还原型谷胱甘肽联合护肝清脂片治疗非酒精性脂肪性肝病患者疗效研究

目的探讨应用还原型谷胱甘肽联合护肝清脂片治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者的疗效。方法2020年2月~2022年2月我院诊治的61例NAFLD患者,被随机分为对照组30例和观察组31例,分别给予还原型谷胱甘肽治疗或在此基础上联合护肝清脂片治疗6个月。依据文献评估中医症状评分,采用ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、IL-8、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)、可溶性白细胞分化抗原163(sCD163)、成纤维细胞生长因子-21(FGF21)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和脂联素(APN)水平。结果在治疗6个月末,观察组神疲乏力、腹胀满、肝区不适、粪便不畅、尿黄、形体偏胖、面色萎黄和口苦口淡评分分别为(0.6±0.1)、(0.9±0.1)、(0.8±0.1)、(0.6±0.1)、(0.8±0.1)、(0.8±0.1)、(0.7±0.1)和(1.2±0.2),均显著低于对照组【分别为(1.2±0.1)、(1.4±0.2)、(1.6±0.2)、(1.1±0.1)、(1.4±0.2)、(1.6±0.2)、(1.1±0.2)和(1.9±0.3),P<0.05】;观察组血清TNF-α、IL-6、IL-8和hs-CRP水平分别为(20.3±4.1)ng/L、(22.9±3.4)mg/L、(132.9±16.6)ng/L和(12.5±2.1)mg/L,均显著低于对照组【分别为(27.9±3.6)ng/L、(27.5±3.1)mg/L、(167.5±18.2)ng/L和(16.5±2.7)mg/L,P<0.05】;观察组血清TC、TG和LDL-C水平分别为(4.2±0.4)mmol/L、(1.5±0.2)mmol/L和(2.3±0.4)mmol/L,均显著低于对照组【分别为(6.3±0.5)mmol/L、(2.9±0.3)mmol/L和(3.1±0.4)mmol/L,P<0.05】;观察组血清vaspin、PAI-1、FGF21水平分别为(1.1±0.2)μg/L、(8.2±1.6)ng/mL和(143.5±16.8)pg/mL,均显著低于对照组【分别为(1.5±0.2)μg/L、(10.4±2.3)ng/mL和(181.6±19.7)pg/mL,P<0.05】,而血清APN和sCD163水平分别为(15.7±2.4)μg/mL和(76.8±9.1)ng/mL,显著高于对照组【分别为(12.1±3.5)μg/mL和(62.3±7.4)ng/mL,P<0.05】。结论应用还原型谷胱甘肽联合护肝清脂片治疗NAFLF患者可显著改善中医症状,降低血脂和炎症因子水平,需要进一步临床验证。

护肝清脂片质量标准研究

目的:建立中药复方新药护肝清脂片的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法对护肝清脂片中的山楂、泽泻、三七进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定该制剂中熊果酸的含量。结果:薄层色谱显色清晰且阴性对照无干扰。熊果酸在40～200μg/mL浓度范围内线性关系良好,r=1.000,平均加样回收率为99.05%,RSD为1.3%。结论:该方法操作简便,结果准确、重复性好,可用于护肝清脂片的质量控制。

护肝清脂片对非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏蛋白质合成及胆汁代谢的影响

目的:观察护肝清脂片对非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏蛋白质合成及胆汁代谢的影响。方法:将60只雄性SD大鼠按体质量随机分为正常对照组、模型组、非诺贝特组及护肝清脂片高、中、低剂量组。采用高脂饲料边造模边给药,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水,连续灌胃10 w后,行腹主动脉采血并处死所有大鼠,收集血清,并测定各组大鼠血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白、总胆红素、间接胆红素及胆汁酸等指标。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清总蛋白、球蛋白、总胆红素、间接胆红素及胆汁酸水平显著升高(P<0.05)。而护肝清脂片各剂量组及非诺贝特组大鼠体内血清总蛋白、球蛋白、总胆红素、间接胆红素及胆汁酸水平均保持在正常范围内,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:护肝清脂片能阻止长期高脂饲料喂养对大鼠机体的损伤,使肝脏蛋白质合成及胆汁代谢维持正常。

护肝清脂片对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏中AMPK通路激活及NF-κB-p65蛋白的影响

