肠出血性大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立能够分泌针对肠出血性大肠杆菌O157∶H7表面抗原的特异性单克隆抗体,以期用于该病原菌的检测。方法以敲除毒力基因的O157突变株F25全菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,分别以全菌抗原和热酚水法纯化的O157 LPS抗原用间接ELISA筛选能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,纯化抗体并鉴定。结果建立了稳定分泌抗O157 LPS抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D6,分泌抗体属IgG3亚类,轻链为κ型。腹水抗体ELISA效价达1∶3.2×106。以辛酸/饱和硫酸铵法纯化后抗体效价为1∶1.6×106,亲和常数Ka大于6.14×10-11mol/L。用于协同凝集和间接荧光抗体试验具有良好的特异性。结论该单克隆抗体针对O157的LPS抗原,特异性强,亲和力高,可用于O157的检测或分离鉴定。

检测E.coliO157特异性IgY的间接ELISA方法的建立

本实验以E.coliO157免疫产蛋鸡 ,经四次免疫获得高免特异性卵黄抗体IgY ,并以108～109CFU/ml灭活E.coliO157为包被抗原 ,建立了抗E.coliO157卵黄抗体的间接ELISA检测方法。酶标兔抗鸡最佳工作浓度为1:320。并研究了卵黄抗体不同处理方法、包被温度和时间对ELISA检测的影响。该方法简便可靠 。

O_(157):H_7大肠菌的浒及病理学诊断

美国于1982年首次报道O157:H7大肠杆菌引起的出血性结肠炎(HC),以后报道逐渐增多。我国于1988年也从HC患者中分离到O157:H7大肠杆菌。去年夏天,日本接连发生食物中毒事件,致使9000多人发病,11人死亡,范围波及东京、大阪、京都等地,其中以西部大阪近最为严重。日本厚生省(卫生部)已宣布该病为传染病,严格控制其流行。经研究发现,引起该病的病原体也为O157:H7大肠杆菌。