抗P选择素功能域单抗对人树突状细胞表型及IL-12分泌的影响

观察抗P选择素Lectin EGF功能域单抗 (PsL EGFmAb )对体外培养人树突状细胞 (DC )表型以及促炎细胞因子IL 1 2分泌的影响 ,探讨PsL EGFmAb对DC炎性成熟过程中的调节作用。通过SCF、GM CSF、TGF β1 、Flt 3和TNF α体外培养体系 ,从脐血CD34+ 造血干细胞中诱导扩增获得DC ,并于成熟中用PsL EGFmAb进行干预。采用流式细胞仪分析细胞表型CD1a、CD1 1c、CD83、CD80、CD86和HLA DR ;采用RT PCR检测IL 1 2p35、p4 0mRNA表达 ;以及ELISA法测定IL 1 2p70分泌的含量。结果显示 ,PsL EGFmAb可下调成熟中DC表面CD1 1c、CD83、CD80、CD86和HLA DR的表达 ,同时能抑制DC内IL 1 2p35、p4 0mRNA的转录和IL 1 2p70的分泌。本研究提示 ,PsL EGFmAb对DC黏附共刺激分子表达和促炎细胞因子合成具有抑制作用 。

抗P-选择素功能域单抗对急性肾损伤防治及免疫防御功能的影响

目的 探讨抗P-选择素lectin-EGF功能域单抗(PsL-EGFmAb)对大鼠急性肾损伤防治及机体免疫防御功能影响。方法 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,观察和比较经PsL-EGFmAb及其配体拮抗剂N-去硫酸肝素处理前后,大鼠肾组织P-选择素及其mRNA表达、组织病理学改变、肾功能变化以及免疫细胞功能状态。结果 肾缺血再灌注后,大鼠肾内以肾小管上皮细胞为主P-选择素表达增强,出现明显的组织病理学改变及肾功能损害;同时体内T、B细胞活性受抑,而NK细胞明显激活。经给予PsL-EGFmAb及其配体拮抗剂N-去硫酸肝素处理后,肾组织P-选择素及其mRNA表达受抑,病理学改变及肾功能损害减轻,尤以PsL-EGFmAb治疗效果更为明显;此外大鼠体内三种免疫细胞功能均受到不同程度的调节。结论 抗P-选择素功能域单抗对肾缺血再灌注损伤具有防治作用,其抗黏附靶向效果强于N-去硫酸肝素,并对大鼠免疫防御功能可能具有调节作用。

抗P-选择素凝集素-EGF功能域单抗对人树突状细胞成熟及功能抑制作用分析

在发现抗P-选择素凝集素-EGF功能域单抗(PsL-EGFmAb)对体外培养人树突状细胞(DC)成熟及功能有抑制作用基础上,进一步观察了PsL-EGFmAb对DC干预调节的作用机制。通过SCF、GM-CSF、TGF-β1、Flt-3L和TNF-α体外培养体系,从脐血CD34+造血干细胞中诱导扩增获得DC,并于成熟过程中用PsL-EGFmAb进行干预。采用流式细胞仪检测细胞表面分子表达;RT-PCR检测细胞内NF-κBp50、NF-κBp65mRNA表达;MTT比色法检测T细胞增殖反应,以及ELISA法测定IL-12p70分泌的含量。结果显示,PsL-EGFmAb对DC表面特异性C型凝集素DC-SIGN(CD209)表达有抑制作用,同时也能抑制DC细胞内NF-κBp50、NF-κBp65mRNA表达,相应抑制其黏附共刺激分子CD11c、CD83、CD80、CD86表达,以及IL-12p70分泌,此外也可抑制DC体外刺激T细胞增殖的能力。研究结果表明,PsL-EGFmAb对DC成熟及功能的抑制作用,提示与其抑制作为DC模式识别受体及功能分子DC-SIGN有关,并可能是通过影响NF-κB信号途径起作用。

人DC体外分化成熟特性及抗P-选择素功能域单抗对其干预调节

结合树突状细胞(DC)生物学特性,探讨抗P-选择素lectin-EGF功能域单抗(PsL-EGFmAb)对体外培养人DC成熟和功能干预调节的作用.通过SCF,GM-CSF,TGF-β1,Flt-3L及TNF-α体外培养体系,从脐血CD34+造血干细胞中诱导扩增获得DC,并于细胞成熟过程中用PsL-EGFmAb及辅以IL-10作为对照进行干预.分别观察和检测DC形态学及细胞活力,细胞表面分子HLA-DR,CD1a,CD11c,CD54,CD83,CD80,CD86,CD209(DC-SIGN)及CD62P,E,L(P-、E-、L-选择素)表达,细胞内活性氧(ROS)水平,及IL-12p35,p40 mRNA与NF-κBP50,P65 mRNA表达,培养上清液中IL-12p70分泌含量,以及DC体外对T淋巴细胞刺激能力,以此分析PsL-EGFmAb对DC成熟与功能的干预状况.结果显示,未成熟DC高表达属模式识别受体的C型凝集素DC-SIGN外,且胞内蓄积适量ROS,具备了细胞吞噬能力.成熟DC除仍高表达DC-SIGN,伴随细胞内NF-κB基因明显表达,其表面黏附共刺激分子CD11c,CD83,CD80,CD86表达上调,且细胞因子IL-12合成分泌增加,并具明显的体外刺激T淋巴细胞增殖能力,符合于抗原提呈细胞特征.此外,未成熟和成熟DC基本不表达P-,E-选择素,而分别高表达和低表达L-选择素.进一步发现,PsL-EGFmAb较对照IL-10对DC表面DC-SIGN表达有抑制作用;也能抑制细胞内NF-κB基因表达,并相应抑制或下调DC黏附共刺激分子CD11c,CD83,CD80,CD86及HLA-DR表达,抑制IL-12基因转录及其合成分泌,以及抑制DC体外刺激T细胞增殖的能力.上述结果表明,PsL-EGFmAb对DC分化成熟及功能具有抑制作用,提示此作用与其抑制作为DC模式识别受体及功能分子DC-SIGN有关,并可能是通过影响NF-κB信号途径起作用.