目的探讨护肝清脂片对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂质代谢和炎症反应的影响及可能的作用机制。方法将大鼠随机分为6组:模型组、正常组、非诺贝特组(0.1 g/kg)、护肝清脂片低(0.54 g/kg)、中(1.08 g/kg)、高(2.16 g/kg)剂量组。在高脂饲料造模的同时给予相应的药物持续给药12周。HE染色观察各组肝脏形态学及病理学变化,采用全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平及肝组织TG、CHOL水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝组织TNF-α、IL-6、CRP水平。q RT-PCR技术检测肝组织SREBP-1c、FASN的m RNA水平,Western blotting检测肝组织p-AMPK、SREBP-1c、FASN及NF-κB-p65的蛋白水平。结果护肝清脂片中、高剂量组能减轻NAFLD大鼠肝脏脂质沉积,显著降低其血清TG、CHOL、AST、ALT水平,同时降低肝组织TNF-α、IL-6、CRP水平。护肝清脂片中、高剂量组显能著升高NAFLD大鼠肝脏p-AMPK的蛋白表达水平,降低SREBP-1c、FASN及NF-κB-p65的表达水平。结论护肝清脂片可能通过激活AMPK通路改善肝脏脂质代谢及抑制NF-κB活性减轻肝细胞炎症反应,缓解NAFLD进程。

基于网络药理学的护肝清脂片治疗非酒精性脂肪肝病分子机制研究

目的:利用网络药理学的方法研究护肝清脂片治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的物质基础及作用机制。方法:在TCMSP、BATMAN-TCM数据库检索护肝清脂片全方药材的有效活性成分及其靶点,以类药性(DL≥0.18)和口服利用度(OB≥30%)作为筛选条件,剔除无作用靶点的活性成分,但对文献有报道的化学成分依旧保留。在OMIM、TTD数据库中检索NAFLD的治疗靶点并与药物活性成分靶点做交集,Cytoscape软件构建护肝清脂片-活性成分、活性成分-NAFLD治疗靶点网络,利用DAVID和KEGG数据库对潜在靶点进行富集分析,ClueGo对核心靶点进行Go分析,分析后发现护肝清脂片治疗NAFLD的通路涉及toll样受体信号通路、脂肪细胞因子信号通路、细胞凋亡信号通路等,所得结果通过动物实验进行验证。24只SD雄性大鼠随机分为3组:正常对照组、模型组、护肝清脂片组,持续造模10 w后处死取大鼠肝脏,Western blot和qRT-PCR技术检测大鼠肝组织相关通路的关键蛋白及mRNA的表达情况。结果:护肝清脂片能显著降低高脂饮食大鼠体质量、肝指数及肝脏TC、TG、TNF-α、IL-6水平及p-ASK1蛋白表达,显著升高其肝脏CPT1α mRNA及蛋白表达,显著降低其肝脏MYD88、TLR4 mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论:本研究通过网络药理学的方法,成功构建了护肝清脂片-活性成分-NAFLD治疗靶点网络,预测护肝清脂片治疗NAFLD的物质基础和作用机制,并通过动物实验进行初步验证,结果与网络药理学预测结果相符。护肝清脂片及其活性成分可能通过影响脂肪细胞因子信号通路、toll样受体信号通路、细胞凋亡信号通路对NAFLD起到治疗作用。

护肝清脂片对脂肪变性肝细胞甘油三酯代谢及氧化应激水平的影响

目的研究护肝清脂片药物血清对脂肪变性肝细胞的甘油三酯代谢以及氧化应激水平的影响。方法以不同浓度游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)混合物(油酸和棕榈酸)孵育Hep G2 24h,建立并筛选最佳Hep G2脂肪变性模型,分别以大鼠空白血清和非诺贝特药物血清为对照,采用油红O染色、试剂盒检测等方法检测护肝清脂片药物血清对Hep G2脂肪变性细胞模型脂滴形态、甘油三酯含量以及氧化应激相关指标的变化。结果护肝清脂片药物血清明显减小Hep G2细胞内脂滴数量和大小,降低细胞内甘油三酯、活性氧和丙二醛含量,同时增加总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性和谷胱甘肽含量。结论护肝清脂片药物血清抑制游离脂肪酸诱导的Hep G2细胞脂肪变性,其可能与清除Hep G2细胞内活性氧自由基以及提高Hep G2细胞的抗氧化能力、减轻细胞氧化应激损害有关。

护肝清脂片对非酒精性脂肪肝大鼠的药效学研究

目的:研究护肝清脂片对非酒精性脂肪肝的药效情况。方法:大鼠按体重随机分为空白组、模型组、非诺贝特组(0.1g/kg)、护肝清脂片高(2.16g/kg)、中(1.08g/kg)、低剂量组(0.54g/kg)。采用高脂饲料造模,同时给予各组大鼠相应的药物连续10周。实验结束后,腹主动脉采血并处死所有大鼠,观察大鼠肝组织病理改变情况,并测定各组大鼠的血脂、肝指数、血糖、肝脏抗氧化能力等指标。结果:相较于模型组,护肝清脂片高、中剂量组大鼠的肝指数和MDA都明显下降;SOD、CAT、TAOC则明显升高。结论:护肝清脂片高(2.16g/kg)、中(1.08g/kg)剂量组能有效改善及预防非酒精性脂肪肝模型大鼠脂肪变性及炎症损伤,具有降低血脂水平、提高抗氧化能力等疗效。