交叉保护性抗LPS多克隆抗体的制备与LPS多表位模拟肽的筛选

目的 获得具交叉保护性的抗细菌脂多糖 (LPS)多克隆抗体与模拟LPS多表位的噬菌体展示环肽克隆。方法 制备具交叉反应性的兔抗鼠伤寒沙门菌抗血清 ,鉴定抗血清对大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击小鼠的交叉保护性。以亲和纯化的多克隆抗体为靶 ,亲和筛选噬菌体随机环七肽库。双夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆。结果 兔抗血清能与多种来源的LPS反应 ,对用大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击的小鼠有显著的保护性。用亲和层析纯化的多克隆抗体为靶分子进行 3轮筛选 ,随机挑选 4 6个克隆 ,其中 2 0个克隆显示与多抗结合。鼠伤寒沙门菌LPS可抑制阳性噬菌体克隆与多抗结合 ,所有克隆的IC50 (达到 5 0 %抑制率的LPS浓度 )为 12 5ng ml。挑选其中10个克隆测序并推导氨基酸序列 ,其中 5个克隆具X QFYP X A保守序列 ;3个克隆具LFTFAHY序列 ;2个克隆具YQYYPAA序列 ,所有序列非极性氨基酸含量平均值为 80 .0 %。结论 获得能与多种LPS反应且具交叉保护作用的兔多克隆抗体 ,筛选得到可模拟鼠伤寒沙门菌LPS多表位噬菌体展示环七肽。