树突状细胞DC-SIGN在免疫介导实验性肾炎肾小管间质损伤中的作用及抗P选择素功能域单抗的干预调节

目的 探讨树突状细胞（DC）表面特异的胞间黏附分子3捕获非整合素（DC-SIGN）在免疫介导肾毒血清件肾炎（NTN）肾小管间质损伤中的作用,以及抗P选择素功能域单抗（PsL-EGFmAb）的干预调节.方法 WKY大鼠随机分为正常对照组、模型组及PsL-EGFmAb干预组.模型组注射预制的兔抗大鼠肾毒血清1 nd/kg;PsL-EGFmAb组在注射肾毒血清同时及注射后2 h,注入PsL-EGFmAb 2 mg/kg;正常对照组则注射等量生理盐水.随后于实验第4、7、14天,分别观察大鼠肾功能及肾组织病理变化,并采用免疫荧光法检测肾组织DC-SIGN＋DC分布;实时定量PCR检测P选择素、T细胞表达和分泌因子（RANTES）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-10、干扰素（IFN）-γ、IL-4的mRNA表达;流式细胞仪检测肾脏分离DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ（MHC Ⅱ）、DC-SIGN、CD80表达;细胞迁移试验及混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC迁移与刺激T细胞的能力;ELISA法测定MLR上清中IFN-γ、IL-4含量.结果 NTH大鼠第4天起,未成熟DC-SIGN＋DC即以肾间质为主浸润并于14 d成熟,且迁移及刺激T细胞增殖能力增强,其肾内分布与新月体形成、肾小管间质损伤程度及肾功能改变呈正相关.此外,大鼠第4天起肾内趋化因子及促炎因子RANTES、TNF-α mRNA表达持续上调,而抗炎因子IL-10 mRNA于第4天明显增强随后呈下调趋势;至14 d时IFN-γ/IL-4 mRNA比值增高,与DC成熟状况呈正相关.经PsL-EGFmAb干预,伴随Dc表面DC-SIGN及相应共刺激分子CD80表达下降,DC成熟、迁移及刺激T细胞增殖能力受抑,肾内促炎因子下降而抗炎因子上调,Th1/Th2偏移受到抑制.同时大鼠肾内新月体形成减少,肾小管间质损伤程度减轻,且肾功能改善.结论 DC-SIGN介导了DC肾间质浸润,并可能是局部免疫反应失衡以及肾小管间质病变的重要调控因素.PsL-EGFmAb在抑制DC迁移的同时可通过靶向DC-SIGN调抑DC成熟及功能,进而发挥防治效应.

树突状细胞在肾小管间质炎症病变中的作用及抗黏附干预调节的研究

目的探讨树突状细胞(DC)在肾小管间质炎症损伤中的作用,以及抗P-选择素功能域单抗(PsL-EGFmAb)对DC浸润及体外成熟与功能的干预调节。方法(1)建立大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型。分别采用免疫组化和免疫双染与图像分析,观察P-选择素及CD1a^+ CD80^+DC在肾组织表达和分布变化。(2)从脐血CD34^+造血干细胞中诱导扩增DC,并于成熟过程中采用流式细胞仪分析细胞表面分子表达；RT-PCR检测细胞NF-kB P50、P65 mRNA表达；混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC对T细胞刺激能力；以及ELISA测定MLR上清液IL-12 p70分泌含量。结果(1)与假手术组比较,UUO大鼠从第1天起,随着P-选择素以肾小管上皮细胞为主的小管间质表达,CD1a^+CD80^+DC以肾间质为主浸润；至第7天P-选择素上调且CD1a^+ CD80^+DC显著聚集,两者明显相关且与肾小管间质病变程度显著相关。经PsL-EGFmAb处理后,大鼠肾组织P-选择素表达下调,CD1a^+CD80^+DC浸润减少,且肾小管间质损害程度减轻。(2)经TNF-α刺激炎性状态下,培养人DC成熟过程中基本不表达或低表达P-选择素,但持续高表达与P-选择素同属C型凝集素的DC-SIGN。经PsL-EGFmAb处理后,可明显抑制DC-SIGN及细胞内NF-kB基因表达,并相应抑制DC黏附共刺激分子表达、IL-12分泌及刺激T细胞增殖能力。结论DC也是肾小管间质炎症病变启动因素,针对P-选择素功能域的单抗对其浸润具抑制作用。此外,该单抗对人DC成熟与功能有调节效应,提示与抑制作为DC模式识别及黏附受体的DC-SIGN有关,并可能通过影响NF-kB途径起作用。