检测抗P53蛋白抗体ABC-ELISA法的建立和初步临床应用

目的：建立检测抗Ｐ５３蛋白抗体的ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法，并进行初步临床应用的总结。方法：用人工合成Ｐ５３蛋白Ｎ端２５ 个氨基酸肽链为抗原，建立了敏感的亲和素－生物素ＥＬＩＳＡ法，２４０份肿瘤患者和１００份正常人血清抗Ｐ５３ 蛋白抗体，用免疫组化检测肿瘤细胞内Ｐ５３蛋白表达情况。结果：肿瘤患者血清抗Ｐ５３ 蛋白抗体阳性率分别为：结直肠癌２２％ 、肺癌３４％ 、乳腺癌２５％ 、胃癌３６％ 、原发性肝癌３２％ ；而正常人血清中抗Ｐ５３ 蛋白抗体的阳性率≤２％ 。对２０份肿瘤组织进行免疫组化检测，肿瘤细胞内Ｐ５３ 蛋白阳性率为６０％ 。此外，用Ｐｈａｒｍ ａ－Ｃｅｌｌ试剂盒检测９０ 份结直肠癌患者和乳腺癌患者血清，结果与ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ 法无统计学差异（Ｐ＞ ０．０５）。结论：抗Ｐ５３ 蛋白抗体在肿瘤患者中检出率显著高于正常人群，它可以作为一种新的肿瘤标志物，对肿瘤的诊断起到辅助作用。

免疫PCR方法检测乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体

目的为乳腺癌诊断提供血清学新方法.方法免疫PCR方法检测血清抗p53蛋白抗体,酶免疫组化方法检测组织p53蛋白表达.结果乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体阳性率为39.5%,而非癌患者和正常人血清抗p53蛋白抗体均为阴性,乳腺癌患者血清中抗p53蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人(P＜0.01).p53蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p53蛋白抗体阳性率为64.2%,明显高于p53蛋白阴性表达组,血清p53抗体测定与p53蛋白表达密切相关(P＜0.01).结论检测血清抗p53蛋白抗体是检测组织p53蛋白理想的替代工具抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.

PCR法检测乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体的研究

目的为乳腺癌诊断提供血清学新方法。方法用免疫-聚合酶链反应(i mmuno-polymerasechain reation,PCR)法检测血清抗p53蛋白(一种抑癌基因)抗体,酶免疫组化方法检测组织p53蛋白表达。结果乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体阳性率为39·5%,而非癌患者和正常人血清抗p53蛋白抗体均为阴性,乳腺癌患者血清中抗p53蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人(P<0·01)。p53蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p53蛋白抗体阳性率为64·2%,明显高于p53蛋白阴性表达组,血清p53抗体测定与p53蛋白表达密切相关(P<0·01)。结论检测血清抗p53蛋白抗体是检测组织p53蛋白理想的替代工具,抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断。

Preparation of monoclonal antibody to P53 and its clinical application

Objective：The aim of this study was to prepare monoclonal antibody against P53, a kind of tumor suppressor protein,and use the antibody initial y in clinical immunoassay. Methods：Monoclonal antibody was prepared and identified via the classic protocol of monoclonal antibody preparation. Identified monoclonal antibodies were purified by af inity chro-matography. Antibody titer was determined by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. The specific binding activity of antibody was detected by Western blotting and immunohistochemistry. Results：Three strains of monoclonal antibodies named 1P15, 2P37 and 3P40 were obtained and purified by af inity chromatography. The purity of antibodies was higher than 90%. The titers of antibodies were more than 1：6000. Western blot and immunohistochemistry assay showed that the specific antibody can combine with endogenous P53 protein in the tumor celllines and determine the expression of P53 in tumor tis-sue. Conclusion：Three strains of monoclonal antibodies with high af inity to P53 were successful y established, which can be used for detecting the expression of P53 in tumor cells or tissue.

Simian virus 40 large tumor antigen forms specific complexes with p53 and pRb in human brain tumors

目的 探讨SV4 0早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)的表达及其与抑癌蛋白p53、pRb的相互作用在人脑肿瘤发生、发展中的意义。方法 采用免疫共沉淀结合银染色及Western印迹法检测 6 5例人脑肿瘤及 8例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对 18例和 15例Tag阳性瘤组织分别检测Tag p53和Tag pRb复合物的形成。结果 Tag在 8例室管膜瘤及 2例脉络丛乳头状瘤中全部表达 ,垂体腺瘤Tag阳性率为 90 % (9/ 10 ) ,星形细胞瘤为 73% (11/ 15) ,脑膜瘤为 70 % (7/ 10 ) ,多形性胶质母细胞瘤为 50 % (4 / 8) ,髓母细胞瘤为 33% (2 / 6 ) ;5例少枝胶质细胞瘤、1例松果体细胞瘤及 8例正常人脑组织无Tag表达 ;检测 18例和 15例Tag阳性瘤组织 ,均发现Tag可与p53、pRb形成特异性复合物。结论 在人脑肿瘤组织中Tag不仅可以表达 ,而且还可与p53、pRb形成特异性复合物。Tag p53及Tag pRb特异性复合物的形成导致p53和pRb失活 ,这可能是SV4 0导致人脑肿瘤发生的一个重要机理。