PDGF受体β亚单位2个不同切割位点核酶的体外切割效率的比较

目的研究针对大鼠PDGF受体β亚单位基因2个不同切割位点核酶的体外切割活性并加以比较。方法应用计算机对大鼠PDGF受体β亚单位mRNA二级结构进行模拟,设计针对PDGF受体β亚单位mRNA 4 5位CUU和2 5 2位CUU的锤头状(Hammerhead)核酶(Ribozyme)基因RZ1和RZ2 ,定点克隆于自我切割型核酶载体P1 5的5′cis核酶和3′- cis核酶之间;将大鼠PDGF受体β亚单位cDNA6 0 8bp的PCR片段克隆于pGEM T载体T7启动子下游,在T7启动子作用下分别体外转录成RZ1、RZ2和70 6nt的PDGF受体β亚单位mRNA ,比较RZ1和RZ2对70 6nt的PDGF受体β亚单位mRNA的切割活性的差异。结果RZ1在体外有较高的切割活性,而RZ2在体外无切割活性。结论提示在应用核酶技术进行基因治疗时,应选择有效的核酶切割位点,以达到有效的治疗目的。

神经精神性狼疮患者血清抗N-甲基-D-天[门]冬氨酸受体亚单位2A抗体水平及其临床意义

目的 探讨神经精神性狼疮(NPSLE)患者血清抗N-甲基-D-天[门]冬氨酸受体亚单位2A抗体(抗NR2A抗体)水平及其临床意义。方法 将73例活动期系统性红斑狼疮(SLE)患者分为NPSLE组36例和非NPSLE组37例。比较两组自身抗体及补体水平。评估NPSLE患者抗NR2A抗体水平与SLE疾病活动指数2000(SLEDAI-2000)评分、抗双链脱氧核糖核酸(dsDNA)抗体及补体水平的相关性。结果 NPSLE组患者的SLEDAI-2000评分、抗NR2A抗体及抗dsDNA抗体水平均高于非NPSLE组(均P<0.05),但认知障碍与无认知障碍NPSLE患者间抗NR2A抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。NPSLE组中,抗NR2A抗体水平与SLEDAI-2000评分、抗dsDNA抗体水平呈正相关,与C3、C4水平呈负相关(P<0.05)。抗核糖体P蛋白抗体(ARPPA)阳性的SLE患者抗NR2A抗体水平高于ARPPA阴性SLE患者(P<0.05)。结论 抗NR2A抗体在NPSLE的发病过程中起重要作用,且与疾病活动度有关,但可能与认知障碍无关。

脊髓内NMDA受体NR2B在胍丁胺拮抗吗啡耐受中的作用

目的:探讨脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体NR2B亚单位在胍丁胺抗吗啡耐受中的作用。方法:给大鼠皮下注射吗啡(10mg/kg,Bid)建立慢性吗啡耐受大鼠模型。应用热水甩尾法测定甩尾潜伏期观察吗啡的镇痛效果。应用免疫印迹法(Westernblo)t检测脊髓NR2B蛋白表达。结果:皮下注射吗啡的第9d,大鼠对吗啡镇痛已产生明显的耐受。此时,吗啡耐受大鼠脊髓NMDA受体NR2B蛋白表达显著增多。胍丁胺(10mg/kg)不仅拮抗吗啡耐受,而且明显地抑制脊髓NR2B蛋白表达上调。结论:抑制慢性吗啡注射引起脊髓NMDA受体NR2B亚单位增多可能是胍丁胺抗吗啡耐受的作用机制之一。

抗血小板衍生生长因子受体β亚单位核酶的体外制备与活性鉴定

目的 研究针对血小板衍生生长因子（PDGF）受体β亚单位基因的核酶的制备与体外切割活性鉴定。 方法 将大鼠PDGF受体β亚单位基因的PCR片段克隆于T载体T7启动子下游，32P标记的体外转录物作为靶RNA；设计并合成针对大鼠PDGF受体β亚单位胞外区的核酶，将核酶基因克隆于自我切割核酶载体P1.5的5′-cis核酶和3′-cis核酶之间，并进行32P标记的转录。核酶与靶RNA按一定比例和条件进行切割反应电泳，放射自显影。 结果 核酶制备正确，在最适条件下具有切割活性。其Km＝13.20nM，Kcat＝0.28min-1。最高切割效率达78.3%。 结论 体外制备的核酶具有良好的特异催化切割活性。

