胞增殖及分化的影响

目的 探讨抗CD4 4单克隆抗体A3D8对HL 6 0细胞增殖及分化的影响 ,寻找急性髓系白血病(AML)治疗的新靶点。方法 以AML细胞株HL 6 0为模型 ,通过观察细胞生长、形态学、表面分化抗原、细胞周期和细胞因子表达 ,以及应用硝基四氮唑蓝 (NBT)还原实验来研究抗CD4 4单克隆抗体A3D8对细胞增殖及分化的影响。结果 HL 6 0细胞高表达CD4 4 ;A3D8以浓度和时间依赖性方式抑制HL 6 0细胞生长。A3D8使HL 6 0细胞周期阻滞在G0 /G1期 ,CD11b、CD14表面抗原阳性率明显增高 ,细胞体积增大 ,核 /浆比例减小 ,核染色质聚集 ,NBT还原实验阴性 ,细胞表达粒细胞集落刺激因子mRNA ,呈现向单核细胞系方向分化。结论 A3D8可抑制HL 6 0细胞增殖 ,并诱导其向单核系细胞分化 ,CD4 4有可能成为AML治疗的新途径。

抗胸腺细胞球蛋白与抗CD3单克隆抗体治疗皮质激素耐药的急性移植物抗宿主病的疗效比较

目的 比较抗胸腺细胞球蛋白 (ATG)和抗CD3单克隆抗体联合大剂量甲基强的松龙 (MP)治疗皮质激素耐药急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的疗效。方法 11例异基因外周血干细胞移植的病患者 ,移植后发生Ⅲ～Ⅳ度aGVHD ,经大剂量MP治疗 3～ 9d无效后接受ATG(ATG组 )或抗CD3单克隆抗体 (WuT3组 )联合大剂量MP治疗。ATG 2 .5mg/ (kg·d) ,连续 5～ 7d ;WuT35mg/ (kg·d) ,10～ 14d后停药 ;MP 5mg/ (kg·d) ,aGVHD控制后逐渐减量。 结果 ATG组 :7例中 4例获完全缓解 (CR)、2例部分缓解 (PR)、1例无效 (NR) ,总有效率 85 .7%。WuT3组 :1例获CR、1例PR、2例NR ,1例获CR患者至今已存活 8个月 ,缓解后出现CMV阳性。 4例中有 3例治疗中合并感染。结论 ATG联合大剂量MP治疗皮质激素耐药aGVHD优于抗CD3单克隆抗体。早期ATG联合大剂量MP治疗激素耐药的aGVHD具有较高的疗效。

α－CD_3单克隆抗体对肿瘤特异性T细胞的扩增和杀瘤活性的影响

为寻找更有效的肿瘤过继性免疫治疗的方案，用α－ＣＤ３单克隆抗体（单抗）激活ＦＢＬ－３红白血病肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞获取肿瘤特异性Ｔ细胞，并观察α－ＣＤ３单抗对肿瘤特异性Ｔ细胞的增殖、杀瘤活性及表型的影响。体外实验结果显示，免疫小鼠脾细胞经α－ＣＤ３单抗激活后，采用低剂量ＩＬ－２即可维持其长期高度的、持续的增殖；又培养过程中α－ＣＤ３单抗持续存在可大大促进其对肿瘤的特异性杀伤。细胞分型分析结果也支持了α－ＣＤ３单抗的持续存在对维持肿瘤特异性Ｔ细胞的抗瘤活性具有很重要的意义，是肿瘤过继免疫疗法中颇有前景的治疗方案。

聚乙二醇修饰鼠抗人CD3单克隆抗体的研究

确定一条聚乙二醇化鼠抗人CD3单克隆抗体和抗体片段的制备工艺路线.以胃蛋白酶酶解并通过凝胶柱分离和纯化得到抗体Fab′,利用PEG-SPA修饰抗体和抗体片段Fab′上的氨基,通过体内和体外T细胞增殖实验,考查修饰后的抗体和抗体片段的免疫活性.较佳的修饰工艺条件为:在pH9.0硼酸缓冲液,反应温度25℃,抗体浓度0.2 mg/mL,抗体和聚乙二醇摩尔比为1∶20,反应3 h.修饰后抗CD3单抗全抗,对T淋巴细胞增殖抑制活性下降了32.28%,抗体Fab′下降了7.96%,PEG化Fab′下降了19.92%.利用聚乙二醇修饰抗体和抗体片段,提高了抗体半衰期,且无细胞毒性,活性损失较小,该技术具有较高的可行性,可极大的提高单克隆抗体尤其是非人源性抗体在临床上的应用.

