抗TRAIL死亡受体抗体及其在肿瘤治疗中的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)是近几年发现的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族成员。TRAIL能与他的死亡受体(death receptor,DR)TRAIL-R1(DR4)和TRAIL-R2(DR5)结合并特异性地诱导许多肿瘤细胞凋亡,但对大多数正常细胞没有毒性。一些抗TRAIL死亡受体抗体也能先择性杀伤肿瘤细胞,并在癌症治疗上显示了良好的治疗效果。本文就TRAIL的凋亡诱导途径以及抗TRAIL受体抗体在肿瘤治疗中的研究进展作一综述。

TRAIL死亡受体通路蛋白抗肿瘤小分子多肽的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡优先选择肿瘤细胞,而对正常细胞低毒性,具有潜在的抗肿瘤药物开发价值.随着肿瘤治疗研究的不断深入,小分子多肽物因分子量小、易穿过细胞膜且稳定性较强,已成为肿瘤治疗药物开发研究的一个热点.本文基于TRAIL死亡受体通路蛋白抗肿瘤小分子多肽物的研究及应用进行简要概述.

抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体死亡受体5嵌合抗体的构建及其真核表达

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。

抗程序性细胞死亡受体1抗体导致孤立性促肾上腺皮质激素缺乏一例

患者,男,51岁,因“乏力、纳差8个月”于2020年6月入院。2019年10月23日患者因右侧输尿管高级别浸润性尿路上皮癌接受第4次卡瑞丽珠单抗治疗后出现乏力、纳差,体重逐渐下降4 kg。2019月10月25日实验室检查结果示:ALT 222.4 U/L(0~46.0 U/L,括号内为正常参考值范围,以下相同),AST 427.0 U/L(0~46.0 U/L),碱性磷酸酶364.0 U/L(15.0~121.0 U/L),血肌酐139.0μmol/L(41.0~111.0μmol/L),血钾4.63 mmol/L(3.50~5.40 mmol/L),血钠135.7 mmol/L(135.0~148.0 mmol/L)。

利用大型天然噬菌体抗体库筛选抗死亡受体5人源抗体

目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(sc Fv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫细胞化学染色、ELISA鉴定其抗原结合活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经过4轮筛选,获得26株与DR5特异性结合的阳性克隆,DNA指纹分析有4种不同的可变区片段;经过基因测序,分析可变区基因的亚群,并将其制备成可溶性的抗体,进一步用免疫细胞化学技术证实所获得的抗体可特异性结合SW480细胞的DR5蛋白。结论利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗DR5的人源性sc Fv。

PD-1/PD-Ls信号通路及其抗体在肿瘤治疗中的应用

程序性死亡受体-1(PD-1)是T细胞上主要存在的一种抑制性受体,与其配体PD-L1、PD-L2相互作用,可抑制T细胞增殖、活化和细胞因子的分泌。在正常机体中,PD-1/PD-Ls信号通路对维持机体的免疫耐受具有重要作用;而在肿瘤发生时,PD-1/PD-Ls信号通路能抑制T细胞的免疫反应而促进肿瘤免疫逃逸的发生。本文从PD-1/PD-Ls的结构与表达、信号通路的作用机制、PD-1/PD-L1的可溶性分子(s PD-1/s PD-L1)的表达特性及其对PD-1/PD-Ls途径的作用等方面简述了PD-1/PD-Ls信号通路的研究现状,综述了抗PD-1/PD-Ls抗体及其在肿瘤免疫治疗中的临床应用。

抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)诱导Jurkat细胞凋亡活性研究

目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体——mDRA-6对Jur- kat细胞的凋亡作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗人DR5单抗——mDRA-6;光镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细胞形态变化;MTT方法计算mDRA-6不同浓度、不同作用时间对Jurkat细胞凋亡率影响。结果:mDRA-6致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;MTT法显示mDRA-6具有明显的Jurkat细胞杀伤作用, 0．1μg/ml的mDRA-6即可使Jurkat细胞存活率降至77．2％;25．6μg/ml的mDRA-6作用8小时,可使Jurkat细胞存活率降至 28．4％;Annexin v及PI双染显示1 μg/ml的mDRA-6作用10小时,Jurkat细胞凋亡率达81．82％。结论:抗DR5单抗—— mDRA-6具有高效诱导Jurkat细胞凋亡的活性。

