兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体的制备

为制备兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,将纯化LGALS1蛋白作为抗原,联合弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫新西兰大白兔,经过3次免疫后采集兔血清,采用间接ELISA测定抗血清效价,Western blot检测分析抗体特异性,IFA检测抗体应用效果。结果:血清效价为1∶102 400,Western blot检测可见特异性条带,IFA检测显示细胞质呈特异绿色荧光。结论:试验成功制备了兔抗LGALS1蛋白多克隆抗体,抗体特异性好,效价高。

抗MUC1单克隆抗体C595对人卵巢癌0VCAR-3细胞增殖和凋亡的研究

目的:探讨抗MUCI单克隆抗体C595在体外抑制高表达MUC1的人卵巢癌OVCAR-3细胞增殖并诱导其凋亡的作用。方法:免疫荧光标记法和流式细胞术检测单克隆抗体C595标记的MUC1在OVCAR-3细胞表面的表达;MTT法、克隆形成试验检测处理后细胞生长抑制情况,TUNEL法检测细胞凋亡,EIISA检测细胞内细胞色素C和Caspase-3活性的变化。结果:单克隆抗体C595对人卵巢癌OVCAR-3细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,TUNEL结果表明C595(IC_(50))可以诱导细胞凋亡。ELLSA检测显示治疗后的细胞凋亡与释放细胞色素C和Caspase-3浓度的上升相关。结论:单克隆抗体C595可以在体外抑制人卵巢癌OvCAR-3细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白活性有关。

MUC1核心肽多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备MUC1核心肽多克隆抗体 ,用于靶向MUC1肿瘤治疗的研究。方法 以 8R -MUC1核心肽 6重复序列重组蛋白 (8R MUCPT)为抗原免疫家兔 ,以ELISA法确定抗MUC1多克隆抗体效价 ,以Westernblot和ELISA阻断试验鉴定抗体特异性。结果 MUC1核心肽多克隆抗体效价为 1∶2 5 6 0 0 0 ,能与MUC1核心肽特异性结合。结论 利用原核表达的 8R -MUCPT蛋白 ,可有效地诱导免疫动物产生MUC1核心肽特异性抗体 ,为MUC1核心肽靶向肿瘤特异性免疫研究提供了有力的实验材料。

检测外周血MUC1蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用

目的为提高外周血MUC1蛋白检测的敏感度,建立了抗MUC1多克隆抗体的夹心ELISA试剂盒,并对其进行了初步测试。方法首先成功构建-表达并纯化了MUC1-GST和MUC1-MBP融和蛋白;通过免疫家兔和大鼠,获得抗MUC1血清,经饱和硫酸铵沉淀、Protein A/G纯化及抗GST和MBP抗体吸收的进一步纯化获得纯的家兔抗人及大鼠抗人MUC1多克隆抗体;通过凝血酶溶解MUC1-GST获得MUC1标准品。经不同的筛选确立了以家兔抗人MUC1抗体作为包被抗体、大鼠抗MUC1抗体作为检测抗体的双抗体夹心试剂盒,敏感度可达到0.2 ng/ml。结果对32例乳腺癌患者和20例健康受试者外周血血清中MUC1蛋白水平的检测结果显示,乳腺癌患者的阳性检出率达到53.1%(17例/32例),而健康对照组检出率为0。结论本研究建立的抗MUC1多克隆抗体双夹心试剂盒有望应用于临床诊断。

