抗p53融合蛋白单克隆抗体的性质鉴定

目的 :研制出能特异与p5 3结合的单克隆抗体 ,使对 p5 3的检测得到更为广泛的应用。 方法 :以原核表达的 p5 3-GST融合蛋白为免疫原 ,常规方法作细胞融合 ,间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)双筛和免疫组织化学(IHC)筛选 ,将能稳定分泌抗人p5 3单抗的杂交瘤细胞株的细胞上清 (命名为M12 6 )与常用p5 3进口单抗PAB180 1(ZYMED公司 )作对比实验。结果 :此单抗适用于ELISA、IHC、免疫印迹及免疫沉淀等方面的研究 ,并且在一定程度上优于PAB180 1。结论 :新制备的单抗M12 6可考虑取代进口单抗PAB180 1而用于p5 3的表达及突变研究。

雷公藤甲素对肝细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究雷公藤甲素对人源性肝细胞(L-02细胞)增殖和凋亡的影响,为临床应用雷公藤甲素治疗肝脏疾病,防治雷公藤甲素肝毒性的不良反应提供实验依据。方法:体外培养L-02细胞,用10,30,50 nmol.L-1的雷公藤甲素处理细胞48 h后,采用台盼蓝染色后细胞计数的方法和BrdU掺入后流式细胞仪检测的方法检测细胞的生长和增殖能力;PI单染后流式细胞仪检测细胞周期中细胞分布的百分率;AV/PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡率;Western blot检测细胞中p21和p53的蛋白表达含量。结果:与对照组相比,10,30,50 nmol.L-1的雷公藤甲素处理组,细胞数目从(2.72±1.14)×105个/mL分别减少到(1.95±0.38)×105,(1.44±0.44)×105,(6.97±0.47)×104个/mL;BrdU阳性细胞数从(7.67±0.51)%分别减少到(5.67±0.29)%,(4.05±0.14)%,(2.51±0.15)%;阻滞在G1期的细胞百分率从65.39%分别上调至68.47%,71.19%,83.98%;细胞凋亡率从(20.54±1.44)%分别上调至(28.02±0.93)%,(36.79±0.49)%,(43.35±1.12)%;p21和p53的蛋白表达水平上调,呈量效性关系。结论:雷公藤甲素可以通过上调p21的表达,将细胞阻滞在G1期,抑制L-02细胞的生长和增殖;同时通过上调p53的表达诱导L-02细胞的凋亡。