抗人DR5单克隆抗体的制备、鉴定及活性分析

目的制备抗人DR5单克隆抗体(mAb),鉴定其特性,并进行生物学活性分析。方法以纯化的可溶性DR5(sDR5)免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术制备抗人DR5mAb;运用ELISA、SDS-PAGE电泳方法测定抗DR5mAb与sDR5结合的特性;Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb亚类;间接ELISA法检测腹水mAb效价;流式细胞仪检测肿瘤细胞表面DR5的表达水平;流式细胞仪检测抗DR5单克隆抗体(mAb)诱导肿瘤细胞凋亡的功能。结果获得1株可分泌抗DR5mAb的杂交瘤细胞系R150。SDS-PAGE电泳检测证实,获得的R150可特异性地识别DR5;R150的Ig亚类为IgGI(λ型);腹水效价为1×106;通过流式细胞仪可敏感地检测到肿瘤细胞表面DR5的表达水平及R150诱导肿瘤细胞凋亡情况。结论获得1株可分泌抗DR5mAb的细胞系R150,抗体具有效价高、特异性强等特点并能有效诱导肿瘤细胞凋亡,具有较好的应用价值。

抗DR5单克隆抗体-mDRA-6对白血病细胞的凋亡诱导作用

目的:观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体(mAb)-mDRA-6对白血病细胞的凋亡作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗人DR5mAb-mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下白血病细胞Jurkat、HL-60、K562的形态变化;MTT法测定不同浓度的mDRA-6对Jurkat、HL-60、K562细胞存活率的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞术检测mDRA-6对Jurkat、HL-60、K562细胞凋亡率的影响。结果:mDRA-6导致Jurkat、HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对Jurkat、HL-60细胞具有明显的杀伤作用,但对K562的杀伤作用较弱,25mg/L的mDRA-6作用12h,Jurkat、HL-60、K562细胞死亡率分别为88.76%,59.76%,5.18%。Annexin V及PI双染显示1mg/L的mDRA-6作用10h,Jurkat细胞凋亡率为86.06%,10mg/L的mDRA-6作用10h,HL-60细胞凋亡率为48.11%,但10mg/L的mDRA-6作用K562细胞10h,细胞凋亡不明显。结论:抗DR5mAb mDRA-6能够诱导白血病细胞凋亡,不同的白血病细胞株对mDRA-6的敏感性不同。

抗DR5抗体对食管鳞癌的细胞毒作用及机制

目的:探讨抗人DR5功能性单克隆抗体mDRA-6对食管鳞癌EC9706和109细胞的细胞毒作用及其作用机制。方法:利用MTT法检测mAb mDRA-6对食管癌细胞的细胞毒作用;在显微镜下观察食管癌细胞死亡的形态变化;以琼脂糖凝胶电泳检测食管癌细胞中的DNA片段化。利用流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5表达、细胞凋亡率和线粒体膜电位;利用caspase抑制剂分析mAb mDRA-6的细胞毒作用机制。结果:mAb mDRA-6对食管鳞癌细胞有显著的细胞毒作用,并呈剂量和时间依赖性,但对食管上皮细胞NEC细胞没有毒性。经mAb mDRA-6处理,食管鳞癌细胞出现典型的细胞凋亡特征:细胞膜皱缩,出泡,染色质浓缩,形成凋亡小体以及DNA片段化等。流式细胞术检测结果显示,食管癌细胞表面表达DR5,而食管上皮细胞NEC细胞不表达;经1.2μg/ml的mAb mDRA-6作用24小时后,大多数食管鳞癌EC9706和109细胞的表面均表达磷脂酰丝氨酸。Caspase 8的抑制剂几乎完全抑制mAb mDRA-6诱导的细胞凋亡,Caspase 9抑制剂的则影响小。此外,在mAb mDRA-6诱导的食管癌细胞凋亡的早期,线粒体膜电位不改变,在凋亡的晚期,线粒体膜电位降低。结论:mAb mDRA-6主要通过死亡受体信号传导途径诱导细胞凋亡,对食管鳞癌细胞产生细胞毒作用,其在以TRAIL/DR5系统进行的肿瘤治疗和探讨DR5功能结构域方面具有广阔的应用前景。