双抗体间接夹心ELISA法检测乳腺癌患者外周血MUC1蛋白水平的评价

目的优化双抗体间接夹心ELISA试剂盒,并探讨其在乳腺癌患者中检测MUC1黏蛋白水平的应用价值。方法用基因重组MUC1-GST和MUC1-MBP融和蛋白免疫家兔和大鼠,获得抗MUC1血清,并对其纯化,获得纯化的家兔抗人及大鼠抗人MUC1多克隆抗体;经不同的筛选确立了以家兔抗人MUC1抗体作为包被抗体、大鼠抗人MUC1抗体作为检测抗体的双抗体间接夹心试剂盒,敏感度可达到0.2 ng/ml。结果应用建立的试剂盒对40例乳腺癌,18例乳腺良性疾病和120健康对照者血清中MUC1蛋白水平的进行检测,检测结果绘制ROC曲线,分析得出以2.75 ng/ml为乳腺癌患者与乳腺良性疾病患者的临界值,以1.86 ng/ml为乳腺疾病与正常人为临界值,检测结果表明本研究对乳腺癌诊断的阳性率高达97.5%,乳腺良性疾病的阳性率为66.7%,正常人特异性为96.7%。对于乳腺癌同一病例样本用酶联免疫法CA15-3诊断试剂盒进行对比检测,其检出率为3.33%,特异度为100%。绘制ROC曲线对比显示,本研究所建立的双抗体夹心ELISA方法对乳腺癌诊断的准确度明显高于CA15-3试剂盒。结论本研究成功建立了特异性强,灵敏度良好的双抗体间接夹心ELISA试剂盒,有望开发为临床辅助诊断的常规试剂盒,尤其有望应用于乳腺癌的大规模筛查及早期诊断。

^(131)I标记抗肺癌单克隆抗体1E2在荷瘤小鼠体内分布及对小鼠移植瘤作用

目的:分析碘-131(131I)标记抗肺癌单克隆抗体1E2在荷Lewis肺癌小鼠体内分布,评估瘤内注射碘-131标记抗肺癌单克隆抗体1E2(131I-1E2)对小鼠Lewis肺癌的生长抑制作用。方法:C57BL/6小鼠右后腿皮下接种Lewis肺癌细胞(LLC)1×106/只,建立荷Lewis肺癌小鼠模型,免疫组化检测Lewis肺癌细胞(LLC)膜上1E2抗原-氨甲酰磷酸合成酶1(CPS1)的表达。131I标记1E2单抗(氯胺T法),检测标记率、放化纯度、放射性比活度。荷瘤小鼠尾静脉注射标记抗体131I-1E218.5MBq,观察其不同时间点在小鼠体内的分布。成瘤后小鼠随机分为4组,分别瘤内注射生理盐水0.1ml(空白对照),1E2单抗3μg(阳性对照),131I-IGg18.5MBq(阴性对照),131I-1E218.5MBq。治疗后每周2次测定肿瘤大小,21天后处死小鼠观察肿瘤组织病理学改变,检测肿瘤体积、重量,计算抑瘤率。结果:1E2抗原-CPS1主要在肿瘤细胞膜表达,131I-1E2标记率为67.73%,放化纯度为95.63%。131I-1E2主要分布在肿瘤组织,治疗后3周试验组肿瘤体积为(0.75±0.15)cm3,重量为(1.60±0.19)g,抑瘤率78.30%,与对照组间比较差异有统计学意义(P<0.01),对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组与对照组间病理学差异显著。结论:131I-1E2瘤内注射可抑制肿瘤的生长,具有潜在的临床应用价值,有可能成为新的肿瘤治疗靶向药物。

抗口蹄疫病毒单克隆抗体1C7重轻链可变区基因的克隆及序列分析

应用分子生物学技术 ,从分泌抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞 1C7中提取总RNA ,经反转录 ,PCR扩增及克隆 ,分别得到VH 基因及VL 基因。序列测定结果表明 :1C7的VH 基因为 36 8bp ,VL 基因为 32 3bp。用NCBIGenBank分析表明 ,VH 和VL 均符合小鼠抗体可变区特征 ,为功能性重排的抗体可变区基因。根据Kabat分类体系 ,1C7的VH 基因中的VH基因片段隶属于抗体重链第 7183家族 ,其VL 基因中的VL基因片段隶属于抗体K轻链 2 0家族 ,VH 基因由VH76_1BG_DFL16 .1_JH4重排而形成 ,VL 基因由VKbw2 0_JK2重排而形成。 1C7的VH 和VL

