护肝解毒方调控NAFLD大鼠机制的网络药理学及实验研究

目的运用网络药理学等生物信息学技术预测以及非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型实验验证研究,揭示护肝解毒方改善NAFLD的主要作用机制。方法通过网络药理学方法筛选出护肝解毒方主要作用成分及其NAFLD主要作用靶点,并进行基因通路分析和GO富集分析,定位护肝解毒方作用的关键通路和生物学功能。动物实验采用Wistar雄性大鼠30只随机分为正常组、模型组、护肝解毒方组,每组10只。检测实验前后各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)、肝脏组织活性氧(ROS)等生化指标、肝组织病理以及NAFLD关键靶点蛋白mRNA表达水平变化。结果网络药理学方法筛选出了护肝解毒方9个主要作用成分以及12个NAFLD相关作用靶点,预测出沉默信息调节因子1(SIRT1)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBF1)等是护肝解毒方主要成分-NAFLD相关作用靶点中的核心蛋白;KEGG通路分析和GO富集分析表明护肝解毒方主要作用靶点与NAFLD的相关信号通路、病理和生物过程密切相关。动物实验生化指标检测显示模型组大鼠的ALT、AST、γ-GT、TC、TG、FBG、ROS等指标均较正常组显著升高,护肝解毒方组大鼠的ALT、AST、γ-GT、TC、TG、FBG、ROS等指标较模型组显著降低,差异均有显著统计学意义(P<0.01);HE染色可见护肝解毒方对NAFLD大鼠肝脏组织脂肪变性具有明显的减轻作用;Real-TimePCR实验显示,模型组大鼠肝脏Sirt1 mRNA表达水平显著低于正常组,Srebp1 mRNA表达水平显著高于正常组,护肝解毒方组大鼠肝脏Sirt1 mRNA表达显著高于模型组,Srebp1 mRNA表达显著低于模型组,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论护肝解毒方能有效调控NAFLD大鼠SIRT1和SREBF1等肝脂代谢相关基因表达、改善糖脂代谢、减少肝脏氧化应激,减轻肝细胞脂肪变性。

解毒护肝通络方对药物性肝损伤小鼠的保护作用及其对肠道菌群和肠黏膜屏障的影响

目的探讨解毒护肝通络方对药物性肝损伤(DILI)小鼠的保肝作用及其机制。方法将C57BL/6N小鼠60只,随机分为正常组、对乙酰氨基酚(APAP)组、阳性药(水飞蓟宾)组及解毒护肝通络方高、中、低剂量组。上午采用APAP药液灌胃复制DILI小鼠模型,下午灌胃相应药物治疗,持续14天。小鼠处死后,收集血清、肝脏、回肠、结肠组织以及粪便用于后续指标检测。结果与正常组比,APAP组小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的含量或活性均显著升高(P<0.01),肝脏、回肠和结肠组织均出现病理损伤,小肠绒毛高度、隐窝深度、菌群丰富度和多样性、肠道组织闭合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达水平以及拟杆菌门和S24-7相对丰度均显著降低(P<0.01,P<0.05),厚壁菌门、厚壁菌门与拟杆菌门比值(F/B)和毛螺菌科相对丰度升高(P<0.01,P<0.05)。与APAP组比,解毒护肝通络方能显著改善小鼠肝功能以及肝脏、回肠和结肠组织病理损伤,降低血清LPS含量(P<0.01),升高小肠绒毛高度、隐窝深度、菌群丰富度和多样性、肠道组织中occludin和ZO-1蛋白表达水平以及拟杆菌门、S24-7的相对丰度(P<0.01,P<0.05),降低F/B、厚壁菌门和毛螺菌科相对丰度(P<0.01)。结论解毒护肝通络方可能通过恢复肠道菌群失调,保护肠黏膜屏障,降低肠道通透性,进而达到保肝的目的。