肿瘤坏死因子诱导凋亡配体(TRAIL)抗肿瘤治疗研究进展

癌症是全球死亡率最高的疾病。严重影响了癌症患者的生活质量。细胞凋亡又称程序化细胞死亡,是多细胞有机体为调控机体发育、维护内环境稳定、由基因控制的细胞主动死亡过程。许多研究表明,肿瘤坏死因子诱导凋亡配体(TRAIL)能通过与死亡受体结合选择性引起肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无明显影响,有望成为一种新的抗肿瘤制剂。本文就近几年TRAIL抗肿瘤研究的进展作一综述。

JNK信号传导通路在抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导白血病细胞凋亡中的作用

目的:探讨JNK信号传导通路在抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导白血病细胞Jurkat和U937凋亡过程中的作用。方法:MTT法检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞的生长抑制作用;以Caspase抑制剂Z-VAD-FMK和JNK抑制剂SP600125进行干预,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析Jurkat和U937细胞凋亡;利用免疫印迹技术检测mDRA-6作用下凋亡细胞的JNK蛋白的表达情况。结果:mDRA-6对Jurkat和U937细胞具有明显的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测显示,10μg/ml的mDRA-6作用Jurkat和U937细胞3小时,其凋亡率分别为62.62%和35.65%,JNK抑制剂干预后细胞凋亡明显增加;免疫印迹技术检测显示,mDRA-6作用细胞5分钟后JNK即呈现活性片段表达,并随作用时间的延长其活性增强,而Caspase全抑制剂干预后,5、15分钟JNK磷酸化增强,但随后随时间递减。结论:mDRA-6抑制Jurkat和U937细胞生长并诱导其凋亡,其凋亡过程中有JNK的激活并发挥抗凋亡作用。

抗人DR5功能性抗体的研制

目的:研制抗人DR5功能性单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术制备抗人DR5的mAb;MTT方法筛选分泌有细胞毒活性mAb的杂交瘤细胞;亲和层析方法纯化mAb;夹心ELISA法测定mAb亚型;Western blotting和斑点ELISA法检测mAb的抗原表位类型;间接ELISA法检测mAb的特异性;观察抗体诱导细胞凋亡的形态学特征。结果:获得1株合成分泌有细胞毒活性抗体的杂交瘤细胞,其分泌的mAb命名为mDRA-6,为Ig G1,其抗原表位类型为构象表位,其特异性识别hDR5,与hFas、hDR4等无交叉反应。mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用,经mDRA-6处理后,Jurkat细胞表现出细胞凋亡的形态学特征。结论:获得一种抗人DR5功能性抗体mDRA-6,在以TRAIL/DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景。

Fas死亡受体及FLIP对大肠癌细胞凋亡的影响

目的:比较不同大肠癌细胞Fas受体及其下游通路抑制因子FLIP的表达差异,探讨Fas、FLIP对大肠癌细胞凋亡的影响. 方法:体外培养大肠癌细胞,应用直接免疫荧光流式细胞术检测细胞表面Fas表达率,半定量RT-PCR法测定FLIP mRNA的水平,并采用Annexin V法评价细胞对Fas介导的凋亡的敏感性. 结果:大肠癌细胞表面Fas表达率不同,其中HT-29细胞的表达率为42.46±4.32%,明显高于其他3株细胞.SW620 和HT-29细胞FLIP mRNA含量较高,Colo205居中,Lovo 则呈阴性;且相对于任何一株FLIP表达阳性的细胞,FLIPL的表达水平均高于FLIPs.给予凋亡诱导型抗Fas抗体(CH-11)刺激后,4株大肠癌细胞凋亡敏感性均较低. 结论:不同的大肠癌细胞株可能通过不同途径逃避Fas介导的凋亡,其中包括下调Fas的表达和上调FLIP的含量.