NRP-1b1/b2单克隆抗体对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响

目的:探讨神经纤毛蛋白1(neuropilin-1,NRP-1)在胃癌细胞BGC823中的表达情况,并观察自主研发的抗NRP-1 b1/b2单克隆抗体(NRP-1 mAb)对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响。方法:基于实验室前期已成功制备出纯度和浓度均较高的NRP-1 mAb。利用流式细胞术检测该抗体亲和性、细胞免疫荧光定位检测NRP-1的分布及NRP-1 mAb特异性。建立胃癌移植瘤裸鼠模型,向移植瘤中注射不同浓度的NRP-1mAb,研究抗体对胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响。2周后根据瘤体大小得出抑瘤率。最后免疫组化分析癌组织内血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果:胃癌细胞BGC-823上存在NRP-1,且主要分布在细胞膜上,能与自制的NRP-1 mAb有效结合。通过动物实验,NRP-1 mAb能有效抑制移植瘤的生长,高浓度抗体较低浓度对移植瘤抑制作用更明显,NRP-1 mAb治疗组中VEGF表达较空白组低(P<0.01)。结论:胃癌细胞BGC-823细胞膜上表达NRP-1,NRP-1 mAb能特异性结合胃癌细胞上NRP-1蛋白,NRP-1 mAb能抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长,且与浓度呈正相关,可能与下调VEGF表达有关。

抗细胞间黏附分子-1单克隆抗体对大鼠血管重塑的影响

目的:探讨抗细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单克隆抗体对血管球囊拉伤术后血管重塑的影响作用。方法:制备抗ICAM-1单克隆抗体,将30只SD大鼠随机分为抗体组、手术对照组及正常对照组(各10只),每组又分为24h观察组(5只)和14d观察组(5只),抗体组通过尾静脉输入抗ICAM-1单克隆抗体观察球囊拉伤后的大鼠股动脉内壁的变化,应用免疫组织化学、光镜等方法检测拉伤局部内膜变化情况。结果:抗体组球囊拉伤血管24h后内膜处有极少量中性粒细胞浸润,而手术对照组损伤内膜有大量的中性粒细胞浸润,14d后抗体组球囊拉伤血管内膜厚度小于手术对照组,管腔内径大于手术对照组,且内膜有较多VEGF蛋白颗粒表达。结论:病理性重塑是血管损伤后再狭窄的主要原因,由于损伤致周围组织炎性改变,致使大量白细胞向损伤局部内膜浸润,加重内膜损伤,而抗ICAM-1单克隆抗体可对抗白细胞与受损内膜的内皮细胞结合,减轻损伤血管内膜的炎性反应,对防治再狭窄有一定作用。

抗ICAM-1单链抗体基因的克隆及序列分析

应用 RT- PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗 ICAM- 1单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 F12中 ,扩增出抗体VH和 VL 基因 ,用 linker(Gly4 Ser) 3基因 ,将 VH和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆到 p MD18- T载体中。经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 74 4 bp。经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排鼠抗体可变区基因特征。 VH和 VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 (B)和轻链к

抗人SDF-1多克隆抗体对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究抗人基质细胞衍生因子(SDF-1)多克隆抗体对糖尿病大鼠(DM)视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,为抗SDF-1多克隆抗体用于防治糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopa-thy,DR)提供实验依据。方法:采用链脲佐菌素腹腔注射,建立DM动物模型。治疗组,用抗人SDF-1多克隆抗体治疗,对照组和非治疗组只给予等量生理盐水。结果:对照组大鼠视网膜VEGF的含量为(4.25±0.81)ng/ml,未治疗组大鼠视网膜VEGF的含量为(13.32±1.12)ng/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);治疗组大鼠视网膜VEGF的含量为(6.73±1.25)ng/ml,同未治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:抗人SDF-1多克隆抗体抑制糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子的表达。

重组人转化生长因子β1原核表达及多克隆抗体制备

目的克隆人转化生长因子β1(TGF-β1)基因,原核表达TGF-β1蛋白,制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体。方法应用RT-PCR技术扩增人TGF-β1基因序列,构建pET-28a-TGF-β1重组质粒。转化至E.coli BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Western-blot检测目的蛋白的抗原性。免疫新西兰白兔,获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清。饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接ELISA法检测多克隆抗体效价,Western-blot技术进行抗体特异性检测。结果获得了TGF-β1编码序列和表达载体,目的蛋白主要存在于超声破碎后的包涵体中;经Western-blot检测目的蛋白存在抗原性;获得纯化的兔抗人多克隆抗体效价达1∶10 000。结论获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体效价较高,具有良好的特异性。

