抗细胞膜DNA抗体检测方法的建立及对系统性红斑狼疮诊断价值的临床应用研究

目的应用问接免疫荧光法（IIF）检测抗细胞膜DNA（cmDNA）抗体，探讨抗cmDNA抗体对系统性红斑狼疮（SLE）的诊断价值。比较以人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60为底物，抗cmDNA抗体在SLE中的检测效果。方法选取306例SLE患者，192例非SLE疾病对照组，包括脊柱关节病（sDA）52例，类风湿关节炎（RA）70例，原发干燥综合征（pSS）30例，其他结缔组织病（CTD）40例。50名健康志愿者作为对照组。采用IIF法观察培养的人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60的细胞膜的荧光图形；用IIF法检测抗核抗体、抗双链DNA（dsDNA）抗体；联合应用免疫双扩散法和蛋白印迹法检测抗Sm抗体，酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定抗核小体抗体（AnuA）。配对资料比较用McNemarr检验，相关性分析采用Spearman相关及Logistic回归分析。结果以Raji及HL602种细胞株为底物检测SLE患者抗cmDNA抗体，敏感性分别为72．5％、76．1％，特异性分别为91．7％、86．8％，差异均无统计学意义（P〉0．05）。抗cmDNA抗体的敏感性明显高于抗Sm抗体及抗dsDNA抗体，差异有统计学意义（P〈0．01）；特异性与抗dsDNA抗体相似（P〉0．05），但低于抗Sm抗体及AnuA（P〈0．01）。抗cmDNA抗体分别与抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA联合检测在SLE诊断中的敏感性均明显高于上述自身抗体单独检测，差异有统计学意义（P〈O．05）。抗CmDNA抗体与SLE患者的黏膜溃疡之间有相关性（OR=2．343，P=O．029）。抗cmDNA抗体与红细胞沉降率（ESR）有相关性（OR=1．031，P=0．012）。抗cmDNA抗体与SLE疾病活动指数（SLEDAI）评分无相关性（r=0．070，P=0．600）。本文研究还证实Raji细胞株较HL60细胞株更易复苏、荧光图形亮度更强，表达效果更好。结论抗cmDNA抗体对SLE诊断的敏感性高，特异性强，可能成为SLE诊断的相对特异性抗体之一。抗cmDNA抗体与抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA联合检测可提高对SLE诊断的敏感性。选择Raji细胞株为底物检测抗cmDNA抗体较HL60细胞株更有优势。

抗细胞膜DNA抗体对系统性红斑狼疮临床价值的研究

目的 应用间接免疫荧光法（IIF）检测SLE患者抗细胞膜DNA（cmDNA）抗体,确定血清该抗体对SLE诊断的最佳阳性阈值;探讨抗cmDNA抗体对大样本SLE患者的诊断价值.方法 采用IIF检测129例SLE患者抗cmDNA抗体,69例疾病对照组,50名健康对照,以原血清及与1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1 280稀释血清检测结果为阳性阈值,比较受试者工作特征曲线（ROC）曲线下面积（AUG）,确定血清抗cmDNA抗体对SLE诊断的最佳阳性阈值;检测435例SLE患者及192例疾病对照组、50名健康对照组血清抗cmDNA抗体,同时检测ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体和抗核小体抗体（AnuA）,比较血清抗cmDNA抗体单独或与上述抗体联合检测对SLE的诊断价值.采用t检验,四格表资料χ%2检验,配对资料McNemar χ^2检验进行统计学分析.结果 ①比较不同阳性阈值抗cmDNA抗体的AUC,以1∶40为阳性阈值的AUC最大（AUC=0.643）,以抗cmDNA抗体1∶40为阳性阈值对SLE诊断效能最佳,并作为本次研究的阳性阈值.②抗cmDNA抗体对SLE诊断的敏感性和特异性,分别为72.9％和90.7％.抗cmDNA抗体、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA及ANA对SLE诊断的AUC分别为0.836、0.746、0.617、0.845及0.762;分别将抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA与抗cmDNA抗体两两联合检测,敏感性分别为85.2％、76.4％和83.8％,均明显高于上述抗体单独检测,差异有统计学意义（χ^2=109.20,243.28,12.57; P＜0.05）.结论 以Raji细胞为底物IIF检测抗cmDNA抗体,1∶40为阳性阈值是对SLE诊断的最佳效能.抗cmDNA抗体对SLE诊断的敏感性高,特异性强,可能成为SLE诊断的相对特异性抗体之一.抗cmDNA抗体与抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA联合检测可提高对SLE诊断的敏感性.

以人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60为底物检测抗细胞膜DNA抗体在系统性红斑狼疮中的诊断价值

目的比较以人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60为底物检测抗细胞膜DNA抗体（抗cmONA抗体）在系统性红斑狼疮（SLE）中的诊断价值。方法分别以人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL60为底物，用间接免疫荧光法（IIF）检测306例SLE患者、192例疾病对照组患者、50例健康对照组血清中的抗cmDNA抗体。结果以人B淋巴细胞株Raji为底物检测抗cmDNA抗体在306例SLE患者中阳性率为72．5％。而在脊柱关节病、类风湿关节炎、原发干燥综合征和其他结缔组织病中的阳性率分别为5．8％、10．0％、13．3％、15．0％。以人早幼粒白血病细胞株HL60为底物检测抗cmDNA抗体在306例SLE患者中阳性率为76．1％。而在脊柱关节病、类风湿关肯炎、原发干燥综合征和其他结缔组织病中的阳性率分别为9．6％、11．1％、20．0％、22．5％。两种细胞为底物检测抗cmDNA抗体在健康对照组中阳性率均为0。抗cmDNA抗体阳性率在SLE组明硅高于疾病对照组及健康对照组（P〈0．01）。以Raji及HL60两种细胞株为底物检测SLE患者抗cmDNA抗体，敏感性分别为72．5％和76．1％，特异性分别为91．7％和86．8％，差异均无统计学意义（P〉0．05）。Raji及HL60细胞培养、冻存及复苏方法相似，但Raji细胞较HL60细胞更易复苏。在荧光显微镜下观察，Raji细胞比HL60细胞表达效果更好。结论抗cmDNA抗体是一种诊断阳性率较高的SLE血清学标记物之一。选择Raji细胞株为底物检测SIE患者的抗cmDNA抗体较HL60细胞株更有优势。