抗CD3单克隆抗体重、轻链可变区基因的克隆及序列分析

目的 :抗CD3单克隆抗体 (WuT3)可变区基因克隆及序列分析。方法 :采用RT PCR技术 ,从WuT3杂交瘤细胞总RNA中扩增VH 、VL 片段 ,经酶切后通过链接反应构建重组克隆载体 ,测序鉴定。结果 :通过国际联机检索发现VH 、VL 基因与Ig同源 ,分别符合小鼠IgVH 、Vκ基因特征。VH 基因属于鼠重链VH 第IIB亚类 ,全长 36 3bp ,可编码 12 1个氨基酸 ;VL 基因属于鼠κ轻链第III亚类 ,全长 330bp ,可编码 110个氨基酸。结论 :成功获得WuT3单抗的重、轻链可变区基因。

抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备和活性检测

目的制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体,用以抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。方法采用常规免疫学方法制备抗抗CD3ScFv单克隆体并制备抗抗CD3ScFv单克隆抗体免疫亲和层析柱,用于抗CD3ScFv蛋白和去除E-tag的Diabody[CD3×Pgp]的分离纯化。采用FACS法测定分别经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱及抗E-tag亲和层析柱纯化的抗CD3ScFv蛋白和Diabody[CD3×Pgp]对K562/A02和Jurkat细胞特异结合活性。采用间接ELISA法进行抗抗CD3ScFv抗体特异性结合活性的检测。结果抗抗CD3ScFV单克隆抗体能特异性地与抗CD3ScFv蛋白结合而不与血清发生反应。经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱和经抗E-tag亲和层析柱纯化后的抗CD3ScFv蛋白均能与Jurkat细胞特异结合。经抗抗CD3ScFV抗体免疫亲和层析柱纯化的去除E-tag的Diabody[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合的阳性率分别为89.87%和83.95%;与其亲代抗体竞争结合K562/A02和Jurkat细胞后,结合率分别下降为56.30%和43.78%。结论制备了抗抗CD3单克隆抗体和亲和层析柱,可用于抗CD3抗体的亲和层析纯化及血清中该类抗体浓度的检测。

PHA、抗CD_3单克隆抗体、LI-2诱导牌细胞培养上清液抗肿瘤效应的研究

本文探讨了PHA、CD_3单克隆抗体、IL-2体外诱导正常人脾细胞培养上清液抗肿瘤效应及其对LAK细胞抗肿瘤效应的增强作用。结果显示，IL-2诱导脾细胞的培养上清液在体外不仅具有直接杀伤肿瘤细胞效应，并且能增强LAK细胞的抗肿瘤作用。PHA、抗CD_3单克隆抗体和IL-2联合刺激可增强脾细胞培养上清液杀伤肿瘤细胞效应。

抗人CD38分子单克隆抗体生物学功能研究

目的研究抗人CD38单克隆抗体(1C6)的生物学功能。观察1C6对多种肿瘤细胞系生长增殖的影响,利用不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应,观察抗人CD38单克隆抗体(1C6)在人外周血淋巴细胞增殖反应中的作用。方法以MTT法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能。利用抗人CD3单克隆抗体刺激人外周血淋巴细胞增殖、同种异型抗原诱导混合淋巴细胞反应,在加入或未加入抗人CD38单克隆抗体(1C6)的情况下,观察细胞形态并检测3H-TdR掺入量。结果加入不同浓度的1C6的实验组与对照组相比,多种细胞系的生长受到不同程度的抑制。不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应中,加入1C6的实验组细胞克隆明显减少,3H-TdR掺入量明显下降,细胞增殖受抑。结论1C6可抑制多种肿瘤细胞的生长,可介导补体杀伤多种靶细胞。1C6对抗CD3刺激的外周血淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养均具有明显的抑制效应。

ATG与抗CD3单克隆抗体在肾移植免疫诱导治疗中的比较研究

[目的]比较抗人体胸腺细胞球蛋白（ATG）与抗CD3单克隆抗体在肾移植免疫诱导治疗中的效果。[方法]对比分析应用ATG（77例）与抗CD3单克隆抗体（24例）进行免疫诱导治疗的肾移植患者的临床资料。[结果]ATG组与抗CD3单克隆抗体组在术后1年急性排斥反应发生率、透析过渡比例、早期移植肾功能恢复、年人／肾存活率方面无显著性差异，而ATG组药物不良反应及术后继发感染率显著少于CD3单克隆抗体组（P〈0．05）。[结论]身体一般情况较好的患者可以考虑用抗CD3单克隆抗体治疗，而耐受力较差或老年患者宜使用ATG治疗以策安全。