死亡受体5和肿瘤生物治疗

死亡受体5属于肿瘤坏死因子受体超家族,在多种肿瘤细胞中均有表达,它通过与肿瘤细胞表面相应的配体结合而迅速诱导细胞凋亡。死亡受体5在正常细胞很少或几乎不表达,因此其对正常细胞没有作用。近年来有学者认为可以将死亡受体5作为一个肿瘤生物治疗的新靶点,为研究出更有效的抗肿瘤药物提供帮助。目前重组人TRAIL、抗DR5单克隆抗体等相关药物已进入临床试验阶段,而小分子DR5活化剂的发现,更进一步拓展了人们对于DR5在肿瘤生物治疗中的认识。因此,对死亡受体5研究的进一步深入,可能为未来肿瘤生物治疗提供新的策略。本文就DR5的作用机制及其在肿瘤治疗中的研究及应用做一综述。

抗PD -1单克隆抗体治疗晚期肺癌不良反应的观察与护理

目的总结54例程序性死亡受体-1(抗PD-1)单克隆抗体治疗晚期肺癌患者的不良反应与护理对策。方法对54例晚期肺癌患者进行272次抗PD-1单克隆抗体输注,观察免疫相关不良反应。结果54例患者中出现5例甲状腺功能减退,2例免疫相关性肺炎,2例皮肤血管瘤,1例红疹瘙痒,1例银屑病复发,1例一过性发热。其余患者无不良反应。结论应用抗PD-1单克隆抗体治疗晚期肺癌出现免疫相关不良反应时,通过密切观察病情变化,提高对免疫相关不良反应症状的认知,采用恰当的护理措施,使患者增强战胜疾病的信心,能够有效配合完成治疗。

DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用

目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆抗体对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断率。结果 :DR5在Jurkat细胞表面的表达率为 94 83% ,TRAIL和抗TRAIL单克隆抗体能够诱导Jurkat细胞凋亡 ,呈现明显的剂量相关性 ,TRAIL浓度在 5 0～ 10 0ng ml时 ,杀伤率达 90 %以上。预先用抗DR5单克隆抗体与Jurkat细胞作用后 ,TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎完全被mAb所阻断 ,其平均阻断率达90 4 9%。结论 :DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中起着十分关键的作用。

PD-1/PD-L1信号通路及其在淋巴瘤中的抗肿瘤作用

在肿瘤患者中,程序性细胞死亡受体-1(Programmed cell death-1,PD-1)可通过与其配体(ligand,L)的结合抑制T细胞活化与增殖,从而促进肿瘤免疫逃逸。大量实验显示,PD-L1在淋巴瘤中高表达,而PD-1在肿瘤浸润淋巴细胞表达上调,提示其在淋巴瘤发生中的作用,可能为淋巴瘤重要治疗靶点。PD-1及PD-L1的单克隆抗体可阻断PD-1/PD-Ls信号通路,恢复T细胞功能,对肿瘤起抑制作用。目前多项应用PD-1抗体的早期临床试验已经在复发淋巴瘤的各种亚型中显示出显著的疗效及较少毒副作用,为目前有前途的靶向治疗药物。本文就PD-1/PD-L1信号通路作用机制、PD-1/PD-L1在淋巴瘤中的表达以及其抗体在淋巴瘤中的抗肿瘤作用作一综述。

肿瘤细胞对TRAIL耐受机制以及克服耐受性的研究进展

TRAIL的全称是肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体,也称为APO-2L,因为TRAIL与TNF和CD95/FasL具有同源性序列,因此确定TRAIL为TNF超家族成员之一,它属于Ⅱ型跨膜蛋白。到目前为止,研究重点关注于TRAIL诱导凋亡的作用机制和产生TRAIL耐受性的过程。化学疗法或放射疗法联合应用可使对TRAIL耐受的肿瘤恢复TRAIL敏感性。本综述关注TRAIL受体诱导的凋亡信号通路、肿瘤耐受TRAIL的机制以及可能克服耐受的方法。

靶向TRAIL受体的抗肿瘤研究进展

细胞凋亡一般分为细胞外途径和细胞内途径。细胞内途径是在线粒体水平启动的细胞死亡,细胞外途径是通过位于细胞膜的死亡受体传导的细胞死亡信号而引起的细胞凋亡途径。肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)信号传导通路是指以TRAIL为配体,通过与死亡受体(DR4,DR5)结合而启动凋亡信号,最终诱导细胞凋亡。本文将对TRAIL信号传导通路与肿瘤治疗进行综述。