解毒护肝方防治APAP致药物性肝损伤作用与肠道微生态的相关性探讨

目的:探讨解毒护肝方防治药物性肝损伤(DILI)的作用与肠道微生态的相关性。方法:60只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟宾组及解毒护肝方低、中、高剂量组。采用对乙酰氨基酚(APAP)药液灌胃复制DILI模型,造模同时给予相应药物治疗,连续14 d。半自动生化仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)的含量或活性,苏木素-伊红(HE)染色法观察肝脏病理形态,16SrRNA测序法分析粪便中肠道菌群组成结构。结果:与正常组比,模型组小鼠血清中ALT、AST、DBIL、TBIL的含量或活性均显著升高(P<0.01),肝细胞内可见大量的嗜酸性变和炎性细胞浸润,Chao1、Observed species、Simpson和Shannon指数均显著降低(P<0.01或P<0.05),厚壁菌门、变形菌门相对丰度以及厚壁菌门/拟杆菌门(F/B)值均明显升高(P<0.01或P<0.05),拟杆菌门相对丰度明显降低(P<0.05)。与模型组比,解毒护肝方能显著改善肝组织病理损伤,显著降低血清中ALT、AST、DBIL、TBIL的含量或活性(P<0.01或P<0.05),显著升高Chao1、Observed species、Simpson、Shannon指数以及拟杆菌门相对丰度(P<0.01或P<0.05),显著降低厚壁菌门、变形菌门相对丰度以及F/B值(P<0.01)。相关性分析结果表明,厚壁菌门、变形菌门相对丰度与肝损伤标志物成正相关,而拟杆菌门相对丰度与肝损伤标志物成负相关。结论:解毒护肝方防治DILI的机制可能与改善肠道菌群失衡有关。

护肝解毒方对药物性肝损伤及相关炎症因子作用研究

[目的]探讨中药护肝解毒方对药物性肝损伤及相关炎症因子的作用。[方法]85例药物性肝损伤患者随机分为治疗组和对照组,治疗组给予护肝解毒中药煎剂治疗,对照组予多烯磷脂酰胆碱治疗。在6周的疗程内观察2组患者治疗前后肝功能及炎症因子变化。[结果]治疗组治疗前后的ALT、AST、TNF-α、IL-6值差异有统计学意义(P<0.01),TBIL、ALP、TBA值差异有统计学意义(P<0.05)。对照组治疗前后的ALT差异有统计学意义(P<0.01),AST、TNF-α值差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组的痊愈率较对照组有显著差异(P<0.01),治疗组治疗后的ALT、AST、TNF-α、IL-6值较同期对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]护肝解毒方对药物性肝损伤的临床疗效及相关炎症因子的改善有显著作用。

苦参解毒护肝方联合脉冲电流穴位刺激对慢性乙型病毒性肝炎患者的影响研究

目的:探究苦参解毒护肝方结合脉冲电流穴位刺激对慢性乙型病毒性肝炎患者的影响。方法:将上海交通大学附属新华医院消化内科收治的103例慢性乙型病毒性肝炎患者以随机数字表法分为对照组(51例)、观察组(52例),对照组患者采取甘草酸二铵治疗,观察组患者采取甘草酸二铵+苦参解毒护肝方结合脉冲电流穴位刺激治疗,比较各组患者治疗效果、治疗前后肝功能及中医证候积分(胁肋胀痛、纳呆呕恶、尿黄、身目发黄、舌苔黄腻等)变化、HBV-DNA转阴率及HBeAg转阴率、不良反应。结果:与观察组(92.31%)相比,对照组有效率(78.43%)较低(P<0.05);治疗前,两组患者肝功能及中医证候积分(胁肋胀痛、纳呆呕恶、尿黄、身目发黄、舌苔黄腻等)比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后各组患者肝功能及中医证候积分(胁肋胀痛、纳呆呕恶、尿黄、身目发黄、舌苔黄腻等)均改善,观察组治疗后肝功能及中医证候积分(胁肋胀痛、纳呆呕恶、尿黄、身目发黄、舌苔黄腻等)优于对照组(P<0.05);观察组HBV-DNA转阴率及HBeAg转阴率均高于对照组(P<0.05);观察组、(3.85%)与对照组(15.69%)不良反应率均较低(P>0.05)。结论:苦参解毒护肝方结合脉冲电流穴位刺激治疗慢性乙型病毒性肝炎疗效佳,安全可靠,值得应用。