单克隆抗体OKT3在肾移植术后排斥反应中应用的护理体会

OKT3是一种鼠源性抗CD3单克隆抗体的强效免疫抑制剂，其临床主要适应症是肾移植术后难治性排斥反应，其他适应症包括：①抗急性排斥反应的初始治疗；②术后预防排斥反应的诱导治疗，尤其是术后早期肾功能延迟性恢复；⑧选择性用于多克隆抗体治疗期间产生抗马或者抗兔抗体患者的急性排斥反应。但是OKT3在临床使用中可能出现诸多的副作用。

肾移植术后应用抗CD3单克隆抗体的临床疗效

我院1998年6月至2008年8月,对32例肾移植术后抗类固醇的移植肾排斥反应患者应用抗CD3单克隆抗体（OKT3）治疗,并定期血液透析,28例患者肾功能全部恢复正常,逆转率近90%,现将结果报告如下。

抗CD_3单克隆抗体激活的杀伤细胞抗瘤活性的研究

本文观察了经抗人CD_3单克隆抗体刺激后的人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖及抗瘤活性。结果显示,抗CD_3单抗具有促PBMC增殖的作用,其最佳浓度是10～20ng/ml。经抗CD_3单抗刺激后,PBMC在含有rIL-250U/ml的培养液中培养12～13天,细胞数量增加38～46倍。抗CD_3单抗激活的杀伤细胞(CD_3AK)溶解肿瘤细胞的能力明显高于LAK细胞(P<0.01)。

^(188)Re直接法标记抗人结肠癌单克隆抗体CL-3的研究

本工作对 188Re直接标记抗人结肠癌单克隆抗体 CL- 3的方法进行了详细的研究。以抗坏血酸作为抗体的还原剂 ,以 Sn Cl2 -柠檬酸还原 188Re O4 -溶液 ,进行抗体的直接标记。本方法操作简单、方便 ;标记率高 ( >95% )胶体含量小 ( <5% ) ;标记完后不需纯化分离 ;标记物有良好的体外稳定性和较高的免疫活性 。

抗TCR／CD3单克隆抗体研究应用的现状与展望（一）抗TCR／CD3单克

ＴＣＲ／ＣＤ３复合体是Ｔ细胞功能和特异性的主要调节者，抗ＴＣＲ／ＣＤ３单克隆抗体（抗ＴＣＲ／ＣＤ３ＭｃＡｂ）能模拟其重量性配体，并与之结合，然而这些抗体导致Ｔ细胞呈现两个相反的效应─—Ｔ细胞的活化和抑制，且这两方面在基础研究及临床中都被广泛应用。本文首先归纳概述了抗ＴＣＲ／ＣＤ３ＭｃＡｂ及其体内的免疫抑制机制，并对其在自身免疫病和器官移植领域中的应用进行了综述。

抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体并研究其生物活性。方法:分离纯化后的抗CD3 ScFv蛋白免疫BALB/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备抗抗CD3 ScFv单克隆抗体;采用ELISA和Western blot鉴定其亚类和抗原结合特异性;采用FACS测定抗抗CD3 ScFv单克隆抗体对Jurkat细胞特异活性。结果:成功筛选出一株能稳定分泌抗抗CD3 ScFv单克隆抗体的杂交瘤细胞株(10B7),其分泌的抗体亚类为IgG1。该抗抗CD3 ScFv单克隆抗体直标后可特异性结合抗CD3 ScFv蛋白和抗CD3抗体。结论:文中所研制的抗抗CD3 ScFv单克隆抗体具有与抗CD3抗体、抗CD3 ScFv蛋白特异结合的活性,在肿瘤导向治疗中抗CD3/抗肿瘤双特异抗体的亲和层析纯化、药代动力学监测等方面具有广泛的应用前景。

治疗用武汉抗CD3单克隆抗体(WuT_3)的致突变性研究

观察了武汉抗ＣＤ３单克隆抗体（简称ＷｕＴ３）对组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００及ＴＡ１０２菌株的回复突变作用。结果显示在５～５０００μｇ／皿的剂量范围内，ＷｕＴ３所致的诱发回复突变菌落数与自发回复突变菌落数之比ＭＲ（Ｒｔ／Ｒｃ），无论加大鼠肝匀浆，辅酶Ⅱ及葡萄糖６－磷酸（Ｓ－９混合液）或不加Ｓ－９混合液，均不超过２。同时观察了ＷｕＴ３对小鼠骨髓细胞微核率及对人外周血淋巴细胞染色体畸变率的影响，结果显示小白鼠ｉｖＷｕＴ３，每日一次，连续２日，在２５～１００ｍｇ·ｋｇ－１范围内，ＷｕＴ３各剂量组的微核细胞率与溶剂对照组相比均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。而环磷酰胺（ＣＰ）阳性组与溶剂对照组相比有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＷｕＴ３在２５～２５０μｇ／瓶的剂量范围内，各剂量组的染色体畸变细胞率与溶剂对照组相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５），而ＣＰ组与溶剂对照组相比有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。