急性干预α7亚单位的N型乙酰胆碱受体介导的胆碱能抗炎通路对犬快速心房刺激诱发心房颤动的影响

目的 探讨α7亚单位的N型乙酰胆碱受体（α7nAChR）介导的胆碱能抗炎通路对犬快速右心房起搏后心房颤动（房颤）诱发的影响及机制.方法 12只比格犬按随机数字表法分为对照组（n=6）和激动组（n=6）.快速右心房刺激（800次/min）6 h,连续3 h刺激后,对照组于4个心房神经节（GP）区域中注射0.9%NaCl溶液（0.5 ml/个）,激动组于4个GP区域注射含PNU-282987（α7nAChR激动剂）的0.9%NaCl溶液（0.5 ml/个）.于实验基线期和每小时刺激末监测心房、肺静脉的有效不应期（ERP）、有效不应期离散度（dERP）和房颤诱发情况.实验基线期、3 h刺激末、终点分别取静脉血检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和乙酰胆碱（ACh）等水平;电生理检查完毕后取心房、右前GP组织检测 TNF-α、IL-6、ACh 及转录激活子3（STAT3）蛋白的表达水平,免疫荧光染色检测α7nAChR蛋白的定位表达.结果 对照组和激动组快速刺激3 h,犬心房、肺静脉的ERP、房颤周长较基线期均明显缩短（P〈0.05）,dERP、房颤诱发率均明显升高（P〈0.05）.对照组3 h刺激末于GP区域注射0.9%NaCl溶液后持续刺激,犬心房、肺静脉的ERP、房颤周长仍明显下降（P〈0.05）,dERP、房颤诱发率及持续时间仍明显升高（P〈0.05）;激动组3 h刺激末于GP区域注射PNU-282987后持续刺激,犬心房、肺静脉的ERP、房颤周长逐渐延长,dERP、房颤诱发率及持续时间逐渐缩短,但与基线期比较差异无统计学意义（P〉0.05）.两组犬静脉血基线期差异无统计学意义,快速刺激6 h后,两组血清TNF-α、IL-6等水平均明显升高、Ach表达均显著降低（P〈0.05）.与对照组相比,激动组犬心房及右前GP组织中TNF-α[（28.5 ± 2.3） pg/ml 对（32.7 ± 2.0） pg/ml,P〈0.05]、IL-6[（192.7 ± 8.9） pg/ml 对（205.8±8.7） pg/ml,P〈0.05]表达水平显著降低,而ACh表达差异无统计学意义[（38.4±3.7） μg/ml对（32.7± 3.0） μg/ml,P〉0.05],STAT3蛋白表达水平明显升高[0.9对0.4,P〈0.05].结论 激动α7nAChR介导的胆碱能抗炎通路通过降低炎性因子水平升高,可抑制心房快速刺激引起的心房肌电重构和房颤的诱发.

急性B淋巴细胞白血病嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗后血清细胞因子水平与桥接异基因造血干细胞移植预后的相关研究

目的研究急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者接受嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗后血清细胞因子和趋化因子水平与其桥接异基因造血干细胞移植术(allo-HSCT)后发生早期急性移植物抗宿主病(aGVHD)及血清细胞因子和趋化因子水平与患者预后关系。方法根据病例对照原则纳入2019年9月18日至2022年5月9日于河北燕达陆道培医院接受CD19-CAR-T细胞免疫治疗且后续均进行allo-HSCT的42例B-ALL患者为研究对象, 采用Mann-WhitneyU检验比较同一时间点不同患者CAR-T细胞免疫治疗后到桥接移植期间aGVHD相关细胞因子以及趋化因子的水平变化, 观测时间点为接受CAR-T治疗前当天, 以及接受CAR-T治疗到桥接移植之间的时间点:接受CAR-T细胞治疗后第4、7、14、21、28天。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估细胞因子及趋化因子预测患者发生aGVHD及aGVHD患者发生死亡的预测价值。采用 Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行生存分析。结果入组42例患者, 24例发生aGVHD, 其中11例死于aGVHD, 31例患者存活。接受CAR-T细胞治疗前当天aGVHD组与无aGVHD组患者细胞因子及趋化因子比较, 差异无统计学意义(P>0.05)。第21天时, aGVHD组患者血清弹性蛋白酶特异性抑制剂(Elafin)水平为4 482(2 811, 6 061)ng/L, 较无aGVHD组患者的2 466(1 948, 3 375)ng/L高(Z=3.145, P=0.001);第28天时aGVHD组患者血清Elafin水平为4 391(2 808, 5 594)ng/L, 高于无aGVHD组的2 463(1 658, 2 830)ng/L(Z=2.038, P=0.048)。在第14天时, aGVHD死亡组与aGVHD生存组比较, 血清巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)[21.02(12.36, 30.35)ng/L比5.56(3.64, 10.79)ng/L]、可溶性CD25(sCD25)[422.47(257.99, 1 233.78)IU/ml比 216.11(133.75, 457.39)IU/ml]、Elafin[4 101(2 393, 5 006)ng/L比 2 155(1 781, 3 033)ng/L]、白细胞介素(IL)-6[119.08(23.97, 183.43)ng/L比8.39(2.91, 17.42)ng/L]、IL-8[13.56(12.50, 24.52)ng/L比2.83(1.73, 6.87)ng/L]更高(Z=2.653, P=0.007;Z=2.176, P=0.030;Z=2.058, P=0.041;Z=3.329, P<0.001;Z=3.162, P=0.001)。KM生存曲线显示第14天时血清高MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平患者的生存率低于血清低MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平患者, 差异具有统计学意义(χ^(2)=12.353、4.890、6.551、10.563、20.755, P均<0.05)。结论 CAR-T细胞免疫治疗桥接allo-HSCT患者的结局与患者CAR-T细胞免疫治疗到桥接allo-HSCT之间的血清MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8相关, 高MIP-1α、sCD25、Elafin、IL-6、IL-8水平提示预后不良, 可作为提示临床选择合适疗法的标志物。