解毒护肝方抑制NLRP3炎症小体活化缓解对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤

目的:探讨解毒护肝方对对乙酰氨基酚(APAP)所致小鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其机制。方法:60只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组以及解毒护肝方低、中、高剂量组。APAP造模同时,分别灌胃给予相应药物治疗,连续14 d。实验结束后,采集血清和肝组织,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18)的活性或含量;苏木精-伊红(HE)染色法观察肝脏病理形态学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测肝脏中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)的基因蛋白表达水平。结果:与正常组比,模型组小鼠血清AST、ALT、DBIL、TBIL、IL-1β和IL-18的活性含量均显著升高(P<0.01),肝脏中NLRP3和caspase-1基因蛋白表达明显上调(P<0.01),肝细胞内可见嗜酸性变和炎性细胞浸润;与模型组比,解毒护肝方各剂量组能明显降低血清AST、ALT、DBIL、IL-1β和IL-18的活性或含量以及肝脏中NLRP3和caspase-1基因蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05),改善肝脏病理损伤。结论:解毒护肝方可有效防治APAP诱导的小鼠ALI,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体介导的炎症反应有关,为临床治疗ALI提供了用药实验依据。

解毒护肝方经PPARs信号通路激活抗炎系统治疗药物性肝损伤的作用研究

目的观察解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠炎性因子以及肝组织过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)mRNA和过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)mRNA表达的影响,探讨其保肝作用机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为6组:正常组、模型组、阳性对照(水飞蓟宾胶囊)组(44.1 mg·kg^-1)和解毒护肝方高剂量组(63 g·kg^-1)、中剂量组(31.5 g·kg^-1)、低剂量组(15.75 g·kg^-1),采用灌服对乙酰氨基酚(APAP)复制药物性肝损伤大鼠模型,造模同时给予相应剂量药物干预,连续给药30 d。检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、直接胆红素(DBIL)的含量,苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织形态学变化,运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、5-脂氧合酶(5-LOX)、白三烯B4(LTB4)、白细胞介素-6(IL-6)的含量,采用qRT-PCR技术检测肝组织PPARαmRNA和PPARγmRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清中AST、ALT、DBIL、ALB、TNFα、LTB4和5-LOX的含量显著升高(P<0.05,P<0.01),PPARαmRNA表达显著下调(P<0.01),PPARγmRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,解毒护肝方低剂量组能明显降低大鼠血清AST、ALT和DBIL含量(P<0.05),解毒护肝方中剂量组能明显降低血清AST、ALT和5-LOX含量(P<0.01,P<0.05),解毒护肝方的各剂量组均能上调PPARαmRNA的表达(P<0.05,P<0.01),下调PPARγmRNA的表达(P<0.01)。结论解毒护肝方对APAP诱导的大鼠肝损伤有保护作用,这种作用可能与调节PPARα、PPARγ参与抗炎作用有关。

解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠TLR3/TNF-α/JNK2信号通路的影响

目的观察解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠TLR3/TNF-α/JNK2信号通路的影响。方法采用对乙酰氨基酚灌胃制作大鼠肝损伤模型。将实验大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阳性对照组和解毒护肝方高、中、低剂量组,各给药组给予相应药液灌胃,正常组和模型组给予生理盐水灌胃。生化分析仪检测血清AST、ALT活性和总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)含量;RT-PCR和Western blot分别检测肝组织JNK2基因和蛋白的表达;酶标仪检测肝组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;免疫组化染色观察Toll样受体3(TLR3)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠ALT、AST、DBIL、TNF-α水平显著升高(P<0.01),JNK2 mRNA和p-JNK2、TLR3蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,解毒护肝方中、低剂量组大鼠AST、ALT活性显著降低(P<0.05,P<0.01),解毒护肝方低剂量组大鼠DBIL含量显著降低(P<0.05),解毒护肝方高剂量组大鼠TNF-α含量显著降低(P<0.01),解毒护肝方高、中剂量组大鼠JNK mRNA和TLR3蛋白表达均显著下调(P<0.05,P<0.01),p-JNK2蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠有明显的保护作用,以中、低剂量组效果最为明显,其机制可能与调控TLR3/TNF-α/JNK2信号通路有关。

