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抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达
1
作者
卓萌
唐余燕
+5 位作者
余永胜
周丽芹
潘庆春
王鹏
臧国庆
汤正好
《世界华人消化杂志》
CAS
北大核心
2013年第22期2192-2197,共6页
目的:构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.方法:以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板,扩增TNFα-scFv目的基因,构建穿梭质粒pDON...
目的:构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.方法:以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板,扩增TNFα-scFv目的基因,构建穿梭质粒pDONR221-TNFα-scFv,测序证实质粒含有目的基因.与骨架质粒pAd-CMV-V5-DEST腺病毒骨架载体进行同源重组,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv.表达克隆转染293细胞,包装重组腺病毒,并鉴定和病毒滴定.结果:TNFα-scFv基因成功克隆到腺病毒载体中,转染293细胞后成功包装出重组腺病毒,病毒滴度为2.5×1011TCID50/mL,Western blot检测到TNFα-scFv基因在293细胞中高水平表达.结论:成功构建了带有TNFα-scFv基因的重组腺病毒载体,为进一步研究提供实验基础.
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关键词
肿瘤坏死因子Α
抗tnfα单链抗体
复制缺陷型腺病毒载体
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职称材料
题名
抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达
1
作者
卓萌
唐余燕
余永胜
周丽芹
潘庆春
王鹏
臧国庆
汤正好
机构
上海交通大学附属第六人民医院感染病科
出处
《世界华人消化杂志》
CAS
北大核心
2013年第22期2192-2197,共6页
基金
上海市科委医学引导类基金资助项目
No.114119a1200~~
文摘
目的:构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.方法:以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板,扩增TNFα-scFv目的基因,构建穿梭质粒pDONR221-TNFα-scFv,测序证实质粒含有目的基因.与骨架质粒pAd-CMV-V5-DEST腺病毒骨架载体进行同源重组,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv.表达克隆转染293细胞,包装重组腺病毒,并鉴定和病毒滴定.结果:TNFα-scFv基因成功克隆到腺病毒载体中,转染293细胞后成功包装出重组腺病毒,病毒滴度为2.5×1011TCID50/mL,Western blot检测到TNFα-scFv基因在293细胞中高水平表达.结论:成功构建了带有TNFα-scFv基因的重组腺病毒载体,为进一步研究提供实验基础.
关键词
肿瘤坏死因子Α
抗tnfα单链抗体
复制缺陷型腺病毒载体
Keywords
Tumor necrosis factor-α
tnfα
-scFv
Replication-defective adenovirus vector
分类号
R575.1 [医药卫生—消化系统]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达
卓萌
唐余燕
余永胜
周丽芹
潘庆春
王鹏
臧国庆
汤正好
《世界华人消化杂志》
CAS
北大核心
2013
0
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