白细胞介素-7受体α联合细菌鞭毛蛋白对异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病作用的初步探讨

目的 分析白细胞介素（IL）-7受体α（IL-7Rα）、细菌鞭毛蛋白单用及联合作用于小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型的疗效,探讨其可能机制.方法 以BALB/C（H-2d）雌性小鼠为受鼠,均接受9 Gy 60Co全身照射,取C57BL/6（H-2b）供鼠骨髓细胞1×107个和脾细胞2×107个经尾静脉输注给受鼠.将受鼠分为单纯照射移植组（A组）、IL-7Rα干预组（B组）、细菌鞭毛蛋白干预组（C组）、IL-7Rα联合细菌鞭毛蛋白干预组（D组）,每组6只,观察受鼠的症状、体征、生存时间及造血功能恢复情况.结果 A组小鼠生存期为（22.5±2.30）d,30d生存率为50.0％（3/6）, 、且出现明显的倦怠、食欲缺乏、脱毛、弓背等aGVHD表现；B组小鼠生存期为（25.83±3.49）d,30 d生存率为33.3％（2/6）,aGVHD表现较A组轻；C组小鼠生存期为（26.33±3.52）d,30 d生存率为33.3％（2/6）,亦出现aGVHD表现,程度同B组；D组小鼠生存期为（30.17±2.86）d,30 d生存率为66.7％（4/6）,aGVHD表现较前3组轻.4组小鼠外周血白细胞计数均于移植后第7天降至最低,后逐渐恢复,A组较3组干预组恢复慢,B、C两组移植后第14、21、28、30天外周血恢复比较,差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）；D组小鼠外周血较B、C组恢复快,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.4组小鼠移植后第2周CD3＋T细胞比例均明显下降,第3周开始逐渐上升,与A组比较,B、C、D3组小鼠CD3＋T细胞比例上升明显,B、C两组移植后第2、3、4周比较,差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）；D组小鼠较B、C组小鼠T细胞亚群CD3＋T细胞恢复快（均P＜0.05）.结论 通过全身照射能成功建立aGVHD小鼠模型；外源性IL-7Rα、细菌鞭毛蛋白均可减轻aGVHD的发生,两者单用无明显差异,二者联合干预aGVHD小鼠模型与单一干预比较,aGVHD发生更轻,造血恢复会更快.

NR2B受体拮抗剂及其在缺血性脑血管病中的应用

脑缺血时的神经损伤与谷氨酸过度兴奋N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体有关。由于非选择性NMDA受体拮抗剂能影响所有NMDA受体而产生不良反应,其临床应用受到很大限制,因此选择性NMDA受体在近年来受到越来越多的重视。NR2B亚单位拮抗剂主要分为哌啶衍生物、酰胺衍生物、脒衍生物、氨基喹啉衍生物等,主要代表药物有艾芬地尔、依利罗地。它们能选择性作用于NMDA受体NR2B亚单位,有望成为临床上安全有效的神经保护剂。

精神分裂症

0130613 人海马亚区亲离子性谷氨酸受体与N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位的表达:精神分裂症的影响/Gao X M∥Am J Psychiatry.-2000,157(7).-1141～1149 西交图 0130614 精神分裂症患者脑体积较小伴不自知有病/Flashman L A∥Am J Psychiatry.-2000,157(7).-1167～1169

抗逆转录病毒治疗对中国HIV感染者IL-7/IL-7R的影响

目的 探讨抗逆转录病毒治疗对中国HIV感染者IL-7/IL-7R的影响.方法 选取HIV感染者35例,健康对照者30例.对HIV感染组治疗前、治疗1年后及健康对照组血浆IL-7水平、CD4＋、CD8＋T细胞上IL-7R（CD127）的表达、CD4＋T细胞数量进行分析比较.结果 中国HIV感染者治疗前血浆IL-7水平[（8.98±3.77） pg/ml]较健康人群[（3.84±0.86）pg/ml]升高（P＜0.05）,CD4＋T细胞[（202.65±121.54）个/μl]、CD4＋ CD127＋T细胞[（60.25±11.75）％）]及CD8＋CD127＋T细胞[（46.27±12.10）％]则较健康人群[（766.99±103.21）个/μl、（76.89 ±20.01）％、（81.27±12.35）％]下降（P＜0.05）.抗逆转录病毒治疗（ART）治疗后血浆IL-7水平[（5.55±1.35） pg/ml]较治疗前下降（P＜0.05）,CD4＋T细胞[（450.58 ±152.85）个/μl]、CD4＋ CD127＋T细胞[（69.82±15.24）％]及CD8＋ CD127＋T细胞[（59.23±14.73）％]较治疗前升高（P＜0.05）,但仍未能达到健康对照组水平（P＜0.05）.结论 ART可以使HIV感染者血浆IL-7水平及T淋巴细胞上CD127表达较治疗前恢复,但仍不能达到健康人群水平.