化浊解毒护肝方加减治疗脂肪肝30例

目的:观察基于"浊毒学说"所组方剂化浊解毒护肝方对脂肪肝(FLD)患者症状、体征、B超、TG、TC、HDL-C、LDL-C、ALT、AST、GGT等的影响,寻求治疗FLD有效的中医药基本方。方法:采用随机双盲法将60例患者分为治疗组和对照组各30例,治疗组给予化浊解毒护肝方(泽泻、决明子、生薏苡仁、生山楂、苍术、茵陈、虎杖、姜黄、延胡索、柴胡、郁金)加减口服治疗,对照组给予西药治疗(血脂康+维生素C),30 d为1个疗程,治疗2个疗程后比较2组疗效。结果:治疗8 w后,治疗组治愈18例,显效8例,有效2例,总有效率93.3%;对照组治愈5例,显效6例,有效6例,无效13例,总有效率56.7%,治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。结论:化浊解毒护肝方加减治疗FLD疗效佳,值得研究和推广。

解毒护肝方对APAP肝损伤大鼠HSP70蛋白表达的影响

目的:通过检测大鼠血清肝功能指标、血清生物标志物、HSP70蛋白表达,观察解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠的干预作用及其机制。方法:将大鼠按体重随机分为正常组,模型组,水飞蓟宾阳性对照组,解毒护肝方高、中、低剂量组。其中正常组和模型组给予生理盐水灌胃,其余各组给予相应药液灌胃,连续给药30天。实验结束时,检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D-BIL)、苹果酸脱氢酶(MDH)、谷氨酸脱氢酶(GLDH)、精氨酸酶(ARG)的含量变化,用免疫组化的方法观察热应激蛋白(HSP70)的蛋白表达情况。结果:对乙酰氨基酚大鼠血清AST、ALT、DBIL、ARG、GLDH、MDH含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),解毒护肝方中、低剂量组能明显降低转氨酶活性及胆红素含量(P<0.05,P<0.01),高剂量组能显著降低肝损伤大鼠血清MDH含量(P<0.05),中剂量组明显降低ARG、MDH的含量(P<0.05)。肝损伤大鼠HSP70蛋白阳性表达增多;水飞蓟宾对照组以及解毒护肝方高、中、低剂量组阳性表达明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论:解毒护肝方各剂量组均有一定的护肝作用,其作用机制可能是通过降低HSP70蛋白表达来实现的。

解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠JAK2/STAT3通路的影响

目的:观察解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠JAK2/STAT3通路的干预作用。方法:大鼠随机分为:模型对照组、水飞蓟宾44.1 mg/kg组、解毒护肝方15.8、31.5、63 g/kg组,另设空白对照组。对乙酰氨基酚造模同时,分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续30日,生化法检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D-BIL)的变化,用酶标仪检测血清白介素13(IL-13)、白介素22(IL-22)、白介素6(IL-6)的含量;HE染色观察肝组织病理形态;RT-PCR和Western-blot技术检测肝组织中STAT3的基因、蛋白表达情况以及p-STAT3蛋白表达情况;免疫组化法观察肝组织p-JAK2的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清AST、ALT活性及D-BIL含量均显著升高,血清IL-13水平显著升高,肝脏p-STAT3和p-JAK2蛋白表达明显上调。与模型组比较,解毒护肝方15.8 g生药/kg、31.5 g生药/kg组能明显降低血清AST、ALT活性及D-BIL含量,对肝细胞病理形态具有一定的保护作用。解毒护肝方31.5 g生药/kg、63 g生药/kg组能显著下调肝组织p-STAT3和p-JAK2蛋白表达水平。结论:解毒护肝方各剂量组能不同程度地防治对乙酰氨基酚所致的肝损伤,但结合临床安全、有效的用药原则,以31.5 g生药/kg组效果较好,其护肝作用可能通过调节JAK2/STAT3途径来实现。