oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的机制

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达黏附分子的影响,以及Toll样受体4(TLR4)信号通路在其中发挥的作用。方法用单纯培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、LPS分组刺激HUVEC,收集总RNA和蛋白,利用实时定量PCR和Western blot法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管黏附分子1(VCAM-1)和冯·维勒布兰德因子(v WF)的mRNA和蛋白水平;采用TLR4阻断剂TAK-242(5μmol/L)或p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂SB203580(10μmol/L)预处理的方式,探索阻断TLR4通路后,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附分子表达的影响,通过THP-1细胞黏附实验检测oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附能力的影响。结果与培养基对照组相比,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够显著提高HUVEC的ICAM-1、VCAM-1和v WF表达,并且能够增强HUVEC对THP-1细胞的黏附,TAK-242或SB203580处理能够抑制该过程。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够增强HUVEC的黏附分子表达和对THP-1细胞的黏附,TLR4和p38MAPK与该过程密切相关。

炎性因子、抗-oxLDL抗体与高血压病的相关性研究

目的探讨炎症标志物、抗-oxLDL抗体(oLAB)及丙二醛(MDA)与高血压病(EH)的相关性。方法选择46例EH患者采用ELISA法、硫代巴比妥酸比色法测定血中高敏C反应蛋白(hs-CRP)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、oLAB及MDA水平,并与27例正常对照组进行对比分析。结果EH患者血中hs-CRP、ICAM-1、oLAB及MDA水平较正常对照组明显增高,有统计学意义(P<0.001),直线相关分析显示:EH组hs-CRP与I-CAM-1、oLAB、MDA呈正相关(r分别为0.4661、0.7220、0.4376P<0.01-0.001),oLAB与ICAM-1、MDA呈正相关(r分别为0.3492、0.6272P<0.05-0.001);ICAM-1与MDA亦呈正相关(r=0.4249、P<0.01)。结论炎症反应、LDL的氧化修饰及过氧化损伤在高血压的发病中具有重要作用。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进A7r5细胞趋化和迁移及脂质累积

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab)复合物对A7r5大鼠胸主动脉平滑肌细胞迁移、趋化和脂质累积的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法体外传代细胞株,分别以oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、β2GPI、抗β2GPI抗体、β2GPI/β2GPI-Ab复合物、oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物刺激经TLR4阻断剂TAK-242预处理和未经预处理的A7r5细胞。提取细胞总RNA,实时荧光定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、乙酰辅酶A乙酰基转移酶1(ACAT1)的mRNA水平;收集培养上清,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、MMP-9的蛋白水平;划痕实验观察A7r5细胞的迁移。以oxLDL、oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物刺激经TAK-242预处理和未经处理的A7r5细胞,用胆固醇试剂盒检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量并计算胆固醇酯(CE)的含量。结果oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物促进A7r5细胞的迁移,加速胞内胆固醇的累积,促进MCP-1、MMP-9、ACAT1的表达,而TLR4阻断剂TAK-242能够抑制上述现象。结论 oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物能经TLR4依赖的方式促进A7r5细胞趋化、迁移和脂质累积,参与动脉粥样硬化进程。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物通过激活AKT通路抑制小鼠RAW264.7细胞自噬

目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对RAW264.7小鼠巨噬细胞自噬的影响及机制。方法分别用培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物和β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理RAW264.7细胞。采用Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的蛋白水平,采用携带双荧光蛋白和LC3基因的腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染巨噬细胞检测自噬体形成以及自噬流情况,采用蛋白激酶B(AKT)通路抑制剂LY294002(50μmol/L)预处理,观察AKT通路在oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物介导的RAW264.7细胞自噬中的作用。结果oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够降低LC3Ⅱ蛋白水平,减少自噬体数量,增加P62蛋白水平,阻断自噬流;LY294002预处理可部分恢复细胞自噬水平,改善自噬流阻断情况。结论oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物可以通过激活AKT通路抑制RAW264.7细胞的自噬。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进脐静脉内皮细胞迁移及炎症因子表达