鼠源性抗星形胶质细胞上调基因1单克隆荧光抗体在恶性浆膜腔积液检测中的应用

目的应用鼠源性抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆荧光抗体检测恶性浆膜腔积液中的肿瘤细胞。方法应用PCR及Western-blot方法检测浆膜腔积液脱落细胞中的AEG-1表达;用鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体与恶性浆膜腔积液中的肿瘤细胞共孵育,同时采用良性病变的浆膜腔积液作为阴性对照。结果恶性浆膜腔积液脱落细胞中AEG-1表达呈阳性,而良性病变的浆膜腔积液脱落细胞中AEG-1表达为阴性或弱阳性;同时鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体直接标记脱落细胞的结果与PCR和Western-blot检测结果一致。结论鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体为浆膜腔积液中的肿瘤细胞鉴定提供了新的实验手段。

兔抗人TGF-β_1多克隆抗体的制备

目的以人重组TGF-β1蛋白作为抗原,制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体。方法重组蛋白与弗氏佐剂等体积混匀,免疫新西兰白兔,获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清。饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验检测多克隆抗体效价,Western-blot技术进行抗体特异性检测。结果成功获得兔抗人TGF-β1多克隆抗体,纯化后抗体效价达1∶110 000。结论获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体具有良好的特异性,能满足进一步实验的需要。

抗HIV-1 gp41多肽单克隆抗体的研究

抗ＨＩＶ－１ｇｐ４１多肽单克隆抗体的研究范涛貌盼勇洪世雯梁勇冯传前何红霞（解放军３０２医院病毒研究室，北京１０００３９）爱滋病（ＡＩＤＳ）是人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染所致一种严重传染性疾病，目前对其感染还没有安全、有效的治疗方法和疫苗。１９８４年...

分泌抗Bt Cry1Ac蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

从苏云金芽孢杆菌HD-73中提取Bt Cry1Ac蛋白,电镜观察Bt Cry1Ac蛋白为标准的菱形.用SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞与经该Bt Cry1Ac蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,经3次克隆化,筛出两株稳定分泌Bt Cry1Ac单克隆的杂交瘤细胞株1C3、2F3.两株细胞均具有抗Bt Cry1Ac特异性,与Bt Cry1Ab和Bt Cry2A无明显的交叉反应,经亚型鉴定均为IgG1.腹水滴度均为1∶1024000.

双抗体间接夹心ELISA法检测血清MUC1蛋白方法的建立及其在肺癌诊断中的应用

目的:建立双抗体间接夹心酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒,检测血清黏蛋白1(MUC1)水平,探讨其在肺癌诊断中的应用,阐明血清MUC1蛋白检测的临床应用价值。方法:在前期制备的MUC1蛋白和兔抗人MUC1多克隆抗体的基础上,建立以鼠抗人MUC1单克隆抗体为包被抗体,兔抗人MUC1多克隆抗体为检测抗体的双抗体间接夹心ELISA方法,并通过对MUC1蛋白标准品的检测,绘制出标准曲线。临床上收集48例肺癌患者、7例肺良性疾病患者和20例健康人的血清,应用本研究建立的ELISA方法检测各组标本血清MUC1蛋白表达水平,绘制ROC曲线,确定最佳cut-off值,得出双抗体间接夹心ELISA方法检测肺癌的敏感度、特异度及约登指数。同时与临床应用的CA15-3试剂盒检测结果进行比较。结果:应用双抗体间接夹心ELISA法确定血清MUC1的临界值为1.98μg.L-1,检测肺癌的敏感度为62.5%,特异度为100%,约登指数为0.625 0。CA15-3试剂盒检测肺癌的敏感度为18.75%,特异度为100%,约登指数为0.187 5。结论:建立的双抗体间接夹心ELISA试剂盒检测肺癌有更高的敏感度和特异度,优于临床常用的CA15-3试剂盒。

抗PD -1单克隆抗体治疗晚期肺癌不良反应的观察与护理

目的总结54例程序性死亡受体-1(抗PD-1)单克隆抗体治疗晚期肺癌患者的不良反应与护理对策。方法对54例晚期肺癌患者进行272次抗PD-1单克隆抗体输注,观察免疫相关不良反应。结果54例患者中出现5例甲状腺功能减退,2例免疫相关性肺炎,2例皮肤血管瘤,1例红疹瘙痒,1例银屑病复发,1例一过性发热。其余患者无不良反应。结论应用抗PD-1单克隆抗体治疗晚期肺癌出现免疫相关不良反应时,通过密切观察病情变化,提高对免疫相关不良反应症状的认知,采用恰当的护理措施,使患者增强战胜疾病的信心,能够有效配合完成治疗。