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI antibody)复合物促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和炎症因子的表达以及与Toll样受体4(TLR4)的关系。方法 oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、脂多糖(LPS)等刺激物处理HUVEC,采用划痕实验观察HUVEC的迁移能力;根据实验分组,收集HUVEC的总蛋白和总RNA,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4的mRNA和蛋白表达。利用上述刺激物分别刺激经TLR4抑制剂TAK-242预处理和未经处理的HUVEC,实时定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、IL-1β、IL-6的蛋白水平。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物加速HUVEC迁移和诱导TLR4表达,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进MCP-1、IL-1β、IL-6三种因子的mRNA和蛋白表达,TAK-242能够显著抑制该现象。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进HUVEC迁移和相关炎症因子的表达,该过程与TLR4密切相关。

载脂蛋白E基因缺陷小鼠血清抗氧化低密度脂蛋白抗体的测定及其意义

【目的】探讨载脂蛋白 E(apoE)基因缺陷小鼠血清抗氧化低密度脂蛋白(oxLDL)抗体的检测方法,并分析血清抗oxLDL 抗体水平对 apoE 基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块面积的评估价值。【方法】分离 apoE 基因缺陷小鼠和正常小鼠血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清抗 oxLDL 抗体的水平;用油红 O 染色法和图像分析法测量小鼠动脉粥样斑块面积。【结果】apoE 基因缺陷小鼠血清抗 oxLDL 的水平显著高于正常小鼠的水平(P<0.01),apoE 基因缺陷小鼠的动脉粥样硬化斑块面积也显著高于正常小鼠,且二者之间呈显著性相关(相关系数 r 为0.638,P<0.01)。【结论】apoE 基因缺陷小鼠血清抗oxLDL 抗体水平与其动脉粥样斑块面积的大小密切相关,是 apoE 基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块形成的一个重要指标。

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进A7r5细胞钙化及炎症因子表达

目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对大鼠血管平滑肌A7r5细胞钙化、炎症因子表达的影响以及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法分别用oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物干预刺激大鼠A7r5细胞系不同时间,采用或不采用TLR4抑制剂TAK-242处理。茜素红染色观察细胞钙化结节,实时荧光定量PCR和Western blot法检测平滑肌蛋白22α(SM22α)和RUNX家族转录因子2(RUNX2)的mRNA和蛋白水平,ELISA检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;A7r5细胞给予TNF-α刺激后,进一步检测SM22α和RUNX2 mRNA和蛋白水平的变化。结果oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够促进A7r5细胞钙化结节增多,SM22α表达减少而RUNX2明显上升,促进炎症因子TNF-α的表达,TLR4抑制剂能够缓解这一现象;外加不同浓度的TNF-α能够使A7r5细胞SM22α表达下降,RUNX2表达增加。结论oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促使A7r5细胞表达炎症因子TNF-α增加,并由此促进细胞发生钙化,同时使细胞由收缩表型向成骨表型发生转变,TLR4参与这一过程。

氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞活性氧生成并诱导其凋亡

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/aβ2GPI)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响以及ROS活性氧(ROS)在其中的作用。方法分别用β2GPI、 aβ2GPI、β2GPI/aβ2GPI复合物、 oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、 oxLDL/β2GPI/兔IgG(R-IgG)复合物、 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物刺激HUVEC,利用Western blot法检测凋亡相关蛋白BAX、 Bcl2和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡率、二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)标记结合流式细胞术检测细胞ROS水平; CCK-8法检测各处理组对HUVEC活力的影响;采用抗氧化剂罗布麻宁(apocynin)或二苯基碘氯化物(DPI)预处理后观察ROS水平的改变以及对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡的影响。结果 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物能显著降低HUVEC的活力,增加细胞BAX、 c-caspase-3蛋白水平,降低Bcl2蛋白水平,促进HUVEC凋亡; oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物引起细胞ROS水平升高,抗氧化剂处理后,细胞内ROS水平降低,细胞凋亡减少。结论 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物可以通过提高ROS来诱导HUVEC凋亡。